DB21-T 3286-2020 水質(zhì) 5種磺胺類抗生素的測(cè)定 固相萃取-高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法

13.020.40Z

10DB21 21/T

3286—2020水質(zhì)

5

種磺胺類抗生素的測(cè)定固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法 遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)

布DB21/T

3286— 前 言

.............................................................................II1

適用范圍

............................................................................12

規(guī)范性引用文件

...................................................................... 13

方法原理

............................................................................ 14

干擾和消除

.......................................................................... 15

試劑

................................................................................ 16

儀器和設(shè)備

.......................................................................... 27

樣品

................................................................................ 28

分析步驟

............................................................................ 39

結(jié)果計(jì)算與表示

...................................................................... 510

精密度和準(zhǔn)確度

..................................................................... 611

質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

................................................................. 712

廢物處理

........................................................................... 7附錄

A

（資料性附錄）

方法的精密度和準(zhǔn)確度............................................. 8DB21/T

3286—本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T

1.1—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》給出的規(guī)則編寫(xiě)。本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由大連市市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省生態(tài)環(huán)境廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：付曉燕、劉蓮蓮、楊碩、楊萌。我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評(píng)估及復(fù)審。30。58系電話IIDB21/T

3286—

警告：實(shí)驗(yàn)中所使用的甲醇、磺胺類抗生素屬于有毒有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，溶液配制過(guò)程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。1適用范圍5

種磺胺類抗生素的高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水、海水、工業(yè)廢水和生活污水中

5

種磺胺類抗生素的測(cè)定。當(dāng)樣品體積為

ml，濃縮定容至

ml，進(jìn)樣體積為

μl時(shí)，本方法磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧0.01

μg/L、0.01

μg/L、0.01

μg/L、0.009

μg/L和0.01

μg/L，測(cè)定下限分別為0.04

μg/L、0.04

μg/L、0.04

μg/L、0.036

μg/L，測(cè)定上限均為100

μg/L。2 規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T

6682

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T

14581

湖泊和水庫(kù)采樣技術(shù)指導(dǎo)HJ

91.1

污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范（部分代替HJ/T

污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范）HJ/T

地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ/T

地下水環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ

442

近岸海域環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)范HJ

493

樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定3 方法原理水樣經(jīng)固相萃取后，水中磺胺類抗生素經(jīng)液相色譜儀分離，用串聯(lián)質(zhì)譜儀在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM件下測(cè)定，根據(jù)保留時(shí)間和特征離子對(duì)定性，內(nèi)標(biāo)法以峰面積（或峰高）定量。4 干擾和消除等方式降低或消除。5 試劑5.5.3

磺胺甲基嘧啶-

C6標(biāo)準(zhǔn)貯備液：5.5.3

磺胺甲基嘧啶-

C6標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ =100.0

。準(zhǔn)確稱取適量的磺胺甲基嘧啶-

C6標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.4.2），用甲醇（100.0

mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備將磺胺甲基嘧啶-

C6標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.5.35.1）稀釋至

，現(xiàn)用現(xiàn)配。除非另有說(shuō)明，分析時(shí)均使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)級(jí)純?cè)噭?，?shí)驗(yàn)用水符合

66825.1

甲醇（3OH）：液相色譜純。5.2

甲酸（HCOOH）。5.3

甲酸溶液：（）。量取

ml甲酸（）緩慢加入1

L實(shí)驗(yàn)用水中，混勻。5.4

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5.4.1

99%。5.4.2

磺胺甲基嘧啶-C內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥。5.5

標(biāo)準(zhǔn)溶液5.5.1

磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0

mg/L。準(zhǔn)確稱取適量的每種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.4.1），用甲醇配成100.0

mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，或直接購(gòu)買(mǎi)有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存，可穩(wěn)定保存20天，或參照制造商的產(chǎn)品說(shuō)明保存。5.5.2

磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.00

mg/L。將磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.5.11.0

mg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。1313液，或直接購(gòu)買(mǎi)有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說(shuō)明保存使用。5.5.4

磺胺甲基嘧啶-C標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.0

mg/L。135.6

氮?dú)猓杭兌取?9.9%。6 儀器和設(shè)備6.1

高效液相色譜/三重四極桿質(zhì)譜儀：高效液相色譜儀具備梯度洗脫功能；三重四極桿質(zhì)譜儀配有電噴霧離子化源（ESI）。6.2

色譜柱：填料為硅膠基質(zhì)C18，粒徑

100

mm，內(nèi)徑2.1

mm，或其他等效色譜柱。6.3

固相萃取裝置。6.4

濃縮裝置：K-D

濃縮器、氮吹儀等性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。6.5

濾膜：針式有機(jī)相過(guò)濾器，孔徑0.22

μm，直徑13

，玻璃纖維、親水性聚丙烯、親水性聚四氟乙烯（PTFE）或其它等效材質(zhì)。6.6

固相萃取柱：填料為二乙烯苯和

N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為

6

mg。6.7

ml。6.8

采樣瓶：

ml棕色玻璃瓶，螺旋蓋（具聚四氟乙烯涂層的密封墊）。6.9

微量注射器：10

μl、50

μl、100

μl、1

。7 樣品7.1 樣品采集與保存min

950.5955.030707.030707.590108.590109.09510.095DB21/T

3286—按照GB/T

14581、HJ

91.1、HJ/T

91、HJ/T

164、HJ

442和

493的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集和保存。采集樣品時(shí)，向采樣瓶（）中加入甲酸（）

μl，然后采集樣品至滿瓶，擰緊螺旋蓋密封，搖勻。水樣0~4℃冷藏避光保存，48

h內(nèi)完成分析。7.2 試樣制備活化：用10

ml甲醇（5.1）活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤(rùn)。再用10

實(shí)驗(yàn)用水活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤(rùn)。上樣：水樣上樣前放置至室溫，準(zhǔn)確量取100

ml水樣，水樣以3~5

ml/min淋洗：用10

ml實(shí)驗(yàn)用水淋洗固相萃取柱，將在固相萃取柱上保留較弱的雜質(zhì)淋洗下來(lái)，棄去淋洗液。洗脫：用10

ml甲醇（5.1）洗脫富集后的固相萃取柱，并用接收管接收甲醇洗脫液。濃縮：將上述提取溶液濃縮至低于

ml近干，加甲酸溶液（5.3）定容到

ml，最后加入內(nèi)標(biāo)使用液10.0

μl，經(jīng)0.22

μm濾膜（）過(guò)濾，置于棕色樣品瓶（6.7）中，待測(cè)定。7.3 空白試樣的制備用實(shí)驗(yàn)用水代替樣品按照試樣制備（7.2）相同操作步驟，制備空白試樣。8 分析步驟8.1 儀器參考條件8.1.1液相色譜儀參考條件流動(dòng)相：流動(dòng)相A為甲醇（5.1），流動(dòng)相B為甲酸溶液（），線性梯度洗脫程序見(jiàn)表1。柱溫：40進(jìn)樣體積：10

μl；流速：0.2

ml/min；表1

液相色譜流動(dòng)相線性梯度洗脫程序表1

液相色譜流動(dòng)相線性梯度洗脫程序m/zms251.0→92.0*203030251.0→156.015265.1203528265.116279.1203028279.115281.1→92.1*203028281.1→156.115254.0→92.203030254.0→156.2013

6271.0→162.0*203528DB21/T

3286—正離子模式（正離子模式（

離子化電壓：3000

V；離子源溫度：檢測(cè)方式：MRM，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件見(jiàn)表2。表2

目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件表2

目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件8.2.1 校準(zhǔn)曲線的建立取一定量磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.5.25.3）水溶液中，制備至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度分別為4

μg/L、10.0

2

μg/L、50.0

μg/L和100

每毫升標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中加入10.0

μl內(nèi)標(biāo)使用液（5.5.4），貯存在棕色樣品瓶（）中。標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。8.2.2標(biāo)準(zhǔn)樣品譜圖磺胺類抗生素和內(nèi)標(biāo)物的總離子流圖，見(jiàn)圖1。DB21/T

3286—（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-

（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-

C6、4：磺胺二甲嘧啶、5：磺胺間甲氧嘧13啶、6：磺胺甲惡唑）8.3 測(cè)定8.3.1 試樣測(cè)定按照與校準(zhǔn)曲線的建立（）相同的參考條件，進(jìn)樣

10

μl，進(jìn)行試樣（）的測(cè)定。5.38.3.2空白試驗(yàn)按照與校準(zhǔn)曲線的建立（）相同的參考條件，進(jìn)樣

10

7.3）的測(cè)定。9 結(jié)果計(jì)算與表示9.1 定性分析按照表2中確定的母離子和子離子進(jìn)行檢測(cè)，在相同實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中磺胺類抗生素的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素的保留時(shí)間相對(duì)偏差的絕對(duì)值應(yīng)小于2.5%度（Ksam）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子相對(duì)豐度（Kstd）進(jìn)行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在磺胺類抗生素。K=

A

×100%

........................................... 式中：K樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對(duì)豐度，%；A樣品中磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；KstdKsam相對(duì)于

Kstd的最大允許偏差Kstd5020%20Kstd25%10Kstd30%Kstd1050%DB21/T

3286—A樣品中磺胺類抗生素定量離子的峰面積（或峰高）。Kstd

=

Astdstd

×100%

.......................................... 式中：Kstd標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對(duì)豐度，%；A磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；A磺胺類抗生素酸定量離子的峰面積（或峰高）。表3 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差表3 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差當(dāng)磺胺類抗生素磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度

ρ3x

1iV

D

.......................................... （3）式中：ρ

——樣品中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度，μg/L；ρ乘積后，由標(biāo)準(zhǔn)曲線（）所得試樣中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度，μg/L；V——萃取液濃縮后的體積，；V——水樣體積，；D——樣品稀釋倍數(shù)。9.3結(jié)果表示當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于

1

mg/L

時(shí)，保留至小數(shù)點(diǎn)后三位；當(dāng)測(cè)定結(jié)果大于或等于

1

mg/L

時(shí)，保留三位有效數(shù)字。10 精密度和準(zhǔn)確度10.1 精密度3家實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)磺胺類抗生素的加標(biāo)濃度為0.050

μg/L和0.500

μg/L的地表水、廢水和海水進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定。DB21/T

3286—地表水實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.9%~10%、之間，實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在1.5%~4.2%、0.6%~1.6%之間，重復(fù)性限分別在0.009

μg/L、0.065

μg/L~0.078

μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.009

μg/L~0.012

μg/L、0.065

μg/L~0.078

μg/L之間。廢水實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.0%~10%、3.4%~8.4%之間，實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在1.3%~4.5%、0.7%~2.9%之間，重復(fù)性限分別在0.009

μg/L、0.066

μg/L~0.077

μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.010

μg/L~0.011

μg/L、0.066

μg/L~0.077

μg/L之間。海水實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.1%~10%、4.3%~7.4%之間，實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.6%~4.1%、0.3%~1.3%之間，重復(fù)性限分別在0.008

μg/L~0.0010

μg/L、0.070

μg/L之間，再現(xiàn)性限分別在0.008

μg/L~0.010

μg/L、0.071

μg/L~0.079

μg/L之間，具體見(jiàn)附錄AA.1。10.2 準(zhǔn)確度3家實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)磺胺類抗生素的加標(biāo)濃度為0.050

μg/L和0.500

μg/L的地表水、廢水和海水進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，其中地表水加標(biāo)回收率范圍在、之間；廢水加標(biāo)回收率范圍在、、附錄A中表。11 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制11.1 空白試驗(yàn)每批樣品（≤20個(gè)/批）至少做一個(gè)空白實(shí)驗(yàn)，空白試樣值低于方法檢出限。11.2 校準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r≥20間校核點(diǎn)，其測(cè)定結(jié)果與校準(zhǔn)曲線相應(yīng)點(diǎn)濃度的相對(duì)誤差應(yīng)在±以內(nèi)。11.3 精密度控制每批樣品應(yīng)至少測(cè)定10%的平行雙樣，樣品數(shù)量少于個(gè)時(shí)，應(yīng)至少測(cè)定一個(gè)平行雙樣，平行雙樣測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)在±20%以內(nèi)。11.4 準(zhǔn)確度控制每批樣品應(yīng)至少測(cè)定5%20標(biāo)回收率應(yīng)在75%~110%之間。12 廢物處理實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢液和廢物應(yīng)分類收集和保管，委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。μ

μμ0.0506.5~103.60.0090.0090.5004.6~5.70.70.0650.0650.0506.7~103.90.0100.0100.5005.7~7.20.80.0780.0780.0507.8~124.20.0110.0120.5005.2~6.31.30.0730.0730.0505.9~9.61.50.0090.0090.5004.3~5.80.60.0660.0660.0506.2~9.84.00.0090.0100.5005.5~6.71.60.0740.0740.0507.2~9.52.70.0100.0100.5003.4~7.22.60.0760.0770.0505.1~9.61.30.0100.0100.5003.5~8.42.90.0770.0790.0505.8~103.00.0100.0100.5004.2~7.21.70.0690.0690.0505.7~8.44.50.0090.0100.5005.0~6.70.70.0770.0770.0505.0~9.61.80.0110.0110.5004.7~6.21.00.0660.0660.0505.1~9.13.70.0090.0090.5004.3~6.80.30.0730.0730.0506.4~8.83.60.0090.0090.5004.7~7.41.10.0770.0770.0505.2~9.24.10.0080.0080.5004.7~6.40.60.0710.0710.0506.7~8.51.60.0090.0090.5006.0~6.70.60.0790.079DB21/T

3286—附錄

A（資料性附錄）方法的精密度和準(zhǔn)確度三家實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)2種不同濃度的樣品進(jìn)行了測(cè)定。精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果見(jiàn)表A.1和表A.2。表A.1表A.1 方法的精密度（μg/L）加標(biāo)濃度（μg/LP2SPND0.05080.2~85.683.7±6.0ND0.50087.7~88.888.4±1