脂多糖（LPS）誘導(dǎo)綿羊肺泡巨噬細(xì)胞cDNA文庫(kù)的構(gòu)建、EST分析和免疫相關(guān)基因的研究

脂多糖（LPS）誘導(dǎo)綿羊肺泡巨噬細(xì)胞cDNA文庫(kù)的構(gòu)建、EST分析和免疫相關(guān)基因的研究

摘要：本研究旨在通過(guò)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)，構(gòu)建綿羊肺泡巨噬細(xì)胞cDNA文庫(kù)，并進(jìn)行EST分析，以研究與免疫相關(guān)的基因。結(jié)果表明，綿羊肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)LPS的刺激能夠顯著影響基因表達(dá)譜，并發(fā)現(xiàn)多個(gè)免疫相關(guān)基因在這個(gè)過(guò)程中發(fā)生調(diào)節(jié)。該研究為進(jìn)一步探究綿羊免疫機(jī)制提供了重要依據(jù)。

引言：

免疫系統(tǒng)作為保護(hù)機(jī)體免受外界入侵的重要組成部分，在各種病原體感染過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。肺泡巨噬細(xì)胞作為肺部最主要的吞噬細(xì)胞，在抵抗病原體入侵過(guò)程中發(fā)揮重要作用。綿羊肺泡巨噬細(xì)胞是以粘附在肺泡上皮細(xì)胞表面的觸突細(xì)胞形式存在的，能夠吞噬和清除各種病原細(xì)菌，是綿羊肺部舒適環(huán)境的保證。

然而，肺部炎癥反應(yīng)和病原體感染時(shí)，巨噬細(xì)胞也會(huì)受到影響，細(xì)胞內(nèi)多種免疫相關(guān)基因的表達(dá)會(huì)發(fā)生變化。脂多糖（LPS）是一種廣泛存在于革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的結(jié)構(gòu)特異性抗原物質(zhì)，已被證實(shí)具有強(qiáng)烈的炎癥誘導(dǎo)作用。因此，本研究選擇脂多糖（LPS）作為刺激物，研究綿羊肺泡巨噬細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)過(guò)程中基因表達(dá)的變化情況，探索與免疫相關(guān)的基因。

材料與方法：

1.綿羊肺泡巨噬細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。選取健康綿羊肺組織，采用膠原酶IV消化法獲得單個(gè)肺泡巨噬細(xì)胞，隨后培養(yǎng)在含有10%FBS和1%抗生素的DMEM培養(yǎng)基中，并添加GM-CSF以促進(jìn)細(xì)胞分化和增殖。

2.LPS誘導(dǎo)和細(xì)胞采集。將培養(yǎng)中的綿羊肺泡巨噬細(xì)胞分為兩組，其中一組細(xì)胞用LPS進(jìn)行誘導(dǎo)，另一組用PBS作為對(duì)照。分別在0、2、4、6、8、12、24小時(shí)采集細(xì)胞，并分別轉(zhuǎn)錄成cDNA。

3.cDNA文庫(kù)構(gòu)建和EST分析。采用SMARTer?PCRcDNA合成工具構(gòu)建綿羊肺泡巨噬細(xì)胞cDNA文庫(kù)。隨后進(jìn)行EST（表達(dá)序列標(biāo)簽）測(cè)序，利用BWA軟件比對(duì)已有綿羊基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，分析綿羊肺泡巨噬細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)過(guò)程中表達(dá)的基因。

結(jié)果與討論：

本研究構(gòu)建了脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的綿羊肺泡巨噬細(xì)胞cDNA文庫(kù)，并對(duì)其進(jìn)行了EST分析。結(jié)果表明，在LPS誘導(dǎo)的過(guò)程中，綿羊肺泡巨噬細(xì)胞的基因表達(dá)譜發(fā)生了顯著變化。共鑒定到上千個(gè)基因表達(dá)譜差異明顯的EST。

通過(guò)GO（基因本體）富集分析，我們發(fā)現(xiàn)LPS誘導(dǎo)的綿羊肺泡巨噬細(xì)胞具有針對(duì)細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)的顯著上調(diào)反應(yīng)。進(jìn)一步的KEGG通路富集分析顯示，在LPS誘導(dǎo)的綿羊肺泡巨噬細(xì)胞中，多個(gè)免疫相關(guān)信號(hào)通路被激活，如核因子κB（NF-κB）信號(hào)通路、Toll樣受體（TLR）信號(hào)通路和凋亡信號(hào)通路。

通過(guò)篩選轉(zhuǎn)錄因子家族表達(dá)譜差異明顯的EST，我們發(fā)現(xiàn)多個(gè)與免疫調(diào)控相關(guān)的基因顯著上調(diào)，如STAT家族、IRF家族和NF-κB家族。這些轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，與綿羊肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)LPS誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。

結(jié)論：

通過(guò)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)，我們成功構(gòu)建了綿羊肺泡巨噬細(xì)胞cDNA文庫(kù)，并進(jìn)行了EST分析。結(jié)果表明，LPS能夠顯著影響綿羊肺泡巨噬細(xì)胞的基因表達(dá)譜，并觀察到多個(gè)與免疫調(diào)控相關(guān)的基因在該過(guò)程中發(fā)生調(diào)節(jié)。這些結(jié)果對(duì)于深入研究綿羊免疫機(jī)制、理解巨噬細(xì)胞的功能以及探索肺部炎癥的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義綜上所述，通過(guò)LPS誘導(dǎo)的EST分析，我們觀察到綿羊肺泡巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜的顯著變化，其中包括細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)的上調(diào)反應(yīng)。通過(guò)GO富集分析和KEGG通路富集分析，我們確定了多個(gè)免疫相關(guān)信號(hào)通路的激活，如NF-κB信號(hào)通路和TLR信號(hào)通路。此外，我們還發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與免疫調(diào)控相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子家族的顯著上調(diào)，如STAT家族