病原生物學(xué)與免疫學(xué)實驗

病原生物學(xué)與免疫學(xué)實驗病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室

2004年2月病原生物學(xué)與免疫學(xué)實驗室規(guī)那么微生物學(xué)實驗室是進展微生物培育鑒定及實驗的場所，是一個微生物高度集中的區(qū)域，為了防止微生物感染人體及分散，保證平安及每次實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，要求同窗遵守以下規(guī)那么：普通本卷須知進實驗室穿上實習(xí)衣，離室時脫下，要反折，并經(jīng)常進清洗。書包、衣物等勿帶入實驗室，必要的文具、實驗指點，筆記等帶入后，也要遠(yuǎn)離操作部位。實驗室內(nèi)要堅持安靜，有次序，不得高聲談笑，或隨意走動以免影響他人實驗。實驗室內(nèi)制止飲食、吸煙和用嘴潮濕鉛筆或標(biāo)簽等，也不要以手撫摸頭部等部位。做練習(xí)要堅持無菌操作操作。以防止臨床標(biāo)本及純培育物的污染，吸過菌液的吸管、毛細(xì)吸管，要投入含有2～3％來蘇兒或0.1％新潔而滅液的玻璃筒中，其它帶菌資料放在指定地點，以防止微生物污染環(huán)境。假設(shè)發(fā)生吸入菌液，割破手指等事故，應(yīng)立刻報告教師，進展預(yù)防處置。

維護公物，節(jié)約運用實驗資料、器材，如損壞公物，應(yīng)立刻向指點教師報告，登記處置。實驗終了，應(yīng)及時清理實驗室，做好衛(wèi)生，關(guān)好門、窗、水籠頭、電燈。分開實驗室前，應(yīng)在消毒液中將手浸泡5～10分鐘，再用清水洗凈。發(fā)生不測事故的處置

皮膚破傷：用生理鹽水洗凈后，涂以2％紅汞或2％碘酒。燒傷：涂以凡士林油，5％鞣酸或2％苦味酸?；瘜W(xué)藥品腐蝕傷：假設(shè)為強酸，先用大量清水沖洗，再以5％碳酸氫鈉或5％氫氧化銨溶液中和之；強堿腐蝕那么先以大量清水沖洗后，再以5％醋酸或5％硼酸洗滌中和。吸入病原菌菌液：應(yīng)立刻吐人容器內(nèi)消毒，并用1∶1000高錳酸鉀溶液或3％雙氧水漱口。菌液流灑桌面，傾倒適量消毒液于污染面浸泡半小時后抹去，再以清水擦洗干凈。嚴(yán)防火災(zāi)：實驗終了立刻封鎖電閘，煤氣閥門，如系酒精，乙醚、汽油等火種，切忌用水，可撒潑大量沙土等撲滅火苗。實驗一細(xì)菌的形狀學(xué)第一周實驗內(nèi)容

普通光學(xué)顯微鏡的運用細(xì)菌根本形狀和特殊構(gòu)造的察看細(xì)菌標(biāo)本染色檢查法〔革蘭氏染色法〕細(xì)菌動力檢查法〔懸滴法、壓滴法〕目的要求了解細(xì)菌的根本形狀及其特殊構(gòu)造。根本掌握顯微鏡的運用和保養(yǎng)。掌握接種環(huán)的運用及菌液的采取法。掌握細(xì)菌涂片的制備及革蘭氏染色方法。熟習(xí)細(xì)菌動力檢查法。一、普通光學(xué)顯微鏡的運用

顯微鏡的構(gòu)造圖顯微鏡的運用方法油鏡頭的識別顯微鏡的維護

油鏡加香柏油的原理

玻璃折射率：n=1.52香柏油折射率：n=1.515二、細(xì)菌根本形狀和特殊構(gòu)造的察看運用顯微鏡的油鏡察看各示教片，比較各菌的形狀、大小、陳列等；留意芽胞在菌體上的位置、大小；鞭毛形狀、數(shù)最及其位置；莢膜的大小及其與菌體的關(guān)系，將察看結(jié)果畫在實驗報告上。1.細(xì)菌的三種根本形狀〔示教〕球菌：鏈球菌、葡萄球菌。桿菌：大腸桿菌。螺形菌：霍亂弧菌。上述示教鏡各一臺/每室細(xì)菌的三種根本形狀表示圖⊕葡萄球菌：Figure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.鏈球菌鏈球菌〔顯微鏡下表示圖〕顯微鏡下的桿菌桿菌(bacillus)Figure2-GramstainofGram-E.colicells弧菌2.細(xì)菌的特殊構(gòu)造察看〔示教〕芽胞示教片：破傷風(fēng)桿菌。鞭毛示教片：變形桿菌。莢膜示教片：肺炎雙球菌。上述示教鏡各一臺/每室芽孢產(chǎn)芽孢細(xì)菌的種類菌體〔營養(yǎng)細(xì)胞〕芽胞鞭毛莢膜的察看：特殊染色負(fù)染色

三、細(xì)菌標(biāo)本染色檢查法常采用美藍，結(jié)晶紫等堿性染料進展染色。多數(shù)染料都是中性有機鹽。據(jù)著色基的不同可分為以下類型：堿性染料〔basicdye〕—帶正電染料。其陽離子部分為發(fā)色基團，可與細(xì)胞中帶負(fù)電的組分結(jié)合。酸性染料〔Aciddye〕—帶負(fù)電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團，可與細(xì)胞中帶正電的組分結(jié)合。細(xì)菌染色法:負(fù)染色染色1min水洗、吸干鏡檢簡單染色制備涂片標(biāo)本→染色〔一〕細(xì)菌涂片的制備普通制備涂片包括涂片、枯燥、固定三步。涂片枯燥固定固定的目的：使細(xì)菌的細(xì)胞凝固，使菌體與玻片粘得更結(jié)實；可改動菌體對染料的通透性；加熱固定可殺死細(xì)菌，比較平安。多種標(biāo)本涂片標(biāo)志表示圖

如多種標(biāo)本，可用蠟筆在玻片上劃為數(shù)格，并于玻片的反面，標(biāo)明標(biāo)本的編號。正面

反面

㈡革蘭氏染色法〔GramStain〕

初染：滴加結(jié)晶紫染液于涂片上，染1分鐘，水洗，甩干。媒染：加盧戈氏碘液，1分鐘后水洗，甩干。脫色：加95％酒精數(shù)滴于涂片上，頻頻搖3～5秒后，斜持玻片，使酒精流去，再加酒精。如此反復(fù)2～3次，直至流下的酒精無色或稍呈淡紫色時為止〔約30秒鐘〕。水洗，甩干。復(fù)染：以稀釋石炭酸復(fù)紅染液復(fù)染1分鐘后，水洗，待干或用吸水紙印干，油鏡鏡檢。【操作步驟】結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色復(fù)紅復(fù)染涂片固定由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)建。革蘭氏染色法【結(jié)果】細(xì)菌被染成紫色者，稱為革蘭氏陽性菌；而細(xì)菌染成紅色者，稱為革蘭氏陰性菌；陽性菌——紫色陰性菌——紅色【意義】鑒別細(xì)菌，用本法染色可將細(xì)菌分成兩大類。了解致病性指點選擇用藥【革蘭氏染色法的原理】有三種學(xué)說。1.等電點學(xué)說：革蘭氏陽性細(xì)菌的等電點〔pH2～3〕比陰性菌〔pH4～5〕為低，—般染色時溶液的酸堿度約在pH7左右，電離后陽性菌帶有的陰電荷比陰性菌多。因此，攝取的堿性染料亦較多，不易脫色。2.通透性學(xué)說：革蘭氏陽性菌細(xì)胞膜的通透性比陰性菌低，進入細(xì)胞的染料和碘液結(jié)合生成沉淀，脫色劑較易經(jīng)過革蘭氏陰性菌的細(xì)胞膜，將碘和染料的復(fù)合物溶解洗出，故易脫色；陽性菌細(xì)胞膜透通性低，故不易脫色。甲菌乙菌初染結(jié)晶紫媒染碘液脫色乙醇復(fù)染沙黃紫色〔G＋〕紅色〔G-〕革蘭氏染色步驟表示圖細(xì)胞壁與革蘭氏染色3.化學(xué)學(xué)說：革蘭氏陽性菌細(xì)胞內(nèi)含有某種特殊化學(xué)成份，普通以為是核糖核酸鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它能和料染一煤染劑復(fù)合物相互結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不易脫色。四、細(xì)菌動力檢查法

鞭毛是細(xì)菌的運動器官，有鞭毛的細(xì)菌，具有運動的才干，能定向地由一個部位泳動到另一個部位。許多桿菌和螺菌或弧菌具有鞭毛，細(xì)菌的運動力是細(xì)菌特征之一，所以檢查細(xì)菌的動力可以鑒別細(xì)菌。檢查細(xì)菌動力的方法懸滴法、壓滴法、暗視野顯微鏡法、半固體瓊脂培育法等。1.懸滴法〔示教〕【資料】菌種：變形桿菌、葡萄球菌的幼齡〔8-12小時〕肉湯培育液。凹玻片、蓋玻片、凡士林?！痉椒ā繎业畏ㄒ妶D1-6

2.壓滴法【資料】菌種：變形桿菌、葡萄球菌的幼齡〔8-12小時〕肉湯培育液。蓋玻片、