丙泊酚對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和術(shù)后認(rèn)知功能的影響及機(jī)制研究

丙泊酚對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和術(shù)后認(rèn)知功能的影響及機(jī)制研究第一部分丙泊酚對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及其機(jī)制研究目的觀察丙泊酚對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及其機(jī)制。方法將小膠質(zhì)細(xì)胞BV-2分為7組,分別是空白對(duì)照組、丙泊酚組、LPS組、LPS復(fù)合丙泊酚組、IL-4組、IL-4復(fù)合丙泊酚組,溶劑DMSO對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組的細(xì)胞加入沒有血清的DMEM/F12培養(yǎng)液;丙泊酚組細(xì)胞加入丙泊酚30μM;LPS組細(xì)胞加入LPS1μg/ml;LPS復(fù)合丙泊酚組細(xì)胞加入LPS1μg/ml預(yù)處理1小時(shí),然后加入丙泊酚30μM干預(yù)24h;IL-4組加入20ng/mLIL-4;IL-4復(fù)合丙泊酚組加入20ng/mLIL-4預(yù)處理1小時(shí),然后加入丙泊酚30μM干預(yù)24h;溶劑DMSO對(duì)照組加入溶劑0.1%的DMSO。進(jìn)行形態(tài)學(xué)的觀察以及酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定細(xì)胞上清液中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10、Arg-1水平確定小膠質(zhì)細(xì)胞M1、M2活化模型的建立；同時(shí)采用MTT比色實(shí)驗(yàn)法測(cè)定丙泊酚干預(yù)后的活化小膠質(zhì)細(xì)胞活性,探討丙泊酚對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響；并觀察丙泊酚對(duì)靜息小膠質(zhì)細(xì)胞以及活化小膠質(zhì)細(xì)胞M1、M2釋放炎癥因子的影響;此外采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定丙泊酚對(duì)活化小膠質(zhì)細(xì)胞M1模型的TLR4、p38MAPK、TRIP、JNK、ERKmRNA表達(dá),及Westernblot檢測(cè)細(xì)胞TLR4、p38MAPK、TRIP、JNK、ERK的蛋白表達(dá)量,以此來(lái)分析丙泊酚對(duì)活化小膠質(zhì)細(xì)胞M1的作用機(jī)制。結(jié)果靜息小膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)過LPS和IL-4刺激后,形態(tài)學(xué)上觀察到小膠質(zhì)細(xì)胞活化的表現(xiàn),同時(shí)LPS組小膠質(zhì)細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組;IL-4組小膠質(zhì)細(xì)胞上清液中的IL-4、IL-10、Arg-1表達(dá)水平也明顯高于空白對(duì)照組,證明了活化小膠質(zhì)細(xì)胞的M1、M2模型的成功。此外,加入丙泊酚干預(yù)24小時(shí)后,LPS組和LPS復(fù)合丙泊酚組的細(xì)胞活性也明顯低于對(duì)照組和丙泊酚組(P<0.05),但是LPS復(fù)合丙泊酚組小膠質(zhì)細(xì)胞活性高于LPS組(P<0.05);而IL-4復(fù)合丙泊酚組小膠質(zhì)細(xì)胞上清液中IL-4、IL-10、Arg-1水平較丙泊酚組稍有增高,但未見明顯變化(P>0.05)以及IL-4組和IL-4復(fù)合丙泊酚組的細(xì)胞活性較對(duì)照組和丙泊酚組稍有增高,但也未見明顯差異(P>0.05)。此外發(fā)現(xiàn)丙泊酚對(duì)靜息小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的炎癥因子沒有影響,但是LPS復(fù)合丙泊酚組小膠質(zhì)細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平明顯低于LPS組(P<0.05)。PCR及WesternBlot結(jié)果顯示LPS組和LPS復(fù)合丙泊酚組小膠質(zhì)細(xì)胞p38MAPK、TLR4mRNA和蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組和丙泊酚組(P<0.05),LPS復(fù)合丙泊酚組小膠質(zhì)細(xì)胞p38MAPK和TLR4mRNA和蛋白表達(dá)量低于LPS組(P<0.05)。而TRIP、JNK、ERKmRNA和蛋白表達(dá)量在各組未見明顯差異(P>0.05)。結(jié)論丙泊酚能顯著抑制活化小膠質(zhì)細(xì)胞M1的過度炎癥反應(yīng),其機(jī)制可能與丙泊酚下調(diào)TLR4-p38MAPK信號(hào)通路有關(guān)。第二部分丙泊酚對(duì)老年胸腰椎手術(shù)患者術(shù)中BIS指數(shù)及術(shù)后認(rèn)知功能的影響目的:觀察丙泊酚對(duì)老年患者行胸腰椎手術(shù)中腦電雙頻指數(shù)監(jiān)測(cè)(BIS)指數(shù)及術(shù)后認(rèn)知功能的影響。方法:病例選自我院2014年7月～2015年3月期間收住的行胸腰椎手術(shù)患者82例,按照隨機(jī)數(shù)字表法,將患者隨機(jī)分為丙泊酚組與七氟烷組各41例。七氟烷組采用七氟烷麻醉維持,丙泊酚組采用丙泊酚麻醉維持。比較兩組的自主呼吸恢復(fù)時(shí)間、呼之睜眼時(shí)間、拔管時(shí)間等指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)蘇醒質(zhì)量,以及術(shù)前、術(shù)后一天、術(shù)后三天MoCA評(píng)分,和術(shù)前、術(shù)中BIS指數(shù)的變化。結(jié)果:丙泊酚組自主呼吸恢復(fù)時(shí)間、呼之睜眼時(shí)間、拔管時(shí)間均小于七氟烷組,蘇醒質(zhì)量?jī)?yōu)于對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。兩組MoCA評(píng)分術(shù)后第一天均較術(shù)前降低(P<0.05),七氟烷組MoCA評(píng)分術(shù)后第三天較術(shù)前降低(P<0.05),而丙泊酚組MoCA評(píng)分術(shù)后第三天較術(shù)前無(wú)明顯變化(P>0.05);丙泊酚組MoCA評(píng)分術(shù)后第一天和術(shù)后第三天均高于同期七氟烷組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。丙泊酚組術(shù)后第三天認(rèn)知功能障礙發(fā)生低于七氟烷組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異