丙泊酚對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞凋亡及其產(chǎn)生白介素-10和腫瘤壞死因子-α的影響

丙泊酚對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞凋亡及其產(chǎn)生白介素-10和腫瘤壞死因子-α的影響目的：評價(jià)不同濃度丙泊酚對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(alveolarmacrophage,AM)凋亡及其產(chǎn)生白介素-10(interleukin-10,IL-10)和腫瘤壞死因子-α(tumor-necrosisfactor-a,TNF-a)的影響。方法：用原位支氣管肺泡灌洗法分離大鼠AM,設(shè)PBS組、DMSO組、P1組-P6組(丙泊酚的濃度分別為1gM、10μM、25μM、50μM、100μM、300μM)、內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)組(1μg/ml)、地塞米松(dexamethasone,DEX)組(10-6M)。采用瑞氏-姬姆薩染色法觀察AM的形態(tài)、MTT法檢測AM的活力、Hoechst33258染細(xì)胞核、PI染色和annexinV-FITC/PI雙染方法測定AM的凋亡率、caspase-3活性檢測以及AM吞噬活性的測定來檢測丙泊酚對AM凋亡的影響。此外,本研究還通過ELISA法和免疫細(xì)胞化學(xué)染色法分別測定各組AM分泌IL-10和TNF-a的含量。結(jié)果：1.瑞氏-姬姆薩染色顯示PBS組和DMSO組的AM呈混合樣形態(tài),可見圓形和成纖維狀細(xì)胞；P1組-P5組AM較PBS組數(shù)量明顯增多,體積較大,貼壁能力強(qiáng),折光度好；LPS組AM數(shù)量增多更為明顯,且呈集中聚集趨勢,形似變形蟲樣改變,體積更大,貼壁能力更強(qiáng)；P6組AM較PBS組數(shù)量明顯減少,呈濃縮狀,貼壁能力弱,折光度差；DEX組AM細(xì)胞數(shù)量減少更為明顯,呈濃縮狀,貼壁能力極弱,折光度極差。2.MTT法結(jié)果顯示：P1組～P5組、DMSO組AM的活力與PBS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；P6組和DEX組AM的活力與PBS組相比在24h顯著降低(P<0.05)；LPS組AM的活力與PBS組相比從6h開始顯著升高(P<0.05)。3.Hoechst33258染色提示PBS組、P1組～P5組、DMSO組和LPS組AM的細(xì)胞核呈彌散均勻的藍(lán)色熒光；P6組和DEX組可見AM胞核縮小變形,呈濃染致密的顆粒塊狀熒光。4.PI結(jié)果顯示：P6組和DEX組在24h可見明顯的凋亡峰,休眠期/DNA合成前期(G0/G1期)細(xì)胞數(shù)量增多,DNA合成期(S期)和DNA合成后期／分裂期(G2/M期)細(xì)胞數(shù)量減少；P1組-P5組、DMSO組、LPS組AM的凋亡率與PBS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5.AnnexinV-FITC/PI雙染結(jié)果顯示：P1組-P5組、DMSO組、LPS組AM的凋亡率與PBS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；P6組、DEX組AM的凋亡率與PBS組相比顯著增高(P<0.01)。6.P6組和DEX組caspase-3的活性顯著高于PBS組(P<0.01)；P1組-P5組、DMSO組、LPS組caspase-3的活性與PBS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。7.吞噬實(shí)驗(yàn)表明：P1組、DMSO組AM的吞噬活性與PBS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；P3組、P4組、DEX組AM的吞噬活性與PBS組相比顯著降低(P<0.01);LPS組AM的吞噬活性與PBS組相比明顯增高(P<0.01)。8.ELISA法和免疫細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)果提示P1組-P6組、DMSO組IL-10和TNF-α的含量與PBS組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；DEX組IL-10的含量與PBS組相比明顯增加(P<0.05)；LPS組TNF-α的含量與PBS組相比明顯增加(P<0.05)。結(jié)論：1.濃度為1μM、10μM、25μM、50μM、100μM的丙泊酚對大鼠AM的凋亡無明顯影響,而丙泊酚300gM誘導(dǎo)了大鼠AM的凋亡。2.丙泊酚300gM和DEX(1(10-6M)誘導(dǎo)大鼠AM凋亡的機(jī)制可能與caspase-3的激活有關(guān)。3.臨床相關(guān)濃度的丙泊酚抑制了大鼠AM的吞噬活性,且這種抑制機(jī)制與細(xì)胞凋亡無關(guān)；DEX抑制了大鼠AM的吞噬活性,并誘導(dǎo)大鼠AM凋亡；LPS增強(qiáng)了大鼠AM的吞噬活性,同時(shí)AM的活力明顯增強(qiáng)。4.用丙