第四章微生物的生化試驗和血清學(xué)試驗第四章微生物的生化試

第四章微生物的生化實驗和血清學(xué)實驗第一節(jié)細(xì)菌的生化實驗一、概述〔一〕、什么是生化實驗?指經(jīng)過利用生物化學(xué)的方法來測定微生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來鑒別細(xì)菌的類別、屬種的實驗?！捕硻z驗細(xì)菌的生化實驗范圍1、糖〔醇〕類代謝實驗2、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝實驗3、有機酸鹽和銨鹽的利用實驗4、呼吸酶類實驗5、毒性酶類實驗〔三〕生化實驗的方法在培育物中參與某種底物與指示劑,經(jīng)接種、培育后,察看培育基的PH值變化。在培育物中參與試劑，察看它們同細(xì)菌代謝產(chǎn)物所生成的顏色反響。根據(jù)酶作用的反響特性，測定酶的存在。根據(jù)細(xì)菌對理化條件和藥品的敏感性，察看細(xì)菌的生長情況?！菜摹成瘜嶒灥谋揪眄氈?、待檢菌應(yīng)是新穎培育物。培育18~24h。2、待檢菌應(yīng)是純種培育物。3、遵守察看反響的時間。察看結(jié)果的時間，多為24或48小時。4、應(yīng)做必要的對照實驗。5、提高陽性檢出率，至少挑取2~3待檢的疑似菌落分別進展實驗。二、糖醇類代謝實驗〔一〕糖醇類發(fā)酵實驗〔二〕葡萄糖氧化發(fā)酵〔O/F〕實驗〔三〕V-P實驗〔四〕甲基紅〔MethylRed〕實驗MR〔五〕七葉苷水解實驗〔六〕甘油品紅實驗〔一〕糖醇類發(fā)酵實驗1.原理：不同的細(xì)菌對各種糖醇的分解才干及所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物各不同，有的能分解多種糖醇〕，有的只能分解1~2種糖醇，有的分解糖醇能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的分解糖醇只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，根據(jù)這些特點，可鑒別細(xì)菌。常用的糖醇單糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖雙糖：乳糖、蔗糖、麥芽糖、蕈糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇類：甘露醇、山梨醇、肌醇、衛(wèi)茅醇2、實驗方法：用接種針或環(huán)移取純培育物少許，接種于糖發(fā)酵管中，假設(shè)為半固體培育基，那么用接種針作穿刺接種。置36±1.0℃培育1~3天，每天察看結(jié)果。3、結(jié)果察看和記錄記錄：產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，陽性，以“+〞表示產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陽性，以“⊕〞表示不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陰性，以“-〞表示氣泡導(dǎo)管氣泡氣泡陽性陽性陰性培育基變?yōu)辄S色培育基未變色、無氣泡產(chǎn)生〔二〕葡萄糖氧化發(fā)酵〔O/F〕實驗1、原理：細(xì)菌對葡萄糖的分解，分為氧化型和發(fā)酵型。氧化型細(xì)菌在有氧的條件下才干分解葡萄糖，無氧的條件下不能分解葡萄糖；發(fā)酵型細(xì)菌在有氧無氧條件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。根據(jù)糖管的色澤變化可鑒別細(xì)菌。2、方法取待檢菌，以穿刺法接種于兩管葡萄糖半固體培育基上，在其中一管參與一層〔約1Cm〕滅菌的液體石蠟以隔絕空氣，在37℃培育2~4h天，每天察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄封油管未封油管發(fā)酵型產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)酸（黃色）氧化型不產(chǎn)酸（綠色）產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)堿型不產(chǎn)酸（綠色）不產(chǎn)酸（綠色）〔三〕V-P實驗1、原理：某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧生成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中的氧氧化為雙乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，雙乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V－P〔+〕反響。2、實驗方法〔1〕奧梅拉〔O’Meara〕法〔2〕貝立脫〔Barritt〕氏法〔3〕快速法

〔１〕奧梅拉法：將實驗菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培育基，于36±1℃培育48h，每1ml培育液加奧梅拉O’Meara試劑0.1ml，搖動試管1~2min，靜置于37℃恒溫箱4h，或在48~50℃水浴放置2h后斷定結(jié)果?！?〕貝立脫法：將實驗菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培育基，于36±1℃培育2天，每2ml培育液先參與6%a-萘酚純酒精溶液1ml，再加40%氫氧化鉀水溶液0.4ml，搖動2~5min，陽性菌常立刻呈現(xiàn)紅色，假設(shè)無紅色出現(xiàn)，靜置于室溫或36±1℃培育4h，如顯現(xiàn)紅色為陽性，呈黃色或有類似銅色者，可斷定為陰性?！?〕快速法：將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中，挑取產(chǎn)酸反響的三糖鐵瓊脂斜面培育物一接種環(huán)，乳化接種于其中，參與5%α-萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動后放置5min，斷定結(jié)果。不產(chǎn)酸的培育物不能運用。3、結(jié)果察看與記錄〔1〕發(fā)酵管出現(xiàn)紅色者，為陽性，記V-P+〔2〕發(fā)酵管為黃色或銅綠色者，為陰性，記V-P-〔四〕甲基紅實驗〔MR〕1、原理細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸后，由于代謝的途徑不同，有的細(xì)菌可使丙酮酸轉(zhuǎn)化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，使培育基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅色，為甲基紅實驗陽性；有的細(xì)菌使丙酮酸脫羧后構(gòu)成酮、醇類中性產(chǎn)物，培育液pH＞5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅實驗陰性。2、實驗方法：挑取新穎的待試培育物少許，接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培育基，于36±1℃或30℃〔以30℃較好〕培育3~5天，從第48h起，每日取培育液1ml，參與甲基紅指示劑1~2滴，立刻察看結(jié)果。MR-VP實驗原理及照片V-P3、結(jié)果察看與記錄〔1〕呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色為弱陽性，記MR+；〔2〕呈橘黃色或黃色為陰性，記MR-，迄至發(fā)現(xiàn)陰性并培育至第5天仍為陰性，即可斷定結(jié)果。MR+MR-〔五〕七葉苷水解實驗１、原理：七葉苷被細(xì)菌分解后，生成葡萄糖和七葉素，七葉素與Fe2+結(jié)合，生成黑色化合物，使培育基呈黑色，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法：將待試純培育物少許，接種于七葉苷培育基，于36±1℃培育24h,察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄〔1〕培育基變?yōu)楹谏蜃睾谏撸瑸殛栃?，記錄?〔2〕培育基不變色者，為陰性，記錄為-〔六〕甘油品紅實驗1、原理：某些細(xì)菌可分解甘油成為丙酮酸，并進一步脫羧生成乙醛，乙醛與無色品紅生成醌式化合物，呈深紫紅色，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法：取待檢菌的新穎純培育物，接種于甘油品紅肉湯培育基中，于36±1℃培育8天,并用未接種的培育基在一樣條件下培育作為陰性對照，察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄〔1〕出現(xiàn)紫色或紫紅色者,為陽性，記錄為+；〔2〕與對看管顏色一樣者,為陰性，記錄為-復(fù)習(xí)題1、什么是生化實驗?2、做生化實驗要留意哪些事項？3、簡述糖醇類發(fā)酵實驗的原理，寫出其實驗方法和結(jié)果的記錄5、簡述甲基紅實驗〔MR〕的原理，寫出其實驗方法和結(jié)果的記錄〔一〕靛基質(zhì)〔吲哚〕實驗〔二〕H2S實驗〔三〕尿素酶實驗〔四〕氨基酸脫羧酶實驗〔五〕苯丙氨酸脫氨酶實驗(六)明膠〔Gelatin〕液化實驗三、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝實驗〔一〕靛基質(zhì)實驗1、原理：某些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)〔吲哚〕。吲哚與對二甲氨基苯甲醛結(jié)合，可構(gòu)成紅色化合物，即玫瑰吲哚，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法：所用試劑:〔1〕柯凡克(Kovacs)試劑;或〔2〕歐—波試劑將待檢菌小量接種于培育基中，于36±1℃培育24~48h時后，參與柯凡克試劑數(shù)滴，輕搖試管，呈紅色者為陽性?；蜓卦嚬鼙诰徛齾⑴c歐-波試劑約0.5ml覆蓋液面，兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者，為陽性反響，無紅色者為陰性反響。靛基質(zhì)實驗原理及照片靛基質(zhì)+3、結(jié)果察看與記錄呈現(xiàn)玫瑰紅色，為陽性反響，記+無紅色者，為陰性反響，記-〔二〕硫化氫〔H2S〕實驗1、原理：某些細(xì)菌可分解培育基中的含硫氨基酸或含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽可生成黑色沉淀物PbS或FeS，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法：挑取待檢菌，用穿刺接種法接種于三糖鐵培育上，于36±1℃培育24~48h，察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄培育基底部呈黑色，為陽性，記+培育基底部無黑色，為陰性，記-〔三〕尿素酶實驗1、原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解產(chǎn)生氨，氨使培育基變?yōu)閴A性，使培育基中的酚紅指示劑呈粉紅色，培育基由黃色變?yōu)榧t色，為陽性。以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法：挑取大量培育18~24h的待試菌，濃密涂布接種于尿素瓊脂斜面上，不要到達(dá)底部，留底部作變色對照。培育2、4和24h分別察看一次結(jié)果，培育基變?yōu)榉奂t色為陽性，顏色不變者為陰性。如陰性應(yīng)繼續(xù)培育至4天，作最終斷定。尿素酶實驗圖陽性3、結(jié)果察看與記錄培育基變呈粉紅色，為陽性，記+培育基顏色不變，為陰性，記-〔四〕氨基酸脫羧酶實驗1、原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生氨基酸脫羧酶,可使賴氨酸、鳥氨酸消費脫羧作用,生成胺類物質(zhì)和CO2。胺類物質(zhì)使培育基呈堿性變紫色，為陽性,如呈黃色為陰性，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法取待檢菌，分別接種于含有氨基酸的培育基內(nèi)和不含氨基酸的對照培育基內(nèi)，在36±1℃培育1~4天，每天察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄實驗管呈紫色，對看管呈黃色，為陽性，記+實驗管、對看管都呈黃色，為陰性，記-。實驗管對看管陽性+陰性-對看管變黃實驗管變黃陽性反響實驗管顏色變化過程紫色→黃色→紫色原理：對看管呈黃色，闡明有細(xì)菌生長。在培育的早期〔10~12h〕，細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使培育液PH下降，指示劑溴甲酚紫由紫色變?yōu)辄S色，以后由于氨基酸脫羧生成胺，PH又上升至堿性，指示劑顯紫色。陽性反響實驗管顏色變化過程：紫色→黃色→紫色〔五〕苯丙氨酸脫氨酶實驗1、原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，構(gòu)成苯丙酮酸，苯丙酮酸與氯化鐵作用生成綠色化合物，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培育物，接種于苯丙氨酸培育基上，在36±1℃培育18~24h后，參與氯化鐵溶液4~5滴，轉(zhuǎn)動試管，使試劑與菌苔外表充分接觸，立刻察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄實驗管立刻出現(xiàn)綠色，為陽性，記+無色為陰性，記-。加氯化鐵試劑出現(xiàn)綠色+〔六〕明膠液化實驗1、原理有些細(xì)菌具有明膠酶〔亦稱類蛋白水解酶〕，能將明膠先水解為多肽，又進一步將多肽水解為氨基酸，明膠失去凝膠性質(zhì)，使培育基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)。2、實驗方法挑取培育18~24h的待試菌，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度。于20~22℃培育7~14天。明膠高層亦可培育于36±1℃。另取一支未接種的培育基一同培育作對照，每天取出兩支試管，放入冰箱放置20~30min后，再察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄明膠液化，為陽性，+。明膠凝固，為陰性，-。復(fù)習(xí)題1、簡述靛基質(zhì)實驗的原理，寫出其實驗方法、結(jié)果的記錄和本卷須知2、簡述硫化氫實驗的原理，寫出其實驗結(jié)果的記錄和本卷須知3、簡述尿素酶實驗的原理，寫出其實驗方法、結(jié)果的記錄4、簡述氨基酸脫羧酶實驗的原理，寫出結(jié)果的記錄、陽性反響實驗管顏色變化過程和原理四、有機酸鹽和銨鹽的利用實驗枸櫞酸鹽利用實驗丙二酸鹽利用實驗〔一〕枸櫞酸鹽利用實驗

1、原理：某些細(xì)菌能利用檸檬酸鹽作為獨一碳源，分解枸櫞(檸檬)酸鹽生成碳酸鹽；同時分解培育基的銨鹽生成氨，使培育基變?yōu)閴A性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)色，為陽性。2、實驗方法挑取待檢菌，在西蒙枸櫞酸鹽培育基斜面上密集劃線接種，在36±1℃培育1~4天，每天察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄斜面有菌苔生長，培育基斜面變?yōu)樗{(lán)色或深藍(lán)色，為陽性，記+；無菌苔生長，培育基斜面仍為綠色者，為陰性，記-枸椽酸鹽實驗原理及斜面照片陽性+〔二〕丙二酸鹽利用實驗1.原理:某些細(xì)菌可以利用培育基中的丙二酸鹽作為獨一碳源,丙二酸鹽被分解成碳酸鈉,使培育基變?yōu)閴A性,培育基由草綠色變成藍(lán)色，為陽性，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法取待檢菌新穎純培育物，接種于丙二酸鈉培育基上，于36±1℃培育48h，察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄培育基由草綠色變成藍(lán)色,為陽性,記+;培育基無顏色變化,為陰性,記-五、呼吸酶類實驗氧化酶實驗過氧化氫酶實驗硝酸鹽復(fù)原實驗氰化鉀實驗〔一〕氧化酶實驗1.原理:氧化酶使細(xì)胞色素C氧化后，氧化型細(xì)胞色素C再使鹽酸二甲基對苯二胺氧化，使生成玫瑰紅色到暗紫色的醌類化合物,再和α-萘酚結(jié)合,生成吲哚酚藍(lán),呈藍(lán)色反響，為陽性。試劑1%α-萘酚-乙醇液1%鹽酸二甲基對苯二胺2、實驗方法用滴管直接滴加1%鹽酸二甲基對苯二胺試劑1~2滴在培育物上,再參與1%α-萘酚-乙醇液1~2滴,在30秒內(nèi)斷定實驗結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄在30秒內(nèi)呈藍(lán)色反響,為陽性,記+不變色或為紅色者,為陰性,記-成藍(lán)色為+不變色或為紅色為-〔二〕過氧化氫酶實驗1.原理：某些細(xì)菌可分泌過氧化氫酶，參與過氧化氫后，可將過氧化氫分解生成水和氧氣，產(chǎn)生氣泡，即為陽性反響。2、實驗方法挑取固體培育基上的新穎菌落一環(huán)，置于干凈玻片上〔或試管〕，滴加3%過氧化氫液數(shù)滴，或在瓊脂斜面培育物上直接滴加過氧化氫液，立刻察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄產(chǎn)生氣泡者，為陽性，記+不產(chǎn)生氣泡者，為陰性，記-〔三〕硝酸鹽復(fù)原實驗1、原理：某些細(xì)菌具有復(fù)原硝酸鹽的才干，可將硝酸鹽復(fù)原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽可生成亞硝酸，亞硝酸與對氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再與α-萘胺作用，生成紅色的化合物，呈紅色反響，為陽性反響。試劑A、對氨基苯磺酸試劑B、α-萘胺試劑2、實驗方法取待檢菌新穎純培育物，在硝酸鹽培育基上接種，在36±1℃培育1~4天，每天取2mL培育液,參與A、B試劑的等量混合物各二滴混勻，立刻察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄呈現(xiàn)紅色，為陽性，記+假設(shè)無紅色出現(xiàn)，為陰性，記-〔四〕氰化鉀實驗1.原理：氰化鉀是細(xì)菌呼吸酶系統(tǒng)的抑制劑,可與呼吸酶作用使酶失去活性,抑制細(xì)菌的生長,但有的細(xì)菌在一定濃度的氰化鉀存在時仍能生長,以此鑒別細(xì)菌.2、實驗方法取培育20～24h的營養(yǎng)肉湯培育液或菌落1環(huán)，接種至對照培育基及氰化鉀培育基內(nèi)，立刻以橡膠塞塞緊，36±1℃培育24～48h，察看結(jié)果。3、結(jié)果察看與記錄對看管有菌生長，實驗管有菌生長為陽性，記+。對看管有菌生長，實驗管無菌生長為陰性。記-。六、毒性酶類實驗溶血實驗鏈激酶實驗卵磷脂酶實驗血漿凝固酶實驗〔一〕溶血實驗1、原理：某些細(xì)菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，不同的細(xì)菌有不同的溶血反響，借此可鑒別細(xì)菌。2、實驗方法有二種：平板法試管法平板法將培育物接種于血平板培育基上，36±1℃培育24～48h，察看結(jié)果。溶血實驗的溶血類型及景象〔1〕α〔甲型〕溶血:菌落周圍出現(xiàn)較窄的半透明的草綠色溶血環(huán)?！?〕β〔乙型〕溶血:菌落周圍出現(xiàn)較寬的透明溶血環(huán)?！?〕γ〔-丙型〕溶血:菌落周圍無溶血環(huán)。甲型〔α-〕溶血乙型〔β-〕溶血丙型〔γ-〕溶血試管法將待檢菌培育液與等量的2%羊血球混合，在36±1℃培育16～18h，察看結(jié)果。如溶血，培育液可出現(xiàn)透明狀。3、結(jié)果察看與記錄有溶血景象，為陽性，記+；無溶血景象，為陰性，記-〔二〕鏈激酶實驗1、原理：A群鏈球菌群能產(chǎn)生鏈激酶，該酶能使血液中的纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，而后溶解纖維蛋白，使血凝塊溶解,為陽性反響。此實驗用于測定鏈球菌的致病性。陽性反響具有致病性。2、實驗方法汲取草酸鉀血漿0.2mL(0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，汲取上清液)，參與0.8mL生理鹽水，混勻后，再參與待檢菌36℃下培育18-24h肉湯培育物0.5mL和0.25％氯化鈣0.25mL，混勻，放37℃水浴中，2min察看一次。待血漿凝固后繼續(xù)察看并記錄溶化時間。如2h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置24h后察看。同時用肉浸液肉湯做陰性對照，用知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對照。3、結(jié)果察看與記錄如凝塊全部溶化,為陽性+，凝塊24h仍不溶化,為陰性-〔三〕卵磷脂酶實驗1、原理：某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存在時，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌落周圍構(gòu)成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃液變混濁，以此鑒別細(xì)菌。2、實驗方法〔1〕卵黃平板法：A法：將待檢菌培育物劃線接種或點種于卵黃瓊脂平板上，36±1℃培育3～6h，察看結(jié)果。

菌落白色混濁環(huán)，B法：先用卵黃磷脂酶抗血清將平板涂一半，置于36℃待干后，將待檢菌接種于未涂抗血清的一半卵黃瓊脂平板上，再轉(zhuǎn)劃已涂過抗血清的一半，36±1℃厭氧培育24～48h，察看結(jié)果。在未涂抗血清的一半平板上，菌落周圍構(gòu)成較大的不透明乳白色混濁區(qū)，在涂抗血清的一半平板上，菌落周圍無不透明混濁區(qū)，為陽性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。菌落周圍無混濁白環(huán)菌落周圍有混濁白環(huán)乳糖卵黃瓊脂平板,借以確定該菌可否產(chǎn)生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相應(yīng)抗血清所抑制，〔2〕卵黃鹽水法將庖肉培育基培育物經(jīng)除菌過濾，搜集濾液。在兩支滅菌試管內(nèi)，每管參與1%卵黃鹽水0.4mL,在一管中參與濾液0.2mL，另一管參與生理鹽水0.2mL作對照。在36℃水浴中，經(jīng)2h、4h、8h、24h察看結(jié)果。管底發(fā)生混濁沉淀，對看管無沉淀者，為陽性。3、結(jié)果察看與記錄菌落周圍構(gòu)成較大的不透明區(qū)，為陽性。兩邊均無不透明區(qū)，為陰性。管底發(fā)生混濁沉淀，對看管無沉淀者，為陽性。兩管無沉淀者，為陰性?！菜摹逞獫{凝固酶實驗1、原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，附著在細(xì)菌的外表，構(gòu)成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固景象,為陽性。2、實驗方法〔1〕玻片法：取清潔枯燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔〔人〕血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5min內(nèi),如血漿內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，那么為陽性;如兩者呈均勻混濁，無凝固那么為陰性。有凝塊均勻混濁血漿生理鹽水血漿凝固酶實驗〔2〕試管法取滅菌小試管3支，各參與血漿①－無菌水(1:1)0.5ml，1支參與被檢菌株的營養(yǎng)肉湯培育液〔或濃菌懸液〕0.5ml；其他2支作對看管，1支參與金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)肉湯培育液或菌懸液0.5ml作陽性對照;另1支參與營養(yǎng)肉湯或0.9％氯化鈉溶0.5ml作空白對照。將3管同時放37℃溫箱或水浴中培育，每0.5h察看一次，4h內(nèi)無凝固景象者，察看直至24小時。陽性反響陰性反響不凝固少量、零散凝固明顯的塊狀凝固宏大塊凝固完全凝固，倒置不流動金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實驗3、試管法的結(jié)果察看與記錄空白對看管的血漿流動自若，陽性對看管血漿凝固，實驗管血漿凝固者為陽性；均無凝固那么為陰性。七、三糖鐵〔TSI〕實驗1、三糖鐵實驗的原理假設(shè)細(xì)菌可利用乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培育基全部變黃；假設(shè)只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培育基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面最后為紅色，底部由于是在厭氧形狀下，酸類不被氧化，仍堅持黃色。假設(shè)細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培育基底部變黑。制好的培育基對看管斜面紅色，底面黃色培育基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黃色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO22、實驗方法以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培育物，穿刺接種并涂布于斜面，置36±1℃培育18~24h，察看結(jié)果。思索題提問：志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。在培育基上應(yīng)該產(chǎn)生什么景象？大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。在培育基上應(yīng)該是什么景象？沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣，在培育基上應(yīng)該是什么景象？下面照片所示2-3-4，能夠是大腸桿菌、沙門氏菌還是志賀氏菌？答案：2－志賀氏菌3－沙門氏菌4－大腸桿菌復(fù)習(xí)題1、什么是生化實驗?2、做生化實驗要留意哪些事項？3、簡述糖酵解實驗的原理，寫出其實驗方法和結(jié)果的記錄4、簡述甲基紅實驗〔MR〕的原理，寫出其實驗方法和結(jié)果的記錄5、簡述靛基質(zhì)〔Imdole〕(吲哚)實驗的原理，寫出其實驗方法、結(jié)果的記錄和本卷須知6、簡述硫化氫〔H2S〕實驗的原理，寫出其實驗結(jié)果的記錄和本卷須知7、簡述尿素酶〔Urease〕實驗的原理，寫出其實驗方法、結(jié)果的記錄8、簡述氨基酸脫羧酶實驗的原理，寫出結(jié)果的記錄、陽性反響實驗管顏色變化過程和原理9、簡述氰化鉀實驗的原理，寫出其實驗方法、結(jié)果的記錄和本卷須知10、寫出溶血實驗的溶血類型及景象11、簡述鏈激酶實驗的原理，12、簡述血漿凝固酶實驗的原理，并寫出玻片法的實驗方法13、簡述三糖鐵〔TSI〕實驗的實驗的原理第二節(jié)血清學(xué)實驗血清學(xué)反響：指相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用，所出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集景象。一、抗原與抗體〔一〕抗原1、抗原的概念抗原(Ag)：是指凡能刺激機體免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)免疫應(yīng)對，并能與應(yīng)對產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異反響的物質(zhì)。

2、抗原的特性免疫原性免疫反響性〔二〕抗體1、抗體是指機體內(nèi)的淋巴系統(tǒng)細(xì)胞在抗原物質(zhì)的激發(fā)下，所合成的一種具有特異性免疫功能的球蛋白(免疫球蛋白)。

2、抗體的理化性質(zhì)〔1〕抗體是球蛋白〔2〕免疫球蛋白

圖2-1兔血清電泳分別圖其后，經(jīng)對不同免疫血清的電泳分析，超速離心分析和分子量測定等方法，發(fā)現(xiàn)大部分抗體活性存在于γ球蛋白內(nèi)，但有小部分抗體活性可存在于β球蛋白內(nèi)。它們的離心常數(shù)分別為7S和平共處9S，分子量分別為16萬和萬。因此它們分別被命名為7Sγ球蛋白分子〔16萬〕19S,β2巨球蛋白分子(β2M,90萬)和β2A球蛋白分子，所以從早期對抗體性質(zhì)的研討證明抗體不是由均質(zhì)性球蛋白組成，而是由異性球蛋白組成。

圖2-2不同類免疫球收白的電泳分別圖〔三〕抗原抗體反響

抗原抗體反響：是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反響

1、抗原抗體反響的化學(xué)本質(zhì)〔1〕構(gòu)造根底〔2〕、化學(xué)變化：①四種分子間作用力參與并促進Ag-Ab的反響電荷引力范登華引力氫鍵結(jié)合力疏水作用抗原抗體反響的膠體形狀的變化過程總結(jié)如下。Ag+Ab(AgAb)n特異性結(jié)合AgAb電解質(zhì)親水膠體帶電荷的疏水膠體疏水膠體凝集②理化性質(zhì)改動：親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體2.反響過程：①不可見階段②可見階段二、血清學(xué)反響的特點：1、具有特異性與交叉性2、具有敏感性3、具有定理特性。4、反響的兩個階段性5、反響的穩(wěn)定性與可逆性的。

圖9-1沉淀反響中沒淀量與抗原抗體的比例關(guān)系A(chǔ)g：抗原；Ab：抗體三、影響血清學(xué)實驗的的要素1.抗體2.抗原3.電解質(zhì):常用:0.85％氯化鈉或各種緩沖液作用:中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢下降，促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，構(gòu)成可見的沉淀物或凝集物。4.酸堿度:pH為6～8進展5.溫度:普通以15~40℃為宜，最適為37℃，四、血清學(xué)反響的種類1、凝集反響2、沉淀反響3、中和反響4、標(biāo)志抗體技術(shù)〔一〕凝集實驗顆粒性抗原〔細(xì)菌、紅細(xì)胞等〕與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所構(gòu)成的肉眼可見的凝集景象，稱為凝集反響鮮血者紅細(xì)胞受血者血清O型(抗A、抗B)A型(抗B)B型(抗A)AB型(無)O型----A型+-+-B型++--AB型+++-注:“+〞表示有凝集反響,“-〞表示無凝集反響〔二〕、凝集實驗的方法1．直接凝集法2．間接凝集法3．抗球蛋白實驗〔三〕、直接凝集實驗1、玻片凝集法〔1〕原理:用知抗體作為診斷血清，來檢測未知抗原,以鑒定相應(yīng)的抗原?！?〕方法步驟:①、于干凈玻片的一端加診斷血清1滴，另一端加生理鹽水1滴作為陰性對照。②、用接種環(huán)取待檢菌或血細(xì)胞的懸液分別涂于診斷血清和生理鹽水中。③、悄然轉(zhuǎn)動玻片，使其充分混勻，靜置數(shù)分鐘，察看結(jié)果?？寡迳睇}水待檢菌凝集者為+未凝集〔4〕診斷血清及類型診斷血清：將知的抗原注射于動物體，使其產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，采出動物的血液，分別出含有大量抗體的血清，稱為診斷血清〔或抗血清、免疫血清〕抗O血清