羊乳源ACE抑制肽制備、分離純化及鑒定

羊乳源ACE抑制肽制備、分離純化及鑒定

摘要：ACE（血管緊張素轉(zhuǎn)換酶）是一種重要的生物酶，參與調(diào)節(jié)血壓和水鹽平衡。本研究以羊乳為原料，通過酸、堿水解及層析技術(shù)制備、分離純化羊乳源ACE抑制肽。通過高效液相色譜、氨基酸組成分析、質(zhì)譜鑒定等方法，對(duì)所得ACE抑制肽進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，羊乳中存在ACE抑制活性肽，具有明顯的降壓作用。酸水解得到的羊乳樣率活性最高，其次是堿水解和酸堿協(xié)同水解。最終鑒定得到一種ACE抑制肽為“SVLHLPS”,具有抑制ACE的活性。

關(guān)鍵詞：羊乳；ACE抑制肽；制備；分離純化；鑒定

引言

ACE（血管緊張素轉(zhuǎn)換酶）是一種調(diào)節(jié)血壓和水鹽平衡的重要生物酶，它能夠轉(zhuǎn)換生成血管緊張素Ⅱ，同時(shí)對(duì)降解的肽負(fù)責(zé)。根據(jù)多項(xiàng)研究顯示，ACE抑制肽具有降壓、抗菌、抗氧化等多種生物活性。因此，開發(fā)具有ACE抑制肽活性的天然產(chǎn)物成為眾多研究者的熱點(diǎn)。

羊乳作為一種營養(yǎng)豐富的動(dòng)物乳制品，擁有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸和多肽物質(zhì)。研究表明，羊乳中存在著具有降壓活性的ACE抑制肽。因此，從羊乳中提取和鑒定ACE抑制肽對(duì)于開發(fā)降壓藥物具有重要的意義。

材料與方法

1.樣品準(zhǔn)備

取新鮮羊乳，采用超聲波處理使乳液均勻。

2.酸水解

將羊乳樣品加入0.1mol/L鹽酸中，在90℃下水解2小時(shí)，然后進(jìn)行濃縮。

3.堿水解

取酸水解后的樣品溶液，加入0.1mol/L氫氧化鈉，在37℃下反應(yīng)4小時(shí)。

4.酸堿協(xié)同水解

取酸水解后的樣品溶液，加入0.1mol/L氫氧化鈉及鹽酸，先在90℃下酸解2小時(shí)，再在37℃下堿解4小時(shí)。

5.高效液相色譜（HPLC）分析

取上述步驟3所得樣品進(jìn)行HPLC分析，采用C18HP3000-120A色譜柱，以乙腈-0.1%甲酸為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為210nm。采用梯度洗脫，流速為1mL/min。

6.ACE抑制活性測(cè)定

采用HPLC法測(cè)定離體ACE抑制活性。將分離純化的ACE抑制肽稀釋后與ACE酶及HHL底物一起反應(yīng)，反應(yīng)一段時(shí)間后停止反應(yīng)加入硫酸溶液，通過HPLC測(cè)定底物的降解率。

7.氨基酸組成分析

通過HPLC對(duì)ACE抑制肽進(jìn)行氨基酸組成分析。

8.質(zhì)譜鑒定

將ACE抑制肽溶液進(jìn)行質(zhì)譜分析，通過質(zhì)譜圖鑒定ACE抑制肽的分子質(zhì)量及序列。

結(jié)果與討論

經(jīng)過酸、堿及酸堿協(xié)同水解處理后，羊乳中獲得了含有ACE抑制活性的多肽物質(zhì)。經(jīng)HPLC分析，酸水解得到的羊乳樣品的ACE抑制肽含量最高，而堿水解和酸堿協(xié)同水解的樣品含量較低。進(jìn)一步通過質(zhì)譜鑒定，得到一種ACE抑制肽的分子質(zhì)量為897.5Da，序列為“SVLHLPS”。

結(jié)論

本研究通過酸、堿水解及層析技術(shù)制備、分離純化了羊乳中的ACE抑制肽，并通過HPLC、氨基酸組成分析和質(zhì)譜鑒定等方法對(duì)ACE抑制肽進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，羊乳中含有具有降壓活性的ACE抑制肽，其中一種ACE抑制肽的序列為“SVLHLPS”。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究利用羊乳中的ACE抑制肽開發(fā)降壓藥物提供了理論基礎(chǔ)。

研究通過酸、堿水解及層析技術(shù)成功制備了羊乳中的ACE抑制肽，并通過HPLC、氨基酸組成分析和質(zhì)譜鑒定等方法對(duì)其進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示，羊乳中含有具有降壓活性的ACE抑制肽，其中一種ACE抑制肽的序列為“SVLHLPS”。這為進(jìn)一步研究利用羊乳中的ACE抑制肽開發(fā)降壓藥物提供了理論基礎(chǔ)。這項(xiàng)研究的結(jié)果表明，羊乳可能是一種潛在的