高二生物+選修1專題2+課題1+土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1、條件（營養(yǎng)、溫度、pH）2、芽孢桿菌、小球菌、假單孢桿菌3、允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類的微生物生長的培養(yǎng)基尿素尿素分解菌/纖維素纖維素分解菌4、顯微鏡直接計數(shù)活菌計數(shù)法濾膜法5、培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌6、一定稀釋范圍的培養(yǎng)液分別菌落數(shù)30-3007、38、排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗可信度9、篩選菌株、統(tǒng)計菌落數(shù)目、設置對照10、配制培養(yǎng)基土壤取樣配制溶液系列稀釋樣品涂布培養(yǎng)計數(shù)11、70-90%3-8cm土壤層12、104-10630-37℃1-224菌落數(shù)目穩(wěn)定時13、無菌操作做好標記規(guī)劃時間14、酚紅指示劑指示劑變紅【預習自測】AACB

1、實例：啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。原因：因為熱泉溫度70～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈式反應是一種在體外將少量DNA大量復制的技術，此項技術要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；方法：⑴抑制大多數(shù)微生物不能生長⑵造成有利于該菌生長的環(huán)境，結果：培養(yǎng)一定時間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板稀釋等方法對它進行純化培養(yǎng)分離。2、實驗室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？瓊脂的作用碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素瓊脂：凝固劑使用以尿素為唯一的氮源的培養(yǎng)基，將能夠分解尿素的微生物分離出來。※3、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。㈡.統(tǒng)計菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；缺點2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）⑴原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。注意事項①為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進行計數(shù)。②為使結果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。㈢.設置對照：實例：在做分解尿素的細菌的篩選與統(tǒng)計菌落數(shù)目的實驗時，A同學從對應的106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落，但是其他同學在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個菌落。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質)小結：通過這個事例可以看出，實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案一：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗方案二：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結果預測：如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。微生物的培養(yǎng)與觀察三.結果分析與評價1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個平板上長有30—300個菌落的稀釋倍計算每克樣品的菌數(shù)