草地貪夜蛾抗藥性監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

1DBXX/XXXXX—XXXX草地貪夜蛾抗藥性監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了草地貪夜蛾（Spodopterafrugiperda(J.E.Smith)）抗藥性監(jiān)測(cè)的基本方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于草地貪夜蛾對(duì)殺蟲劑抗藥性監(jiān)測(cè)。2術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1抗藥性insecticideresistance由于殺蟲劑的使用，在昆蟲或螨類等種群中發(fā)展并可以遺傳給后代的對(duì)殺死正常種群藥劑劑量的忍受能力。2.2F1代F1generation從田間采集害蟲的卵或幼蟲，室內(nèi)飼養(yǎng)，繁殖后得到的第一代幼蟲。2.3敏感性基線susceptibilitybaseline通過生物測(cè)定方法得到的害蟲敏感品系（或種群）對(duì)殺蟲劑的劑量反應(yīng)曲線。2.4浸葉法leaf-dippingmethod將浸過藥液的葉碟置于含有瓊脂或保濕濾紙上，接入靶標(biāo)昆蟲進(jìn)行的生物測(cè)定方法。3試劑與材料試劑為分析純?cè)噭?.1生物試材試蟲：草地貪夜蛾（Spodopterafrugiperda(J.E.Smith)供試植物：未被藥劑污染的玉米。3.2試驗(yàn)藥劑2DBXX/XXXXX—XXXX殺蟲劑原藥或母藥。4儀器設(shè)備電子天平（感量0.1mg培養(yǎng)皿，移液管或移液器（200μL、1000μL、5000μL打孔器（直徑為1cm燒杯（25mL，50mL，100mL量筒（10mL，25mL，50mL，100mL養(yǎng)蟲籠，剪刀，鑷子，濾紙，恒溫培養(yǎng)箱、恒溫養(yǎng)蟲室或人工氣候箱。5試驗(yàn)步驟5.1試材準(zhǔn)備5.1.1試蟲5.1.1.1試蟲采集在監(jiān)測(cè)田按抽樣方法采集靶標(biāo)昆蟲幼蟲或卵，幼蟲不少于200頭，卵塊不少于30塊。5.1.1.2試蟲飼養(yǎng)采集的幼蟲或卵塊在室內(nèi)飼養(yǎng)到成蟲分批產(chǎn)卵，取F1代3齡初期幼蟲供試。5.1.2供試植物使用新鮮、潔凈、無農(nóng)藥污染的玉米葉片。5.2藥劑配制待測(cè)殺蟲劑原藥用丙酮或其它有機(jī)溶劑溶解，配制成高濃度存貯液，殺蟲劑制劑直接用蒸餾水配制成高濃度母液，然后用含0.05%的TritonX-100蒸餾水稀釋到所需要的6-8個(gè)系列濃度梯度，以0.05%的TritonX-100蒸餾水作為對(duì)照，每質(zhì)量濃度配制藥液量不少于10mL。5.3處理方法浸葉法，用含0.05%TritonX-100的蒸餾水稀釋母液成系列梯度濃度（通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定藥劑的濃度系列范圍，最低濃度時(shí)死亡率小于20%，最大濃度時(shí)死亡率大于80%每質(zhì)量濃度藥液量不少于200mL。將清洗干凈的玉米葉片浸于不同濃度的溶液中10s，取出后在室內(nèi)晾干至表面無游離水。用0.05%TritonX-100水溶液浸漬的葉片作為對(duì)照。將晾干的葉片放入培養(yǎng)皿或試管中，用濾紙或瓊脂保濕，接入3齡幼蟲，單頭飼養(yǎng)，每個(gè)處理10頭幼蟲，重復(fù)3次。5.4結(jié)果檢查3DBXX/XXXXX—XXXX根據(jù)殺蟲劑的速效性分別于接蟲后48h~96h后檢查。氯蟲苯甲酰胺等雙酰胺類、阿維菌素等微生物制劑，于藥后72h~96h檢查，速效性好的藥劑于藥后48h調(diào)查。6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析6.1計(jì)算方法根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，計(jì)算各處理的校正死亡率。按公式（1）和（2）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果均保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位：N式中：P1——死亡率，單位為百分率（%K——表示每處理濃度總死亡蟲數(shù)，單位為頭；N——表示每處理濃度總蟲數(shù)，單位為頭。100-Po式中：P2——校正死亡率，單位為百分率（%Pt——處理死亡率，單位為百分率（%P0——空白對(duì)照死亡率，單位為百分率（%）。若對(duì)照死亡率<5％，無需校正；對(duì)照死亡率在5％～20％之間，應(yīng)按公式（2）進(jìn)行校正；對(duì)照死亡率>20％，試驗(yàn)需重做。6.2回歸方程和致死中濃度（LC50）計(jì)算方法采用SAS、Probit等軟件的機(jī)率值分析法，求出每種供試藥劑的毒力回歸方程式LC50值及其95%置信限、斜率（b值）及其標(biāo)準(zhǔn)誤。7抗藥性水平的計(jì)算與評(píng)估7.1草地貪夜蛾對(duì)部分殺蟲劑的敏感性基線見附錄A。4DBXX/XXXXX—XXXX7.2抗性倍數(shù)的計(jì)算根據(jù)敏感品系的LC50值和測(cè)試種群的LC50值，按公式（3）計(jì)算測(cè)試種群的抗性倍數(shù)，計(jì)算結(jié)果均保留兩位有效數(shù)字：S式中：RR——測(cè)試種群的抗性倍數(shù)；T——測(cè)試種群的LC50值；S——敏感品系的LC50值。7.3抗性水平的評(píng)估根據(jù)抗性倍數(shù)的計(jì)算結(jié)果，按照下表中抗性水平的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)測(cè)試種群的抗性水平作出評(píng)估。表1抗性水平的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)附錄A0.0183(0.0143-0.0235)1.80±0.00阿維菌素甘藍(lán)夜蛾核型多角體病毒（PIB/ml）1.72(1.130-2.600)355.20(62.325-2024.313)1.39±0.170.4538±315.38氯蟲苯甲酰胺0.3428(0.270-0.436)2.22±0.04高效氯氟氰菊酯0.245(0.169-0.363)