高三生物多聚酶鏈式反應擴增dna

課題2多聚酶鏈式反應擴增DNA片段自學提綱：知識回顧：1.DNA分子的結構（外側、內側、基本單位）；2.DNA復制過程和特點；3.PCR技術概念及應用?；靖拍睿鹤冃浴托?、TaqDNA聚合酶、引物理解PCR技術的原理掌握PCR技術的全過程比較PCR技術和體內DNA復制的異同點。1、DNA分子的3’

端與5’

端-OH端為3’;磷酸基團的末端為5’

。2、DNA分子由兩條反向平行的脫氧核苷酸鏈根據(jù)堿基互補配對原則形成氫鍵連接而成。解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物（RNA）打開DNA雙鏈模板合成子鏈原料催化子鏈合成使DNA聚合酶能從引物3’端開始連接脫氧核苷酸

思考：3、體內DNA復制的條件是什么？體外擴增DNA如何提供相似環(huán)境？變性（80-100℃

）Taq聚合酶（耐高溫）15—30個核苷酸構成DNA或RNADNA雙鏈單鏈變性（加熱80-100℃

）復性（緩慢冷卻）4、DNA分子的熱變性原理：變性的目的：復性的目的：解開雙鏈有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ與兩條單鏈的結合一、PCR技術的原理利用DNA分子的熱變性原理，通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結合，從而完成體外DAN分子的擴增。體外DNA復制的條件：

四種脫氧核苷酸、耐高溫的聚合酶、引物、模板；緩沖溶液和嚴格控制溫度的溫控設備。復制的方向：子鏈的5’端向3’端延伸。二、PCR的反應過程每個循環(huán)包括：變性——復性——延伸

從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產物也可以作為模板參與反應，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅱ結合，進行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶只能特異性地復制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。三、實驗步驟：準備好PCR反應體系的配方用微量移液器按配方在往微量離心管中加入各組分蓋嚴蓋子，用手指輕輕彈擊管壁混合反應液離心10分鐘將離心管放入PCR儀上，設置好循環(huán)程序進行反應注意事項：詳見操作提示

四、結果分析與評價DNA含量的測定：稀釋→對照調零→測定→計算（公式見P63）波長260nm處讀數(shù)蒸餾水做對照50倍PCR技術與體內DNA復制的區(qū)別：

1.PCR不需要解旋酶；體內DNA復制需要；

2.PCR需要耐熱的DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶），而生物體內的聚合酶在高溫時會變性；

3.PCR一般要經歷三十多次循環(huán)，而生物體內DNA復制需要生物體自身的復制。練習鞏固1、關于PCR技術的應用，錯誤的一項是A古生物學、刑偵破案、DNA序列測定B診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學CDNA序列測定、基因克隆、刑偵破案‘D診斷遺傳疾病、合成核苷酸、DNA序列測定2、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技術最突出的優(yōu)點是A原理簡單B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐熱性D快速、高效、靈活、易于操作4、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須進行的關鍵步驟是A反復洗滌B不怕外源DNA污染C高壓滅菌D在—20℃儲存；/幼兒園家具ekn927ach忽然，他大叫起來：“有了……我做你的腿！”傻子湊過來，把拐杖恨恨地扔到一邊，雙手攙起我。“蘇院長，我可以幫著你做……”他攙扶著我的身子讓我做起動作來。伸臂曲臂、上仰搖頭、擴胸彎腰……在他的幫助下，我重復地做著……“好了好了……蘇院長能站起來了……”傻子拍著手在我面前歡呼起來。我失去了平衡慢慢地向一旁倒下，傻子慌亂地跑過來，我的整個身子重重地壓在他的身上。當我掙扎著爬起來的時候，傻子已是大汗淋漓了……不出我的預料，當天晚上傻子果真病了。高燒到了40℃，滿嘴里說著胡話：“壞了壞了……歪了歪了……快跑快跑……嘿嘿嘿嘿……”“傻子——傻子——”我把他緊緊地摟在懷里。肖燕立即撥通了已院的電話，救護車很快就來了。我跟傻子去了已院……三哥仔細地檢查了傻子的病情后對我說：“是勞累過度引起的風寒，沒有大礙，打幾天點滴就好了?！蔽业男睦镆粔K石頭落了地，迫切地對三哥說：“讓他多住幾天，好好待他，傻子是個懂事的好孩子……”自從傻子進了已院，我的鍛煉就沒有停歇過。早晨迎接太陽，傍晚披著霞光，在老人們的陪伴下自由自在的運動著。一開始，我借助著樹干、樹枝的支撐活動著自己的上肢和腰部，后來，漸漸地也能蹲馬步了。晚上，在睡覺之前，肖燕不厭其煩地給我按摩。有一次，她一邊給我按摩一邊問我：“蘇林，說句心里話，如果有那么一天，你的腿真的康復了，你還繼續(xù)開你的養(yǎng)老院嗎？”“你說呢？”我反問道?！叭藗兂Ｕf，嫁漢嫁漢穿衣吃飯……自從你的腿殘疾以來，家里的里里外外全靠我一個人支撐著,你隨便說說，我就干大半天甚至一兩天也干不完。我不是抱怨，你想過沒有？我也是五十多歲的人了，哪里有那么多的精力和體力干這么多的活？”她沒有回答我的問題直接跟我攤牌了，“俗話說：跟了當官的當娘子，跟了殺豬的翻腸子。我倒好自己殺豬自己翻腸子……”我愕然了，我知道她說的話都是真的！“蘇林，見好就收吧，我們已經盡力了……到時候等把我也累垮了，咱這個家我看你咋辦……”妻子的擔心不是沒有道理的。養(yǎng)老院剛剛有點起色，我就把它交給他人管理……我還真有點舍不得！“肖燕，就說我的腿吧，現(xiàn)在剛開始有點好轉，咱就放棄了，不治了，你想我這一輩子還有站起來的希望嗎？”“蘇林，你怎么這么固執(zhí)，這根本就是兩碼事！”“好了好了，我不跟你爭，你說的事等過了年我再想想法?！逼拮硬辉僬f話，低著頭默默地給我按摩著。我反而覺得有點不對勁兒，禁不住問她，“怎么不說話了呢？”“你不讓別人跟你爭誰還敢說話？你以為你是誰？倒霉蛋！”說著，她故意地把我的小腿擰了一下。