丙泊酚預(yù)處理防治人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與JNK信號(hào)通路的關(guān)系

丙泊酚預(yù)處理防治人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與JNK信號(hào)通路的關(guān)系研究背景氧化應(yīng)激可以引起內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,并導(dǎo)致炎癥反應(yīng)及血管病變,其致病機(jī)制是致線粒體功能障礙、細(xì)胞損傷及凋亡。有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激損傷后凋亡過(guò)程中起到重要作用。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun-N-terminalkinase,JNK)屬于MAPK家族成員,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、應(yīng)激與死亡。JNK通路的激活與細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系。丙泊酚(Propofol,PPF)是臨床常用的靜脈麻醉藥,其化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似于內(nèi)源性氧自由基清除劑維生素E,因此具有抗氧化活性。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)PPF具有清除活性氧(ROS)及抗凋亡的作用,然而其有關(guān)濃度報(bào)道不一,作用機(jī)制是否與JNK信號(hào)通路有關(guān)尚不詳。因此,本研究探討不同濃度PPF預(yù)處理對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(]humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)氧化應(yīng)激損傷的防治作用,評(píng)價(jià)其與JNK信號(hào)通路的關(guān)系。第一部分PPF防治H202誘導(dǎo)的HUVECs氧化應(yīng)激損傷的作用目的探討不同濃度PPF預(yù)處理對(duì)HUVECs氧化應(yīng)激損傷的防治作用。方法體外培養(yǎng)的HUVECs分為8組：對(duì)照組(Cl組)細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)；DMSO對(duì)照組(C2組)細(xì)胞培養(yǎng)基中加入DMSO(終濃度0.05%)；PPF組(P組)培養(yǎng)基中加入PPF(終濃度50μmol/L)處理4h；H202處理組(H組)培養(yǎng)基中加入H202(終濃度400μmol／L)處理4h；超低濃度PPF組(P1+H組)以1μmol/LPPF預(yù)處理HUVECs30min后加入H2O2400μmol/L處理4h；余在PI+H組基礎(chǔ)上增加預(yù)處理PPF濃度分別為5μmol/L低濃度PPF組(P5+H組)、25μmol/L中等濃度PPF組(P25+H組)和50μmol/L高濃度PPF組(P50+H組)。各組細(xì)胞培養(yǎng)后,用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞存活率,用流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡檢測(cè)ROS濃度。結(jié)果與C1組比較,H組細(xì)胞存活率明顯降低,ROS水平明顯增加(P<0.05)。C2組、P組與Cl組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與H組比較,PPF25μmol/L和50μmol/L濃度組預(yù)處理后細(xì)胞存活率升高,ROS產(chǎn)生明顯降低(P<0.05)。結(jié)論25μmol/L和50μmol/L濃度的PPF預(yù)處理可減輕氧化應(yīng)激對(duì)HUVECs的損傷。第二部分PPF對(duì)H202誘導(dǎo)HUVECs凋亡及JNK信號(hào)通路的影響目的探討PPF對(duì)HUVECs氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用是否是通過(guò)抑制.TNK通路、調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白實(shí)現(xiàn)的。方法體外培養(yǎng)的HUVECs分為8組：對(duì)照組(C1組)細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)；DMSO對(duì)照組(C2組)細(xì)胞培養(yǎng)基中加入DMSO(終濃度0.05%)；PPF組(P組)培養(yǎng)基中加入PPF(終濃度50μmol/L)處理4h；H202處理組(H組)培養(yǎng)基中加入H202(終濃度400μmol/L)處理4h：超低濃度PPF組(P1+H組)以1μmol/LPPF預(yù)處理HUVECs30min后加入H2O2400μmol/L處理4h；余在P1+H組基礎(chǔ)上增加預(yù)處理PPF濃度分別為5μmol/L氐濃度PPF組(P5+H組)、25μmol/L中等濃度PPF組(P25+H組)和50μmol/L高濃度PPF組(P50+H組)。各組細(xì)胞培養(yǎng)后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,用westernblot法檢測(cè)各組細(xì)胞Bax、Bcl-2、caspase-3、JNK及p-JNK等的蛋白表達(dá)。結(jié)果與C1組比較,H組細(xì)胞凋亡率升高,p-JNK表達(dá)上調(diào),Bax/Bcl-2比值升高,caspase-3表達(dá)升高(P<0.05)。C2組、P組與C1組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與H組比較,PPF5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L濃度組預(yù)處理后細(xì)胞凋亡率降低、p-JNK表達(dá)F調(diào),Bax/Bcl-2比值降低、caspase-3