抗菌性能試驗(yàn)方法

（規(guī)范性）抗菌性能試驗(yàn)方法通過(guò)將抗菌材料與菌液接觸一定時(shí)間，通過(guò)測(cè)定菌液中殘留活菌含量，計(jì)算材料的抗菌率。C.2試驗(yàn)環(huán)境試驗(yàn)采取無(wú)菌操作技術(shù)，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)符合GB19489《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》C.3試驗(yàn)菌種和儀器C.3.1試驗(yàn)用菌——大腸桿菌Escherichiacoli（CGMCC1.90，8099）——金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus（CGMCC1.89，ATCC6538）根據(jù)試驗(yàn)要求也可選用其他種類(lèi)的微生物。菌種或菌株應(yīng)由國(guó)家相應(yīng)菌種保藏管理中心提供并在報(bào)告中標(biāo)明試驗(yàn)用菌品種及分類(lèi)號(hào)。C.3.2菌種活化將標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)菌株接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）斜面培養(yǎng)基上，在（37±1）℃條件下培養(yǎng)24h后，在5℃~10℃下保藏（不得超過(guò)1個(gè)月），作為斜面保藏菌。將斜面保藏菌轉(zhuǎn)接到營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）培養(yǎng)基上，在（37±1）℃條件下培養(yǎng)（24±1）h，每天轉(zhuǎn)接1次。試驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用3～5代、24h內(nèi)轉(zhuǎn)接的新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物。C.3.3儀器——恒溫恒濕培養(yǎng)箱：溫控最大允許誤差±1℃;——冷藏箱：5℃~10℃;——生物安全柜——自動(dòng)蒸汽滅菌鍋——天平，精確度為0.001g——pH計(jì)——培養(yǎng)皿、試管、移液管（最大允許誤差±0.01mL）、接種環(huán)、酒精燈等。C.4試驗(yàn)準(zhǔn)備C.4.1細(xì)菌預(yù)培養(yǎng)用無(wú)菌接種環(huán)將細(xì)菌從保藏菌種的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移至斜面培養(yǎng)基上，于（35±1）℃培養(yǎng)（24±2）h后，再轉(zhuǎn)接至新鮮的斜面培養(yǎng)基上35±1）℃培養(yǎng)20h。C.4.2接種液的制備配制濃度為1/500的NB溶液，分裝至有玻璃珠的無(wú)菌小玻璃瓶，滅菌冷卻后使用。使用無(wú)菌接種環(huán)，轉(zhuǎn)移1~2環(huán)新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物至盛有20mL1/500NB溶液的小玻璃瓶中，放入恒溫?fù)u床中150r/min震蕩培養(yǎng)1.5h，確保細(xì)菌分散均勻，用1/500NB溶液調(diào)節(jié)菌液濃度在（2.5~10）×105CFU/mL范圍內(nèi)，即為試驗(yàn)接種液。C.4.3試樣的準(zhǔn)備試驗(yàn)樣本：抗菌材料的樣品3片，裁剪成（50±2）mm×（50±2）mm，厚度不超過(guò)10mm。對(duì)照樣本：未經(jīng)抗菌處理的樣品6片，裁剪成（50±2）mm×（50±2）mm，厚度不超過(guò)10mm。聚乙烯覆蓋膜，尺寸為（40±2）mm×（40±2）mm薄膜。將裁剪好的試樣樣片及覆蓋膜紫外照射30min。C.5試驗(yàn)過(guò)程C.5.1試樣接種將處理好的試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本分別放置在無(wú)菌平皿中，測(cè)試面朝上，用移液器吸取0.4mL菌液滴到每個(gè)試樣表面，將覆蓋膜蓋于接種好的菌液上，并向下輕輕按壓薄膜使菌液向四周擴(kuò)散，確保菌液未從薄膜邊緣溢出，在試樣接種完并蓋上薄膜后，蓋上皿蓋。C.5.2“0”時(shí)刻對(duì)照樣本即時(shí)回收接種結(jié)束后，選擇3片對(duì)照樣本立即進(jìn)行回收，在各培養(yǎng)皿中分別加入10mLSCDLP培養(yǎng)液進(jìn)行充分沖洗，即用移液器吸取和釋放SCDLP溶液，沖洗試樣4次以上。用0.03mol/L的PBS溶液對(duì)回收液進(jìn)行10倍梯度稀釋?zhuān)x擇適宜稀釋度的稀釋液，取1mL分別加入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，注入15ml左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂，輕搖以分散細(xì)菌，冷卻后倒置培養(yǎng)皿，于（35±1）℃培養(yǎng)（24±2）h。按照GB4789.2的方式進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。C.5.3試驗(yàn)抗菌培養(yǎng)后回收將裝有試樣的培養(yǎng)皿放入（35±1）℃、濕度不低于90%RH的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（8±2）h，分別于抗菌培養(yǎng)（8±2）h后，各取出3片對(duì)照樣本和3片試驗(yàn)樣本，按照C.5.2中的方式進(jìn)行回收、培養(yǎng)，按照GB4789.2的方式進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。C.5.4陰性對(duì)照分別吸取試驗(yàn)同批次的PBS溶液、培養(yǎng)基，加入至培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻凝固后在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)。C.6有效性判定：1）“0”時(shí)刻對(duì)照樣本即時(shí)回收的活菌數(shù)應(yīng)在（1~4）×104CFU/mL；陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)。2）對(duì)照樣本不應(yīng)有明顯的抗菌作用，對(duì)照樣本回收菌落數(shù)不應(yīng)低于“0”時(shí)刻對(duì)照樣本回收菌落數(shù)的10%，否則試驗(yàn)無(wú)效。C.7計(jì)算：按照公