生化檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)課件

生化檢驗(yàn)根底知識(shí)一、常規(guī)標(biāo)本的采集、處理〔一〕常規(guī)標(biāo)本的采集生化檢驗(yàn)的標(biāo)本有血液、尿液、腦脊液和腹水等，其中以血液標(biāo)本最為常用。1.檢驗(yàn)申請(qǐng)單申請(qǐng)單是實(shí)驗(yàn)檢查的第一步。一份完整的申請(qǐng)單應(yīng)包括：條碼號(hào)，門診號(hào)，住院號(hào)；病人的姓名，性別，出生日期；病房，床位號(hào)；臨床診斷，問題或特殊檢驗(yàn)本卷須知；申請(qǐng)檢查工程；標(biāo)本類型；采樣時(shí)間，標(biāo)本接收時(shí)間〔年.月.日.時(shí).分〕；有關(guān)治療情況〔如用藥情況〕；醫(yī)生姓名等。其中有關(guān)臨床和治療信息，特別是用藥信息是檢驗(yàn)師評(píng)價(jià)結(jié)果的必要條件。藥物困難在體外影響分析方法或在體內(nèi)引去病理變化，因此，要特別注意在申請(qǐng)單上提供類信息.。2.

血液標(biāo)本的采集生化檢驗(yàn)用的血液標(biāo)本可來自于靜脈、動(dòng)脈或毛細(xì)血管。靜脈血是最常用的標(biāo)本，靜脈穿刺是最常用的采血方法。毛細(xì)血管采血主要用于兒童，血?dú)夥治龆嗍褂脛?dòng)脈血。〔1〕采血前準(zhǔn)備為了使實(shí)驗(yàn)室結(jié)果有效地用于臨床，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)了解在收集標(biāo)本前和收集標(biāo)本時(shí)，所有會(huì)影響實(shí)驗(yàn)室的非患者內(nèi)在疾病因素。采取各種措施，提出對(duì)患者采集標(biāo)本前以及采集時(shí)的要求，稱之為患者準(zhǔn)備。〔2〕靜脈采血法采血步驟：采血前要核對(duì)病人姓名、年齡、性別、編號(hào)及檢驗(yàn)工程等，按試驗(yàn)工程要求，準(zhǔn)備好相應(yīng)的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。病人應(yīng)取坐位或臥位，采血部位通常是前臂肘窩的正中靜脈。假設(shè)用普通采血法，采血后應(yīng)取下針頭，將血液沿管壁緩慢注入試管內(nèi)。f.防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不枯燥、不清潔；穿刺不順利，組織損傷過多；淤血時(shí)間過長；抽血速度太快；血液注入容器時(shí)未取下針頭或注入速度過快產(chǎn)生大量泡沫；震蕩過于劇烈等。假設(shè)用普通注射器采血后，未取針頭直接將血注入真空管內(nèi)，也易造成溶血。體內(nèi)溶血屬合格標(biāo)本，但應(yīng)在報(bào)告單上注明。g.如需全血、血漿，可將血液如上法注入盛有抗凝劑的試管內(nèi)，立即輕輕搖動(dòng)，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝固。如需作二氧化碳結(jié)合力測定時(shí)，抽取血液后，應(yīng)立即注入有石蠟油的抗凝試管中，注入時(shí)針頭應(yīng)插入石蠟油面以下，以隔絕空氣，立即送驗(yàn)。否那么血液中二氧化碳逸出，使檢驗(yàn)結(jié)果降低，影響準(zhǔn)確性。h.采血完畢，連同檢驗(yàn)單及時(shí)送驗(yàn)，清理用物，歸復(fù)原處。一次性注射器使用后應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡集中處理。常用全血標(biāo)本采血量與要求〔不需空腹〕

常用全血標(biāo)本采血量與要求〔空腹〕常用血清標(biāo)本采血量與要求〔3〕動(dòng)脈采血法肱動(dòng)脈、股動(dòng)脈、橈動(dòng)脈以及其它任何部位的動(dòng)脈都可以作為采血點(diǎn)，但多項(xiàng)選擇擇肱動(dòng)脈和橈動(dòng)脈。操作方法用2ml注射器，連接7號(hào)針頭，吸1：500肝素生理鹽水溶液1ml，將活塞來回抽動(dòng)，使內(nèi)壁沾勻肝素，再推掉全部肝素溶液，將活塞推至空筒頂端后不再回拉，以保持注射器內(nèi)無空氣。選擇動(dòng)脈〔橈動(dòng)脈采血比較方便〕，常規(guī)消毒病人的皮膚及操作者的左手食、中指后，以左手繃緊皮膚，右手持注射器，用左手食指觸摸動(dòng)脈搏動(dòng)處，以45度角進(jìn)針，見血液自動(dòng)參加空筒內(nèi)至2ml后拔出針頭，囑病人按壓局部5分鐘，應(yīng)立即用橡皮泥或橡皮塞封閉針頭〔針頭斜面埋入橡皮中即可〕，以隔絕空氣，在手中搓動(dòng)注射器，使血與肝素混合，立即送驗(yàn)。本卷須知①．血標(biāo)本必須隔絕空氣。因?yàn)檠獨(dú)夥治鍪侵府?dāng)天大氣壓條件下，用隔絕空氣的血標(biāo)本與一定濃度的氣體相結(jié)合，而后測定人體內(nèi)PH值、氧分壓等，作為監(jiān)測及追蹤觀察病人的血?dú)馇闆r。血標(biāo)本中假設(shè)進(jìn)入空氣將產(chǎn)生誤差。因此采血的注射器使用前應(yīng)檢查有無漏氣，針頭必須連接緊密，標(biāo)本采集后立即封閉針頭斜面。②．及時(shí)送驗(yàn)。標(biāo)本采集后應(yīng)立即送驗(yàn)，如要等待測定，應(yīng)將標(biāo)本置于0到4度冰箱內(nèi)保存不得超過1小時(shí)，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果?！?〕真空采血法雙向針一端插入真空試管內(nèi)，另一端在持針器的幫助下刺入靜脈，血液在負(fù)壓作用下自動(dòng)流入試管內(nèi)。由于在完全封閉狀態(tài)下采血，防止了血液外溢引起的污染，并有利于標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn)和保存。標(biāo)準(zhǔn)真空采血管采用國際通用的頭蓋和標(biāo)簽顏色顯示采血管內(nèi)添加劑種類和試驗(yàn)用途。①普通血清管紅色頭蓋，采血管人不含添加劑，用于常規(guī)血清生化，血庫和血清學(xué)相關(guān)檢驗(yàn)。②快速血清管橘紅色頭蓋，采血管內(nèi)有促凝劑，可激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白多聚體，進(jìn)而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊?？焖傺骞芸稍?分鐘內(nèi)使采集的血液凝固，適用于急診血清系列化試驗(yàn)。③惰性別離膠促凝管金黃頭蓋，采血管內(nèi)添加有惰性別離膠和促凝劑。標(biāo)本離心后，惰性別離膠能夠?qū)⒀褐械囊后w成分〔血清或血漿〕和固體成分〔紅細(xì)胞，白細(xì)胞，血小板，纖維蛋白等〕徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標(biāo)本在48小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。促凝劑可快速激活凝血機(jī)制，加速凝血過程，適用于急診血清生化試驗(yàn)。④肝素抗凝管綠色頭蓋，采血管內(nèi)添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標(biāo)本凝血時(shí)間。適用于紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)，血?dú)夥治觯t細(xì)胞壓積試驗(yàn)，血沉及普能生化測定，不適于做血凝試驗(yàn)。過量的肝素會(huì)引起白細(xì)胞的聚集，不能用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)。因其可使血片染色后背景呈淡藍(lán)色，故也不適于白細(xì)胞分類。⑤血漿別離管淺綠色頭蓋，在惰性別離膠管內(nèi)參加肝素鋰抗凝劑，可到達(dá)快速別離血漿的目的，是電解質(zhì)檢測的最正確選擇，也可用于常規(guī)血漿生化測定和ICU等急診血漿生化檢測。血漿標(biāo)本可直接上機(jī)并在冷藏狀態(tài)下保持48小時(shí)穩(wěn)定。⑧.枸櫞酸鈉血沉試驗(yàn)管黑色頭蓋，血沉試驗(yàn)要求的枸櫞酸鈉濃度是3.2%(相當(dāng)于0.109mol/L)抗凝劑與血液的比例為1：4⑨.草酸鉀/氟化鈉灰色頭蓋，氟化鈉是一種弱效抗凝劑，一般常同草酸鉀或乙碘酸鈉合并使用，其比例為氟化鈉1份，草酸鉀3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天內(nèi)不凝固和抑制糖分解，它是血糖測定的估良保存劑，不能用于尿素酶法測定尿素，也不有用于堿性磷酸酶和淀粉酶的測定，推薦用于血糖檢測。3.尿液標(biāo)本的采集尿液標(biāo)本的采集

〔1〕

采集方法

尿液標(biāo)本有隨機(jī)新鮮尿、定時(shí)尿及

24

小時(shí)尿，根據(jù)檢查工程選擇標(biāo)本的采集類型。定量生化分析多收集

24

小時(shí)尿液，

24

小時(shí)尿標(biāo)本采集方法如下：

囑病人在早晨

8

時(shí)排尿棄去，以后每次排尿均收集于一大容器內(nèi)，至次日早晨

8

時(shí)最后一次尿亦收集于容器內(nèi)。測量并記錄

24

小時(shí)尿液總量，然后混勻尿液，取適量尿液送檢。

〔2〕

本卷須知

收集尿液標(biāo)本的容器必須清潔枯燥，

最好是一次性使用的容器。假設(shè)容器反復(fù)使用，那么須用洗滌液和自來水清洗，

再用蒸餾水沖洗。尿標(biāo)本要防止混入月經(jīng)血、陰道分泌物、精液、前列腺液、糞便等異物。尿標(biāo)本收集后應(yīng)

12

時(shí)內(nèi)送檢，以免細(xì)菌作用和化學(xué)成分分解。假設(shè)不能及時(shí)檢驗(yàn)〔如收集

24

小時(shí)尿液〕，將標(biāo)本置冰箱保存，假設(shè)參加防腐劑，保存效果更佳。

4.其他特殊標(biāo)本的采集需專科醫(yī)生操作二、標(biāo)本的處理標(biāo)本處理不當(dāng)將可能引起比分析更大的誤差。因此，應(yīng)根據(jù)分析目的選擇適宜的抗凝劑、防腐劑和處理方法1、抗凝劑應(yīng)用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。阻止血液凝固的化學(xué)試劑稱為抗凝劑〔anticoagulant〕。對(duì)抗凝劑的一般要求是用量少、溶解度大、不影響測定。生化檢驗(yàn)常用的抗凝劑有以下幾種：〔1〕肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖，其抗凝機(jī)理主要是對(duì)抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集。肝素抗凝血常用于血?dú)夥治龊途植可こ痰臏y定，使用1.0g／L的肝素溶液0.5ml可抗凝5ml血液。〔2〕草酸鉀－氟化鈉草酸鉀可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固。草酸鉀溶解度大，抗凝作用強(qiáng)。氟離子能結(jié)合鈣而抗凝，但抗凝效果較弱。氟離子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解，假設(shè)未加氟化鈉，血標(biāo)本中葡萄糖含量將以每小時(shí)6％的速度下降。而在氟化鈉的存在下，血糖濃度在25℃可穩(wěn)定24小時(shí)，4℃可穩(wěn)定48小時(shí)。因此，草酸鉀－氟化鈉是血糖測定標(biāo)本常使用的抗凝劑。2.防腐劑尿液檢驗(yàn)最好留取新鮮標(biāo)本及時(shí)檢查，否那么尿液生長細(xì)菌，使尿液中的化學(xué)成分發(fā)生變化。在留取24小時(shí)或12小時(shí)尿液時(shí)，尿液標(biāo)本應(yīng)置冰箱保存或參加防腐劑〔anti－septic〕，常用的防腐劑有：〔2〕甲苯甲苯可在尿液外表形成薄膜，防止細(xì)菌繁殖，用量1．0～2．0ml甲苯／100ml尿液，適用于尿肌酐、尿糖、蛋白質(zhì)、丙酮等生化工程的測定。〔3〕冰醋酸用量5～10ml冰醋酸／24小時(shí)尿液，適用于24小時(shí)尿醛固酮測定?！?〕麝香草酚可抑制細(xì)菌生長，用量為0．lg麝香草酚／100ml尿液。用10％的麝香草酚異丙醇溶液可增加麝香草酚的溶解量，到達(dá)抑菌及保護(hù)代謝物的作用，適用于尿鉀、鈉、鈣、氨基酸、糖、尿膽原、膽紅素等測定。3.標(biāo)本的別離儲(chǔ)存和轉(zhuǎn)運(yùn)血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)別離血清或血漿，否那么可發(fā)生紅細(xì)胞與血清之間成分的相互轉(zhuǎn)移，或細(xì)胞中的某些酶分解待測物等，而影響檢驗(yàn)結(jié)果。例如，血清無機(jī)磷可由于紅細(xì)胞內(nèi)有機(jī)磷酸酯被磷酸酯酶的水解而增加；血清中葡萄糖可因紅細(xì)胞內(nèi)糖酵解酶的分解作用而降低此外，鈉存在于紅細(xì)胞與血清中之比為1:2；鉀在血清和紅細(xì)胞中之比為1:20；鈣在紅細(xì)胞中極少，幾乎全部在血清中。因此，血清鈉、鉀、鈣測定時(shí)，需注意及時(shí)別離標(biāo)本，假設(shè)不能立刻別離血清或血漿，應(yīng)將標(biāo)本放置于室溫或37℃水浴箱內(nèi)，不能將血液標(biāo)本直接放入4℃冰箱，以免發(fā)生溶血。對(duì)不是因操作不當(dāng)引起的溶血、脂血或膽紅素血，應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明，供醫(yī)生參考。尿液、腦脊液和胸腹水等標(biāo)本常需離心，取上清液進(jìn)行分析別離后的標(biāo)本假設(shè)不能及時(shí)檢測或需保存以備復(fù)查時(shí)，一般應(yīng)放于4℃冰箱，某些檢測工程的標(biāo)本存放于-20℃冰箱更穩(wěn)定。標(biāo)本存放時(shí)需加塞，以免水分揮發(fā)而使標(biāo)本濃縮。需注意的是，某些檢測指標(biāo)如乳酸脫氫酶的標(biāo)本應(yīng)存放于室溫，置4℃反而不穩(wěn)定。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室分析，標(biāo)本管道傳遞系統(tǒng)可加快標(biāo)本傳遞速度和防止標(biāo)本的錯(cuò)誤傳遞。假設(shè)標(biāo)本不能及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室或欲將標(biāo)本送到上級(jí)部門或檢測中心進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本裝入試管密封，再裝入乙烯塑料袋，置冰瓶或冷藏箱內(nèi)運(yùn)輸，運(yùn)送過程中應(yīng)防止劇烈震蕩。要視所有標(biāo)本為傳染品，對(duì)“高危〞標(biāo)本，如乙肝病人標(biāo)本、艾滋病病人標(biāo)本等，要注明標(biāo)識(shí)；急癥或危重病人標(biāo)本要特別注明。嚴(yán)禁標(biāo)本直接用口吸取、接觸皮膚或污染器皿的外部和實(shí)驗(yàn)臺(tái)。標(biāo)本用后均要做消毒處理，盛標(biāo)本的器皿要消毒處理或毀型、燃燒。二、比色分析的要點(diǎn)及本卷須知1.

分光光度計(jì)測量誤差：由朗伯-比爾定律可知，只有在一定的濃度范圍內(nèi)，即一定的吸光度范圍同內(nèi)，由分光光度計(jì)測量所引起的測定結(jié)果的相對(duì)誤差才是較小的；當(dāng)透光率接近0或1.0時(shí)，其相對(duì)誤差趨于無限大；一般在百分透光率在10~80%的范圍內(nèi)(即吸光度在1~0.1)，濃度測量相對(duì)誤差較?。粚?duì)于精密度高的儀器。當(dāng)吸度時(shí)，百分透光率約為20-60%，測量誤差約為1%。減少分光光度計(jì)的測量誤差的條件有

選擇適宜波長的入射光：由于有色物質(zhì)對(duì)光有選擇性吸收，為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度，必須選擇溶液最大吸收波長的入射光。

控制吸光度A的準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍：由朗伯-比耳定律可知，吸光度只有控制在0.2~0.7讀數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，測量的準(zhǔn)確度較高。

選擇參比溶液：參比溶液是用來調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的。假設(shè)樣品溶液，試劑，顯色劑無無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應(yīng)采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液2.顯色反響及其影響因素顯色反響一般要求

(1)選擇性好:顯色劑最好只與一種被測組分起顯色反響;

(2)靈敏度高:靈敏度高有助微量組分的測定;

(3)有色化合物性質(zhì)穩(wěn)定:確保前后測定準(zhǔn)確.

(4)顯色劑與有色物顏色反差大:兩者最大吸收波長之差應(yīng)大于60nm;

(5)顯色反響要易于控制:結(jié)果確實(shí)保實(shí)驗(yàn)再現(xiàn)性.影響顯色反響的主要因素

(1)顯色劑用量:通過實(shí)驗(yàn)來確定最適用量;

(2)反響液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性.

(3)反響溫度:不同的顯色反響需要不同的反響溫度,一般顯色反響可在室溫下完成.

(4)顯色反響時(shí)間:顯色反響的速度有快有慢.

(5)干擾離子的影響:應(yīng)采用適當(dāng)方法消除其影響3.722型分光光度計(jì)使用操作和本卷須知本卷須知：①.每臺(tái)儀器所配套的比色皿不能與其它儀器上的比色皿單個(gè)調(diào)換。②.如果大幅度改變測試波長時(shí)，需等數(shù)分鐘后才能正常工作?！惨虿ㄩL由長波向短波或短波向長波移動(dòng)時(shí)，光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)較慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間。③.如果顯示數(shù)值有異常很可能為鎢燈已壞，請(qǐng)盡早更換。4.用于免疫測定，根本原理是：抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物，使反響液出現(xiàn)濁度。當(dāng)反響液中保持抗體過量時(shí)，形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加，反響液的濁度亦隨之增加，與一系列的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出受檢物的含量。免疫濁度測定法按照儀器設(shè)計(jì)的不同可以分為兩種，即比濁儀測定〔turbidimetermeasure〕和散射比濁儀測定〔nephelomitermeasure〕。比濁儀測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減，其讀數(shù)以吸光度A表示。A什反映了入射光與透射光的比率〔A＝2－log10T，T代表濁度百分比〕。散射比濁儀測定是測量入射光遇到質(zhì)點(diǎn)〔復(fù)合物〕后呈一定角度散射的光量，該散射光經(jīng)放大后以散射值表示。測定方法有終點(diǎn)法和速率法兩種。終點(diǎn)法是在抗原-抗體反響到達(dá)平衡時(shí)，即復(fù)合物形成后作用一定時(shí)間，通常是30-60min，復(fù)合物濁度不再受時(shí)間的影響，但又必須在聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前進(jìn)行濁度測定。速率法是在抗原抗體結(jié)合反響的過程中，在單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合的速度。速率法是測最大反響的速度，即反響到達(dá)頂峰時(shí)的峰值?？乖贵w結(jié)合反響在幾十秒內(nèi)得出結(jié)果，峰值的上下與抗原的量成正比，峰值出現(xiàn)的時(shí)間和抗體濃度、抗原抗體的親和力直接相關(guān)。速率法的靈敏度和特異性都比終點(diǎn)法好。免疫透射濁度法，其反響曲線不規(guī)那么，試驗(yàn)前進(jìn)行五點(diǎn)定標(biāo)，按曲線回歸計(jì)算。全自動(dòng)生化分析儀一、良好工作環(huán)境文章1)環(huán)境溫度：18℃～32℃，工作中波動(dòng)小于4±2℃、熱量11000KJ／U、濕度：40—80％RH，并無冷凝；假設(shè)室溫不穩(wěn)定，應(yīng)安裝空調(diào)，安裝在通風(fēng)好，分析儀不應(yīng)暴露在流動(dòng)空氣中。2)防止陽光直射、遠(yuǎn)離高頻電磁波等。3)給水及排水：分析儀使用去離子水，去離子水器安裝在距水龍頭10M內(nèi)，去離子水電阻率大于0.5Mn，用0.5ram的過濾網(wǎng)過濾細(xì)菌，去離子水及排水孔安裝在儀器10M內(nèi)，廢液管連到醫(yī)院的傳染病處理裝置處。4)接有效的穩(wěn)壓、不間斷電源(UPS)，以防停電造成分析儀損壞或數(shù)據(jù)喪失，有保護(hù)性接地線，以防電擊和分析儀故障發(fā)生。5)實(shí)驗(yàn)室整潔，空間足夠，室內(nèi)無化學(xué)腐蝕性試劑，無煙霧和水蒸氣3)分析系統(tǒng)：反響杯為特殊硬質(zhì)玻璃，反響時(shí)間8分20秒，反響總量150～550ul，自動(dòng)記錄質(zhì)控，自動(dòng)沖洗，耗水量平均125升／小時(shí)。生化試劑選擇和特點(diǎn)1)試劑有國家標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)、銷售經(jīng)營許可證，使用方法符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)或美國FDA推薦方法，試劑配方是中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)或國際上推薦的配方。2)系統(tǒng)使用四種規(guī)格的試劑瓶：

120ml試劑瓶、60ml試劑瓶、30ml試劑瓶、15ml試劑瓶，當(dāng)使用15ml或30ml試劑瓶時(shí)，必須使用相應(yīng)的擋板固定試劑瓶；當(dāng)使用120ml試劑瓶時(shí)，取出試劑瓶之間的擋板，在試劑冰箱內(nèi)設(shè)置120ml試劑瓶時(shí)要求兩個(gè)60ml試劑瓶的寬度。參數(shù)設(shè)置1)SamlevolumeandDilution(樣品量和沖洗量)，樣品分配量范圍1.6～25ul或稀釋量1.6～20ul，沖洗分配量0或10ul：ReagentR1volandDilution(第1試劑量和稀釋量)試劑范圍15～250ul或稀釋水量0或235ul；ReagentR2v0landDilution(第2試劑量和稀釋量)試劑范圍15—250ul或稀釋水量0或235ul。假設(shè)R2為0，此項(xiàng)不能設(shè)置。一般按商品試劑說明書上的推薦量，結(jié)合分析儀中規(guī)定的樣品和試劑的最小加樣量、加樣范圍和最小反響總體積按比例進(jìn)行縮減。足夠精密度的情況下．盡可能減少樣品的用量．以減少樣品中的成分對(duì)測定的影響。一般情況下，樣品體積占反響總體積的10％。2)WavelengthPri(主波長)Sec(副波長)。實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。通常選最大吸收峰為主波長，雙波長的設(shè)定．最好向該試劑廠家索取最為平安，因?yàn)椴煌碾p波長測定抗干擾不同。3)Method(方法學(xué))可設(shè)置END終點(diǎn)法、RATE速率法、FIXED兩點(diǎn)法、END1、RATE1、FIXED1，前三種是以試劑為空白，后三種是以比色杯為空白的；END終點(diǎn)分析法檢測的是反響到達(dá)平衡時(shí)的吸光度值：RATE速率法適用于呈零極反響的酶催化活性濃度的測定，其根本原理是：基于恒定期(零級(jí)反響期)酶促反響速率和酶催化活性濃度呈正比；FIXED固定時(shí)間法：是動(dòng)態(tài)反響期的吸光度變化累加各讀點(diǎn)問隔吸光度差值，取吸光度差值的累加值計(jì)算結(jié)果。4)Reaction(反響方向)：+、-，END與FIXED法不起作用，但RATE法一定要輸入正確。5)PointlFstLst(測量l，輸入光電檢測起始點(diǎn)和結(jié)束點(diǎn))和Point2FstLst(測量2，輸入光電檢測起始點(diǎn)和結(jié)束點(diǎn))，Pointl為主測定，Point2為輔助測定終點(diǎn)分析法：測定時(shí)間的選擇應(yīng)允分考慮到干擾的問題，讀點(diǎn)提前、反響達(dá)不到平衡、讀點(diǎn)緩后、非檢測物質(zhì)反響、干擾物質(zhì)生成、影響測定值，如：溴甲酚綠法檢測白蛋白，BCG試劑在PH4.2時(shí)，不但能與白蛋白起反響，而且還與血清中多種球蛋白起反響，但白蛋白與BCG的反響是在60秒以內(nèi)完成的，而其他球蛋白與之反響要在30分鐘后才能完成，因此，為使測定結(jié)果趨于準(zhǔn)確，讀數(shù)不應(yīng)超過10分鐘測定RATE法對(duì)于一種物質(zhì)的測定，由于選擇試劑和分析方法不同，其測定時(shí)間也隨之變化，因而對(duì)于特定的試劑和分析方法，應(yīng)先做出反響進(jìn)程曲線，從曲線上選擇最正確的測定時(shí)間。6)Linearity(線性范圍)不同試劑公司的試劑質(zhì)量不同，基測定的線性范圍也不同。對(duì)于酶活性來說，可取一高值樣品作倍比稀釋，按分析工程的波長、樣品量與試劑量、孵育時(shí)間測定各管活性濃度，以活性濃度對(duì)稀釋度作圖，在測定線性內(nèi)的最高濃度為測定線性上限，最低濃度為測定線性下限。對(duì)于帶標(biāo)準(zhǔn)的其他生化工程的測定，可配置系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，測定各濃度的吸光度變化繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同樣可以求得測定線性。做好室內(nèi)質(zhì)控：在每天的操作中，質(zhì)控樣品的測定數(shù)據(jù)被貯存下來，進(jìn)行質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的變異檢查。1)進(jìn)行質(zhì)控分析申請(qǐng)操作2)在系統(tǒng)內(nèi)放置設(shè)有質(zhì)控樣品的綠色樣品架。3)進(jìn)行了質(zhì)控分析申請(qǐng)后．開始分析，分析操作開始。4)分析綠色樣品架后，檢查質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)有無錯(cuò)誤。常規(guī)性維護(hù)：1、每日維護(hù)1)檢查樣本和試劑分配器是否有滲漏；2)目視檢查洗劑原液DetergentB桶內(nèi)液面是否足夠；3)檢查／清洗樣本針、試劑針和攪拌棒；4)檢查ISE試劑分配器是否滲漏，自動(dòng)沖樣品池和電極通路；2、每周維護(hù)1)手工清洗樣本針、試劑針和攪拌棒；2)進(jìn)行W2(自動(dòng)沖洗比色杯、攪拌棒、試劑探針與廢液管路)，每周交替使用酸性或堿性洗液作W2(酸性洗液濃度為lmmol／L的鹽酸，堿性洗液有效濃度為5％的次氯酸鈉；3)進(jìn)行Photoca1(光電校正)，平均值：Men．CheckRange：0.030，吸光度差值：Abs．Checkrange：0.1，常見杯錯(cuò)誤有：擦傷檢查錯(cuò)誤(綠色)；數(shù)據(jù)分散檢查錯(cuò)誤(紅色)：數(shù)據(jù)比較檢查錯(cuò)誤(蘭色)4)清洗樣品預(yù)稀釋瓶；5)檢查ISE電極選擇性。3、每月維護(hù)1)清洗樣本探針、試劑探針和攪拌棒沖洗池；2)清洗空氣過濾網(wǎng)；3)清洗去離子水和樣品針過濾片；4)每兩個(gè)月ISE電極維護(hù)，如果電極已經(jīng)失效，不會(huì)得到恰當(dāng)?shù)姆治鼋Y(jié)果；每兩個(gè)月或每20000個(gè)測試量要更換一次最先壞的電極。4、每三個(gè)月維護(hù)1)清洗沖洗管嘴；2)清洗離子水桶；。3)更換水機(jī)棉芯、活性碳；4)ISE每三個(gè)月維護(hù)更換混合物和廢液滾動(dòng)泵管；5、每六個(gè)月維護(hù)1)更換光源燈泡；光電數(shù)據(jù)任意波長100％的吸光度超過1.7354或低于0.01時(shí)應(yīng)更換光源燈泡：出現(xiàn)“l(fā)ampdark〞或者工程出現(xiàn)大量“報(bào)警標(biāo)志“，反響曲線呈波浪樣改變并排除沖洗頭堵塞時(shí)應(yīng)更換光源燈泡，更換光源燈泡后，一定要進(jìn)行光電校正(Photoea1)。2)清洗比色杯與比色杯輪盤；清洗比色杯與比色杯輪盤后，一定要進(jìn)行光電校正6、非經(jīng)常性維護(hù)1)檢查比色杯、樣品針與試劑針、攪拌棒、沖洗頭管、樣品和試劑分配器、清洗液蠕動(dòng)泵、離子水過濾器、樣品針過濾器，如果有出現(xiàn)故障及時(shí)更換。2)ISE非常規(guī)性維護(hù)，必要時(shí)應(yīng)更換參比電極；添加參比液；更換相應(yīng)試劑。常見的報(bào)警信息及處理方法分析1.分析儀故障原因：異常關(guān)機(jī)，啟動(dòng)UPS儲(chǔ)藏電源，電力檢測失敗。分析儀故障處理：開主機(jī)電源EM／STOP(黃色鍵)，再按復(fù)位開關(guān)RESET(~色鍵)，再分電電源POWER-ON(綠色鍵)，直到光電校正燈穩(wěn)定才能開始分析，大約20分鐘。2.分析儀故障原因：試劑冰箱蓋未完全關(guān)閉或試劑盤未被固定釘子定位。分析儀故障處理：水平放置試劑盤．對(duì)準(zhǔn)固定銷，按下固定釘，關(guān)閉蓋子，重新檢測試劑3.分析儀故障原因：試劑被放錯(cuò)位置。分析儀故障處理：設(shè)置適宜的試劑瓶。4.分析儀故障原因：試劑少了／試劑空了。分析儀故障處理：認(rèn)真檢查，補(bǔ)足試劑用量。5.分析儀故障原因：去離子水少了／去離子水空了，純水輸出管道堵塞或者純水機(jī)故障。分析儀故障處理：檢查純水機(jī)或輸出管道工作狀態(tài)是否正常，必要時(shí)找醫(yī)院維修組。6.分析儀故障原因：樣品探針被堵塞．樣品包含有較多的纖維和蛋白。分析儀故障處理：棄去纖維或做必要的處理和過濾，檢查是否有其他物質(zhì)混入，用鋼絲插入樣品探針除去阻塞。微量加樣器的使用、維護(hù)和校準(zhǔn)

1根本原理、分類及適用范圍1.1空氣墊加樣器活塞沖程〔空氣墊〕加樣器中的空氣墊的作用是將吸于塑料吸頭內(nèi)的液體樣本與活塞分隔開，空氣墊通過加樣器活塞的彈簧樣運(yùn)動(dòng)而移動(dòng)，進(jìn)而帶動(dòng)吸頭中的樣本移動(dòng)。加樣體積一般在1μl至10ml之間。適合于血清、血漿等普通樣本的加樣，在臨床上最常使用。1.2活塞正移動(dòng)加樣器活塞正移動(dòng)加樣器的吸頭與空氣墊加樣器吸頭有所不同，其內(nèi)含一個(gè)可與加樣器耦合的活塞，這種吸頭一般由生產(chǎn)廠家配套生產(chǎn)，不能使用普通的吸頭或不同廠家的吸頭。適用于具有高揮發(fā)性、高粘稠度以及密度大于2.0g/cm3的液體或聚合酶鏈反響(PCR)。2影響微量加樣器準(zhǔn)確的幾種常見因素及對(duì)策2.1影響微量加樣器的物理因素流體靜壓加樣時(shí)，加樣器吸頭只能以垂直方式浸入2-3mm，因?yàn)閮A斜的方式將減少液體柱的高度，導(dǎo)致吸取液體過多。吸頭潤濕當(dāng)吸頭排空時(shí)，仍會(huì)有一些殘留的液體以

薄膜的形式吸附在吸頭里面，所以，在加樣時(shí)先吸打液體數(shù)次，充分潤濕吸頭管腔,以保證加樣的一致性。2.1.3流體動(dòng)力學(xué)為確保樣本的穩(wěn)定釋放，加樣器吸頭應(yīng)靠在試管壁上，液體順著管壁流出，防止出現(xiàn)液滴，液滴的形成可由于其外表張力的作用而阻止樣本的釋放。2.2加樣器本身的質(zhì)量因素微量加樣器的失準(zhǔn)率與加樣器的使用次數(shù)成正相關(guān)關(guān)系；同標(biāo)值的可調(diào)加樣器的失準(zhǔn)率比同標(biāo)值的定值加樣器失準(zhǔn)率大。標(biāo)值容量小的失準(zhǔn)率較容量大的失準(zhǔn)率大。所以，有必要根據(jù)工