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李泰軍2021.06BCA法測定蛋白質(zhì)濃度編輯課件一實驗?zāi)康亩嶒炘砣龑嶒灢牧吓c儀器四實驗步驟五本卷須知六思考題編輯課件一實驗?zāi)康?◆學(xué)習BCA法測定蛋白質(zhì)濃度的根本原理◆掌握BCA法測定蛋白質(zhì)的技術(shù)編輯課件二實驗原理BCA(bicinchoninicacid，二辛可酸)法測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其復(fù)原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反響,使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍色復(fù)合物，在562nm有強烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測定。編輯課件其反響式為:蛋白質(zhì)+BCA試劑+Cu2+→復(fù)合物混合物由蘋果綠變?yōu)樽咸m色復(fù)合物BCA測定蛋白質(zhì)的范圍是20μg/ml~200μg/ml，微量BCA測定范圍在0.5μg/ml~10μg/ml。此方法被科研工作者廣泛選用編輯課件三實驗器材與試劑1．器材:分光光度計；恒溫水浴箱；槍式移液管；試管13支；吸管2ml1支、0.1ml3支試劑:試劑A；試劑B；蛋白質(zhì)標準液；待測樣品編輯課件四實驗步驟1.取試管13支，編號〔除空白管只做1管外，其它各號測定管均重復(fù)做兩管〕，按下表操作并記錄：編輯課件管號試劑(μl)空白管標準管測定管×21×22×23×24×25×2蛋白質(zhì)標準液(1.5mg/ml)—20406080100—蒸餾水(ml)100８０604020——待測樣品(ml)——————100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0混勻后，在３７攝氏度下保溫３０分鐘，比色測定BCA法測定蛋白質(zhì)含量編輯課件2．以蛋白質(zhì)含量為橫坐標，光吸收值為縱坐標繪制標準曲線3．用測定管平均光吸收值在標準曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量，計算求出該待測血清蛋白質(zhì)的含量(g/L)。4．從標準管中選擇一管與測定管光吸收值相接近者，按比色法計算公式計算求出該待測血清的蛋白質(zhì)濃度(g/L)。編輯課件思考題???

試比較ＢＣＡ法、雙縮脲法、Lowery法的異同.為什么ＢＣＡ法常用與科研？與其他方法相比它有什么特點和優(yōu)勢？編輯課件特點：1.操作簡便快速，比經(jīng)典的lowry法快4倍2.靈敏度高，最低檢測量可達0.5ug3.準確，試劑穩(wěn)定性好，在20ug/ml~2000ug/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系4.經(jīng)濟實用，可在微孔板中進行，待測樣品體積為1

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