BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度

李泰軍2021.06BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度編輯課件一實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?shí)驗(yàn)原理三實(shí)驗(yàn)材料與儀器四實(shí)驗(yàn)步驟五本卷須知六思考題編輯課件一實(shí)驗(yàn)?zāi)康?◆學(xué)習(xí)BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的根本原理◆掌握BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)的技術(shù)編輯課件二實(shí)驗(yàn)原理BCA(bicinchoninicacid，二辛可酸)法測(cè)定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其復(fù)原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反響,使其由原來(lái)的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm有強(qiáng)烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測(cè)定。編輯課件其反響式為:蛋白質(zhì)+BCA試劑+Cu2+→復(fù)合物混合物由蘋果綠變?yōu)樽咸m色復(fù)合物BCA測(cè)定蛋白質(zhì)的范圍是20μg/ml~200μg/ml，微量BCA測(cè)定范圍在0.5μg/ml~10μg/ml。此方法被科研工作者廣泛選用編輯課件三實(shí)驗(yàn)器材與試劑1．器材:分光光度計(jì)；恒溫水浴箱；槍式移液管；試管13支；吸管2ml1支、0.1ml3支試劑:試劑A；試劑B；蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液；待測(cè)樣品編輯課件四實(shí)驗(yàn)步驟1.取試管13支，編號(hào)〔除空白管只做1管外，其它各號(hào)測(cè)定管均重復(fù)做兩管〕，按下表操作并記錄：編輯課件管號(hào)試劑(μl)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管×21×22×23×24×25×2蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(1.5mg/ml)—20406080100—蒸餾水(ml)100８０604020——待測(cè)樣品(ml)——————100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0混勻后，在３７攝氏度下保溫３０分鐘，比色測(cè)定BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)含量編輯課件2．以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線3．用測(cè)定管平均光吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量，計(jì)算求出該待測(cè)血清蛋白質(zhì)的含量(g/L)。4．從標(biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測(cè)定管光吸收值相接近者，按比色法計(jì)算公式計(jì)算求出該待測(cè)血清的蛋白質(zhì)濃度(g/L)。編輯課件思考題???

試比較ＢＣＡ法、雙縮脲法、Lowery法的異同.為什么ＢＣＡ法常用與科研？與其他方法相比它有什么特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)？編輯課件特點(diǎn)：1.操作簡(jiǎn)便快速，比經(jīng)典的lowry法快4倍2.靈敏度高，最低檢測(cè)量可達(dá)0.5ug3.準(zhǔn)確，試劑穩(wěn)定性好，在20ug/ml~2000ug/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系4.經(jīng)濟(jì)實(shí)用，可在微孔板中進(jìn)行，待測(cè)樣品體積為1