DB12-T 1292-2023 花椰菜主要流行病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程

65.020.20CCS

B

3112 DB12/T

1292—2023花椰菜主要流行病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程Technical

standards

of

cauliflower天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì) 發(fā)

布DB12/T

1292—2023 本文件按照GB/T

—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由天津市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：天津科潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技股份有限公司、天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：孫德嶺、姚星偉、張小麗、牛國(guó)保、單曉政、文正華、劉莉莉、江漢民。DB12/T

1292—20231 范圍法、病情調(diào)查、群體抗病性評(píng)價(jià)、鑒定記載等的要求。本文件適用于花椰菜主要流行病害抗性鑒定。2 規(guī)范性引用文件文件。GB/T

6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4 試劑4.1 BL

培養(yǎng)基·· · ·葡萄糖10.0

g，肉膏3.0

g，肝浸出液150.0

ml，植胨3.0

g，半胱氨酸

HCL

0.5·· · ·g，可溶性淀粉0.5

g，吐溫80

1.0

g，胰酪胨

g，酵母膏5.0

g，溶液A（

g

KH2PO4、35

g

K24）10.0

ml，溶液B（0.5

g

FeSO4

7H2O、10.0

g

MgSO4

20、0.337

g

MnSO4

2H2O）

ml，瓊脂15.08

g，加蒸餾水至1000

ml。pH值調(diào)至7.2，高溫滅菌后備用。4.2 玉米粒培養(yǎng)基量取

ml30

g，保持溫度在60

℃左右約1

h，用紗布過(guò)濾后，加入適量的水補(bǔ)足500

ml

ml17

g

ml高溫滅菌后備用。玉米粒煮熟煮熟，高溫滅菌4.3 70%乙醇溶液量取

ml

95%乙醇，加水定容至

ml，混合均勻。4.4 1%次氯酸鈉溶液量取10

ml有效氯含量10%的次氯酸鈉原液加入到體積90

的純凈水中，混合均勻。5 儀器設(shè)備28

℃搖床恒溫培養(yǎng)1天后取出，加入適量無(wú)菌水稀釋，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)整菌液濃度至1×10

28

℃搖床恒溫培養(yǎng)1天后取出，加入適量無(wú)菌水稀釋，用血球計(jì)數(shù)板調(diào)整菌液濃度至1×10

CFU/ml調(diào)整菌液濃度至1×10

，置于4

℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.1 恒溫?fù)u床回旋頻率范圍：40

r/min～300

r/min；溫度控制范圍：5℃～5.2 恒溫培養(yǎng)箱溫度范圍：0℃～℃0℃；溫度波動(dòng)范圍：±5.3 低溫冰柜箱內(nèi)溫度：-15℃～5.4 滅菌鍋溫度范圍：0135℃；滅菌時(shí)間：4min～120min；最高工作壓力：。5.5 超凈工作臺(tái)潔凈等級(jí)：100級(jí)@≥0.5

μ；平均風(fēng)速：～。5.6電子天平感量0.01g。5.7 血球計(jì)數(shù)板規(guī)格16×25×16。5.8 離心機(jī)5000

r/min。5.9 顯微鏡物鏡倍數(shù)：10×、×、50×、100×；目鏡倍數(shù)10×。觀察功能：明場(chǎng)、暗場(chǎng)。6 病原菌接種體制備6.1 黑腐病菌接種體制備KochBL8于4

℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.2 霜霉病菌接種體制備采集花椰菜霜霉病病葉表面著生的霉層及其附著物用無(wú)菌水沖凈，再用無(wú)菌水沖洗3遍，將洗凈的病葉放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中置于溫度℃、相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)1d。之后用濕棉球?qū)⑿庐a(chǎn)生的66.3 菌核病菌接種體制備用雙層無(wú)菌紗布保濕48

h，用無(wú)菌水洗刷孢子濃度至1×10用雙層無(wú)菌紗布保濕48

h，用無(wú)菌水洗刷孢子濃度至1×10

，置于4

℃冰箱保存?zhèn)溆?。浮沉淀，重?fù)3次，用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)接種液濃度至1×10

CFU/ml，置于4

℃冰箱保存?zhèn)溆谩och）22

℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天～4天至長(zhǎng)出白色菌絲進(jìn)行活化，用滅菌的5

mm打孔器制備接種用菌餅備用。6.4 黑斑病菌接種體制備Koch）25

154

h，66.5 根腫病病菌接種體制備將新鮮的花椰菜腫根取

g攪碎，4層紗布過(guò)濾，2500

r/min5

，棄上清液；用無(wú)菌水懸67 室內(nèi)接種鑒定7.1 鑒定室人工接種鑒定室可以選擇能進(jìn)行溫濕度及光照調(diào)控的人工氣候室或氣候箱。7.2 鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列，每份材料重復(fù)3次，每個(gè)重復(fù)株苗。7.3 鑒定材料育苗鑒定種子在1

%次氯酸鈉溶液中浸泡10

min，清水沖洗后置于25

℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)催芽或直接播種于育苗盤內(nèi)。裝入準(zhǔn)備好的育苗基質(zhì)土，防蟲(chóng)網(wǎng)內(nèi)或日光溫室內(nèi)育苗，室內(nèi)溫度白天控制在22℃～25夜晚控制在1720℃，待幼苗長(zhǎng)至45片真葉時(shí)進(jìn)行抗病性鑒定。8 病原菌接種8.1 黑腐病接種4片～524

h相對(duì)濕度～100%，24

h后降低相對(duì)濕度至～，28

℃，14

h光照，7天后調(diào)查記載發(fā)病情況。8.2 霜霉病接種采用噴霧法接種。將菌液倒入小型噴霧器中，在接種材料的葉片背面噴灑，每株

μL。接種后將溫度控制在1825℃，黑暗條件下相對(duì)濕度

%～100

%保濕24

h，24

h后降低相對(duì)濕度至80

%～85%，

14

h光照，7天后進(jìn)行發(fā)病情況調(diào)查。8.3 菌核病接種45徑5

mm菌片帶菌絲面貼于幼苗的第3片真葉，用保鮮膜保濕，接種后24

h保持在2023℃，相對(duì)濕度95%～100%，24

h后降低相對(duì)濕度至～，7天后進(jìn)行病害調(diào)查。水孔處有黑色枯接種點(diǎn)上有稀疏病病斑僅出現(xiàn)在接病斑面積占整個(gè)5%根腫只附著在側(cè)根，數(shù)量占根系全部的1%病斑從水孔向外5%發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的10%病斑面積占整個(gè)5%主根有根腫附著，側(cè)根上根腫數(shù)量占10%病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積5%葉片病斑向四處擴(kuò)發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的10%病斑面積占整個(gè)11%

50%病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積26%70%發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的31%病斑面積占整個(gè)21%

75%病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積50%70%發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的50%病斑面積占整個(gè)50%75%給根系造成機(jī)械傷害，將1×10

CFU/ml接種菌液給根系造成機(jī)械傷害，將1×10

CFU/ml接種菌液5

灌入傷根部位。接種6周后進(jìn)行發(fā)病情況調(diào)查。8.4 黑斑病接種采用噴霧法接種，將制備好的孢子懸液均勻噴灑于幼苗葉片表面，每株

μL。接種后將溫度控制在20

℃左右，黑暗條件下相對(duì)濕度～，24

h后降低相對(duì)濕度至80%～85%，25℃，14

h光照，7天后進(jìn)行發(fā)病情況調(diào)查。8.5 根腫病接種采用傷根灌菌法。取45片真葉的花椰菜幼苗，在幼苗根部一側(cè)用滅菌刀片將部分根輕輕劃傷，89 病情調(diào)查9.1 病情級(jí)別花椰菜主要流行病害病情級(jí)別劃分見(jiàn)表1。表1 花椰菜主要流行病害病情級(jí)別劃分??×??

??×??

(1)情級(jí)別，按公式（1）計(jì)算得出病情指數(shù)。計(jì)算結(jié)果取3次重復(fù)的平均值。DI

=

??（??×??）×100式中：DI——病情指數(shù)；s——各病情級(jí)別的代表數(shù)值；n——各病情級(jí)別的病葉數(shù)或者株數(shù)，單位為個(gè)或株；N——調(diào)查的總?cè)~數(shù)或者總株數(shù)，單位為個(gè)或株；S——最高病情指數(shù)的代表數(shù)值。DI=0.00DI=0.00DI=0.00DI=0.00DI=0.00HR＜DI≤15＜DI≤12.511.1111.11＜DI≤201512.5MR33.3333.3320302555.5555.55404545HSDIIDIDDIDIDB12/T

1292—202310群體抗病性評(píng)價(jià)10.1 抗病性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)花椰菜主要流行病害抗性鑒定評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。表2 花椰菜主要流行病害抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)10.2 有效性判別10.3鑒定材料處理鑒定完畢后，將花椰