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逆轉錄酶
逆轉錄酶,全稱是依賴于RNA的DNA聚合酶,最早發(fā)現(xiàn)于部分RNA病毒中,具有逆轉錄活性,能夠以單鏈RNA為模板合成DNA的酶。發(fā)現(xiàn)逆轉錄酶逆轉錄酶最初是在1970年由霍華德·馬丁·特明(HowardTemin)和戴維·巴爾的摩(DavidBaltimore)從RNA病毒中發(fā)現(xiàn)的。他們并因此獲得1975年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。HIV病毒的逆轉錄過程:
形成DNA-RNA雜合雙鏈模板:逆轉錄病毒單鏈RNA的基因組引物:tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)酶:逆轉錄酶(RNA指導的DNA聚合酶活性)過程:在模板、引物及酶的作用下合成一條DNA單鏈,為互補DNA(complementaryDNA,cDNA)與模板形成DNA-RNA雜合雙鏈。
雜合雙鏈RNA水解酶:逆轉錄酶的RNaseH活性過程:水解雜合雙鏈中的RNA,得到與RNA互補的DNA單鏈(cDNA)。雙鏈DNA形成模板:新合成的互補單鏈cDNA底物:dNTP酶:逆轉錄酶(DNA指導的DNA聚合酶活性)過程:以cDNA單鏈為模板,以dNTP為底物,再合成雙鏈DNA。常見的逆轉錄酶:人類免疫缺陷病毒1型的逆轉錄酶(PDB:HIV)莫洛尼鼠白血病病毒的逆轉錄酶(MMLV)禽成髓細胞瘤病毒的逆轉錄酶(AMV)維持真核細胞的染色體端粒存在的端粒酶逆轉錄酶(野生型)M-MLV和AMV的區(qū)別:AMV和MMLV是分子PCR檢測常用的兩種逆轉錄酶。AMV反轉錄酶來源于禽類的病毒,RNaseH活性較高,一邊做反轉錄,一邊就把RNA降解了,所以
AMV反轉錄酶的反轉錄效率比較低。M-MLV反轉錄酶來源于鼠類,它的RNaseH活性較低,所以反轉錄效率是比較高的。雖然野生型M-MLV逆轉錄酶的熱穩(wěn)定性差,抵抗二級結構的能力弱,但可以通過基因改造彌補這些不足。人體內的逆轉錄酶:由于細胞中DNA復制需要RNA作為引物等原因,線狀DNA分子每復制一次兩端會相應縮短。端粒酶是一種含有RNA序列的核糖核蛋白,隨著DNA復制次數(shù)增加而造成端??s短到一定程度時,端粒酶就利用自身RNA中的一段重復序列作為模板,逆轉錄合成端粒DNA重復序列,表現(xiàn)出逆轉錄酶活性。人類端粒酶RNA序列在1995年被成功克隆。當然,端粒酶和病毒中的逆轉錄酶在結構和性質上都存在著許多差異。Chandramouly等2021年發(fā)表在ScienceAdvances上的一篇文章闡釋了他們關于人類聚合酶
θ(Pol
θ)的最新研究,該研究發(fā)現(xiàn)聚合酶
θ
同樣表現(xiàn)出逆轉錄酶活性。該酶是高等真核生物中一種獨特的DNA聚合酶解旋酶融合
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