分子遺傳檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化

分子遺傳檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化常見(jiàn)疾病及檢測(cè)項(xiàng)目單基因遺傳?。喝鏒uchenne肌營(yíng)養(yǎng)不良（DMD/BMD）（X性連鎖隱性遺傳病，DMD基因部分缺失或重復(fù)，以及非缺失型）、α和β地中海貧血（常染色體隱性遺傳病，α珠蛋白基因缺失或突變，β珠蛋白基因突變）等線粒體遺傳?。篖eber遺傳性視神經(jīng)病、線粒體腦肌病、藥物性耳聾、線粒體糖尿病等染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查（唐氏、13和18三體）常用的檢測(cè)方法PCR-Sanger測(cè)序多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)（MPLA）實(shí)時(shí)熒光PCRPCR-焦磷酸測(cè)序PCR-基因芯片雜交PCR-時(shí)間飛行質(zhì)譜生物芯片系統(tǒng)新一代高通測(cè)序技術(shù)熒光原位雜交（FISH）臨床分子診斷技術(shù)發(fā)展歷程：幾個(gè)里程碑1953年:DNA雙股螺旋的發(fā)現(xiàn)1963年:放射免疫測(cè)定技術(shù)1972~1977年:重組DNA技術(shù)、核酸測(cè)序方法1983年:PCR測(cè)定技術(shù)1991-1993年:實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)和芯片技術(shù)2003年：人類基因組計(jì)劃基本完成。后基因組的功能基因組研究，藥物基因組學(xué)2007年--

新一代高通量測(cè)序技術(shù)？分子遺傳檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化的5W1H（Why、What、When、Where、Who、How）70%或90%以上信息來(lái)自實(shí)驗(yàn)室個(gè)體化醫(yī)療（personalizedmedicine)精準(zhǔn)醫(yī)療（precisionmedicine）移動(dòng)醫(yī)療數(shù)字醫(yī)療Why實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)的時(shí)代？沒(méi)有精準(zhǔn)檢測(cè)何來(lái)精準(zhǔn)醫(yī)療？預(yù)測(cè) 診斷 監(jiān)測(cè) 預(yù)后精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)計(jì)劃（Precision

Medicine

Initiative）新生兒測(cè)序計(jì)劃（BabySeqProject）實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)laboratory

medicinePCR-Sanger測(cè)序、PCR-電泳、PCR-雜交（膜上、芯片、乳膠顆粒等）、NIPT等均涉及基因擴(kuò)增過(guò)程，屬于臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室NIPT的優(yōu)越性：對(duì)T21、T18和T13陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）從標(biāo)準(zhǔn)篩查方法的3.4%、14.0%和3.4%提高到80.9%、90.0%和50%。NortonMEetal.NEJM

2015,372(17)國(guó)內(nèi)回顧1990年：PCR技術(shù)在國(guó)內(nèi)開(kāi)始用于臨床檢測(cè)1990年代中期：假陽(yáng)性？（假陰性？）國(guó)內(nèi)回顧1999年4月29-30日：《基因擴(kuò)增技術(shù)臨床應(yīng)用專家研討會(huì)》，針對(duì)臨床開(kāi)展PCR檢驗(yàn)的問(wèn)題，達(dá)成8點(diǎn)意見(jiàn)：（1）PCR技術(shù)本身沒(méi)有問(wèn)題，技術(shù)先進(jìn)。（2）衛(wèi)生部暫停臨床應(yīng)用有助于規(guī)范管理，應(yīng)在嚴(yán)格管理的基礎(chǔ)上適度開(kāi)放。（3）限定臨床開(kāi)展PCR檢驗(yàn)項(xiàng)目上。（4）加強(qiáng)對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室管理。（5）人員上崗培訓(xùn)。（6）應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)控和參加部中心室間質(zhì)評(píng)。（7）SFDA盡管批準(zhǔn)試劑文號(hào)。（8）成立專家咨詢委員會(huì)。1999年8月17-24日：《第一期全國(guó)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員培訓(xùn)班》在北京衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心舉辦2002年1月14日衛(wèi)生部下發(fā)《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)）國(guó)內(nèi)回顧《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)）《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)）What（必要條件）檢驗(yàn)申請(qǐng)單是合適的：對(duì)“Who”在“When”開(kāi)出“What”申請(qǐng)單標(biāo)本是正確的和好的：采集、運(yùn)送和保存實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件是好的：溫濕度、可能的干擾的避免（分區(qū)、灰塵、電磁、振動(dòng)等）儀器設(shè)備狀態(tài)是好的：維護(hù)、定期校準(zhǔn)試劑是好的：性能驗(yàn)證、質(zhì)檢實(shí)驗(yàn)室人員是有能力的：外部和內(nèi)部培訓(xùn)，能力評(píng)估得到結(jié)果的過(guò)程是有監(jiān)控的：室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（或?qū)嶒?yàn)室間比對(duì)）臨床醫(yī)生能正確的理解和應(yīng)用檢驗(yàn)結(jié)果于患者疾病的診斷和治療質(zhì)量保證檢測(cè)申請(qǐng)單、標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存（分析前）室內(nèi)質(zhì)控（分析中）室間質(zhì)評(píng)（分析中）結(jié)果報(bào)告解釋及臨床應(yīng)用（分析后）分析前檢驗(yàn)申請(qǐng)單和標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存中的關(guān)鍵點(diǎn)對(duì)“Who”在“When”開(kāi)出“What”申請(qǐng)單容器：密閉的、一次性、無(wú)菌、無(wú)核酸酶及其他擴(kuò)增抑制物采集方法：人（訓(xùn)練有素）、防污染、處理運(yùn)送保存時(shí)間和溫度：盡可能快？低溫？合格標(biāo)本:容器完整、量夠、時(shí)間符合要求、外觀符合要求、處理符合要求用于NIPT的外周血cffDNA特點(diǎn)母體血漿中cffDNA含量占總游離DNA的大約5?10％，長(zhǎng)約150bp，懷孕4周即能檢出，其在血液中的半衰期只有16min，出現(xiàn)2小時(shí)后即不能測(cè)出。cffDNA在母體循環(huán)中較穩(wěn)定，可能與來(lái)源于胎盤的微粒能夠保護(hù)他們免受核酸酶降解相關(guān)。Cff

DNA隨著妊娠孕齡增加而增多，在前三個(gè)月每周增加21％，在孕中期上升速度較慢，在孕期的后八個(gè)星期又急劇上升。cffDNA在-20℃下可穩(wěn)定超過(guò)4年，但血漿樣本在-20℃下長(zhǎng)時(shí)間保存，cff

DNA每月以-

0.66GE/ml速率降解。Who:正常孕婦

(產(chǎn)篩高風(fēng)險(xiǎn)≥35歲？孕周<12周？雙胎？惡性腫瘤？夫婦染色體異常？…)When：>12周(-26+6周？)What:NIPT血漿樣本可在-18℃~-25℃短暫儲(chǔ)存1周，在-70℃以下儲(chǔ)存2年，反復(fù)凍融次數(shù)應(yīng)不超過(guò)2次。分析中實(shí)驗(yàn)室物理分區(qū)及空氣流向控制產(chǎn)前篩查與產(chǎn)前診斷（全基因組低拷貝測(cè)序技術(shù)）緩沖間測(cè)序區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向文庫(kù)擴(kuò)增與檢測(cè)區(qū)標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)文庫(kù)擴(kuò)增與檢測(cè)區(qū)測(cè)序區(qū)植入前胚胎遺傳學(xué)診斷(全基因組低拷貝測(cè)序)緩沖間測(cè)序區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊文庫(kù)檢測(cè)區(qū)WGA制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)緩沖間緩沖間空氣流向空氣流向電泳區(qū)擴(kuò)增一區(qū)遺傳病診斷+腫瘤診斷與治療（雜交捕獲測(cè)序技術(shù)+Sanger測(cè)序驗(yàn)證）DNA打斷區(qū)緩沖間緩沖間雜交捕獲區(qū)（擴(kuò)增一區(qū)）空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊文庫(kù)擴(kuò)增區(qū)（擴(kuò)增二區(qū)）標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)文庫(kù)檢測(cè)區(qū)測(cè)序區(qū)電泳區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間雜交捕獲區(qū)（擴(kuò)增一區(qū)）空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊文庫(kù)擴(kuò)增區(qū)（擴(kuò)增二區(qū)）標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)文庫(kù)檢測(cè)區(qū)測(cè)序區(qū)電泳區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間關(guān)于“分區(qū)”、緩沖間和生物安全柜“各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作”緩沖間測(cè)序區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向文庫(kù)擴(kuò)增與檢測(cè)區(qū)標(biāo)本與文庫(kù)制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自己的檢驗(yàn)項(xiàng)目、所采用的檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)和工作量來(lái)決定分區(qū)的多少及各區(qū)域的空間大小。至少具體需要多少個(gè)區(qū)，同樣是“個(gè)體化”的，以“工作有序、互不干擾、防止污染、報(bào)告及時(shí)“作為基本原則。緩沖間的功能是“控制空氣的流向”。 生物安全柜可考慮“A2”。通風(fēng)換氣？（>10次/小時(shí)）試劑方法的可靠性性能驗(yàn)證（verification）？性能確認(rèn)（validation）?LDTs？性能指標(biāo)？精密度（重復(fù)性）準(zhǔn)確性（正確度，方法學(xué)比較）可報(bào)告范圍（線性范圍）參考區(qū)間分析敏感性（測(cè)定下限）分析特異性抗干擾能力臨床特異性和臨床敏感性？“性能驗(yàn)證”（“verification”）定義“verification”：broadlyas“confirmationthroughtheprovisionofobjectiveevidence,thatspecifiedrequirementshave

been

fulfilled”

.

（廣義為通過(guò)提供客觀證據(jù)證明特定的要求得到滿足）CLIAusestheterm“verification”：specificallytorelatetoconfirmationthatthelaboratoryusingatestcanreplicatethemanufacturer’sperformanceclaimswhenthetestisusedaccording

to

the

package

insert.

（CLIA性能驗(yàn)證術(shù)語(yǔ)特指使用某特定檢測(cè)試劑或系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室按照所提供的試劑盒或檢測(cè)系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)使用時(shí)，能復(fù)現(xiàn)生產(chǎn)廠家所宣稱的檢測(cè)性能。）如果不按商品試劑盒說(shuō)明書(shū)操作或改變商品試劑盒組份是否可以？可以但屬于實(shí)驗(yàn)室自配試劑或自建方法，亦即Laboratory-developedtests,LDTs)“性能確認(rèn)”（“validation”

）定義TheFDAandISObothdefinetheterm“validation”as“confirmation

byexaminationandprovisionofobjectiveevidencethattheparticularrequirementsforaspecificintendedusecanbeconsistentlyfulfilled”

.（通過(guò)檢查和提供客觀證據(jù)證明，對(duì)一特定預(yù)期用途的要求始終能得到滿足）TheFDAandISOtermsforverificationandaresimilar,withthedistinctionhavingtodowith

intended

use.（性能驗(yàn)證和性能確認(rèn)FDA和ISO術(shù)語(yǔ)相似，差異在后者的“預(yù)期用途”）“intended

use”預(yù)期用途Theterm“intendeduse”inthesedocumentsisestablishedbythe

manufacturerordevelopinglaboratoryatthetimeofassaydevelopmentandhastodowiththepurposeandpopulationforwhichthetestwasintended(e.g.,diagnosis,followingtreatment,etc.).Relevantperformancecharacteristicsarethendeterminedbasedontheintendeduseofthe

test.Somepeopleinterpret“intendeduse”asreferringtotherelevantclinicallaboratoryinwhichthetestisperformed,ratherthanthemanufacturerordevelopinglaboratory,thuscausingconfusion.TheWorldHealth

Organization(WHO)definesvalidationas“theaction(orprocess)ofprovingthataprocedure,process,systemequipmentormethodusedworksasexpectedand

achieves

the

intended

result”

.

（WHO將validation定義為，證明所使用的一個(gè)程序、過(guò)程、系統(tǒng)設(shè)備或方法能按預(yù)期進(jìn)行工作以及取得預(yù)期結(jié)果的活動(dòng)（或過(guò)程）“validation”

通俗一點(diǎn)的定義theterm“validation”willbeusedtorefertotheanalyticperformancecharacteristicsthatneedtobeinitiallyestablishedatthetimeofassaydevelopment.（指在測(cè)定方法研發(fā)時(shí)，最早建立的分析性能特征）結(jié)果報(bào)告的內(nèi)容和格式遺傳檢測(cè)報(bào)告至少要包括的信息將報(bào)告與特定患者聯(lián)系在一起的惟一編號(hào)咨詢?nèi)藛T的姓名和聯(lián)系方式與檢測(cè)結(jié)果解釋有關(guān)的特異的信息和檢測(cè)性能檢驗(yàn)項(xiàng)目及所使用的方法（包括檢測(cè)范圍及檢測(cè)局限性）標(biāo)本類型標(biāo)本接收日期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室名稱，地點(diǎn)，包括咨詢實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)檢測(cè)特性和其它提供給實(shí)驗(yàn)室的信息對(duì)結(jié)果的解釋報(bào)告批準(zhǔn)人的簽字實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系方式報(bào)告日期適當(dāng)時(shí)，還應(yīng)包括：建議的有資質(zhì)的遺傳咨詢?nèi)藛T；對(duì)其他家庭成員的意義；進(jìn)一步的檢測(cè)建議MM20-A.(vol.32.

No.15)Qualitymanagementformoleculargenetic

testing,Approved

guideline供參考的標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告格式XXXXXX

醫(yī)院臨床分子檢測(cè)報(bào)告報(bào)告編號(hào)：*年齡：*樣本編碼：*臨床診斷：*采樣日期：*姓名：*送檢科室：*采樣時(shí)間：*性別：*送檢醫(yī)生：*樣本類型：*樣本的處理：*檢測(cè)方法：主要檢測(cè)儀器：*結(jié)果報(bào)告：編號(hào) *檢測(cè)項(xiàng)目 *檢測(cè)結(jié)果 參考值/參考范圍*結(jié)果解釋（結(jié)果的總體描述及臨床意義）：*檢測(cè)方法的主要性能指標(biāo)(至少含檢測(cè)范圍及檢測(cè)下限)：*檢測(cè)局限性：進(jìn)一步檢測(cè)的建議：建議的咨詢?nèi)藛T及其聯(lián)系方式：參考文獻(xiàn)：其它(對(duì)其他可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響的問(wèn)題描述)：*收件日期：*檢測(cè)日期：*報(bào)告日期：*檢測(cè)者：*審核者：備注：實(shí)驗(yàn)室地址：XX

市

XX

路X

號(hào)。郵編XXXXXX聯(lián)系電話：XXXXXXXX第頁(yè)，共

頁(yè)BrownsteinGA,etal.GenomeBiology

2014,15:R53TheCLARITY

BiologyBrownsteinGA,etal.GenomeBiology

2014,15:R53TheCLARITY

Biology結(jié)果解釋及與臨床溝通基本概念的重要性以染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)（NIPT）為例基本概念假陽(yáng)性率：陽(yáng)性預(yù)測(cè)值：假陰性率：陰性預(yù)測(cè)值：FP(假陽(yáng)性）TN（真陰性）

FP（假陽(yáng)性）×100%×100%TP(真陽(yáng)性）TN(真陰性）TN（真陰性）

FN（假陰性）×100%TP（真陽(yáng)性）

FP（假陽(yáng)性）FN(假陰性）TP（真陽(yáng)性）

FN（假陰性）×100%概念不清造成的誤解一般的唐氏篩查手段僅能檢出50%~95%的異常，且有5%的假陽(yáng)性率[1,2]。根據(jù)2015年對(duì)15,841例婦女標(biāo)準(zhǔn)篩查方案的結(jié)果，21三體的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值僅為3.4%，即1000個(gè)篩查陽(yáng)性結(jié)果中只有34個(gè)為真陽(yáng)性[3]。NicolaidesKH.PrenatDiagn

2011;31:7–15.WrightD,etal.FetalDiagnTher2014;35:

118–26.3.NortonME,etal.NEnglJMed.2015

;372(17):1589-97.NIPT的假陽(yáng)性NIPT的假陽(yáng)性率為0.1%~0.2%CheungSW,LeungTY.NEJM

2015,372(17):1675-1676NIPT假陽(yáng)性的原因染色體拷貝數(shù)變異（copy-numbervariation）[1]母體嵌合（maternal

mosaicism）[2,3]限制性胎盤嵌合（confined

placental

mosaicism）[2,4,5]雙胎消失綜合征（the

vanishing

twinsyndrome）[5]孕婦患有惡性腫瘤[6]1.SnyderMW,etal.NEnglJMed.2015Apr

23;372(17):1639-45.LauTK,etal.PrenatDiagn

2013;33:602-8.WangY,etal.ClinChem

2014;60:251-9.GratiFR,etal.GenetMed

2014;16:620-4.LauTK,etal.UltrasoundObstetGynecol

2014;43:254-64.OsborneCM,etal.PrenatDiagn

2013;33:609-11.NIPT假陰性原因胎兒游離DNA濃度（Fetalfraction）☆樣本處理：血漿和血細(xì)胞要盡快分離，需采用EDTA抗凝管進(jìn)行樣本采集，最好在采集后6個(gè)小時(shí)內(nèi)完成血漿分離，最長(zhǎng)不能超過(guò)24小時(shí)?！钤袐D體重指數(shù)（maternal

body

mass

index，BMI）：體重高的孕婦，胎兒游離DNA濃度更低。☆孕周（Gestational

age）：在10-21孕周，胎兒游離DNA濃度每周約增加0.1%。21周后，每周增加約1%?！钐悍钦扼w（fetal

aneuploidy）類型：21三體的胎兒游離DNA濃度更高，而18和13三體的濃度較低。單胎和多胎妊娠（singleton

and

multiple

gestations）：

如果雙胞胎是同種基因型，他們可與單胎同等有效地進(jìn)行檢測(cè)，而且Z值與胎兒游離DNA濃度呈線性相關(guān)。但是，如果雙胞胎的非整倍體情況不一致，那么檢測(cè)就相對(duì)困難一些，因?yàn)槊總€(gè)胎兒游離DNA的濃度較單胎更低。有假陰性風(fēng)險(xiǎn)。嵌合體（mosaicism）：10%以下嵌合或低胎兒游離DNA濃度均會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。染色體：GC含量中等的染色體使用MPS檢測(cè)結(jié)果最好，例如21和18染色體。13染色體GC含量低，因此需要校正GC偏倚，才能提高13三體檢測(cè)的敏感性。對(duì)于常見(jiàn)的染色體非整倍體，所有患者不管其風(fēng)險(xiǎn)狀態(tài)，均可以選擇游離DNA檢測(cè)作為一個(gè)篩查策略，但選擇該檢測(cè)的患者應(yīng)該了解在所有可選擇的篩查和診斷方法中這種篩查方法的益處和局限性。ObstetGynecol.2015Jun29.

[Epubaheadof

print]美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)（ACOG）和美國(guó)母胎醫(yī)學(xué)會(huì)（SMGM）2015年聯(lián)合發(fā)布專家共識(shí)ObstetGynecol.2015Jun29.

[Epubaheadof

print]ObstetGynecol.2015Jun29.[Epubaheadof

print]NIPT結(jié)果應(yīng)如何報(bào)告？結(jié)果報(bào)告有些實(shí)驗(yàn)室用“陽(yáng)性”或“陰性”，而有些則報(bào)告非整倍體的機(jī)會(huì)，最常用“>99%”表示高風(fēng)險(xiǎn)，“<1/10,000”表示低風(fēng)險(xiǎn)，這些報(bào)告方法對(duì)于產(chǎn)科醫(yī)生和患者不如陽(yáng)性預(yù)測(cè)值或殘留風(fēng)險(xiǎn)那么有用。鑒于這些數(shù)據(jù)在為患者關(guān)于其篩查檢測(cè)結(jié)果提供準(zhǔn)確的和可理解的信息中的重要性，美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師協(xié)會(huì)（ACOG）和美國(guó)母胎醫(yī)學(xué)會(huì)（SMFM）建議所有實(shí)驗(yàn)室對(duì)每個(gè)染色體非整倍體檢測(cè)結(jié)果報(bào)告以“陽(yáng)性預(yù)測(cè)值”和“殘留風(fēng)險(xiǎn)值”來(lái)表示ObstetGynecol.2015Jun29.

[Epubaheadof

print]When時(shí)時(shí)刻刻沒(méi)有最好只有更好！Where?Who高素質(zhì)的人是最重要的高素質(zhì)：專業(yè)知識(shí)技能“強(qiáng)”的職業(yè)意識(shí)和進(jìn)取精神“認(rèn)真”How硬件：實(shí)驗(yàn)室（分區(qū)、環(huán)境條件等）、儀器設(shè)備及試劑、人員（持證上崗）軟件：質(zhì)量保證體系（包括標(biāo)本采集運(yùn)送和保存及質(zhì)檢、儀器設(shè)備維護(hù)校準(zhǔn)、試劑方法性能驗(yàn)證或確認(rèn)和批質(zhì)檢、有可操作性SOP編寫、人員培訓(xùn)、室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)、結(jié)果報(bào)告和解釋）“無(wú)基因”或“無(wú)核酸”概念的重要性?。?！尊敬的李教授：您好！來(lái)信請(qǐng)教一個(gè)問(wèn)題，具體情況是這樣的：我這兒使用的PCR儀是ABI

7300，用的是達(dá)安公司的HBV-DNA試劑，去年12月中旬的一次試驗(yàn)中發(fā)生了爆管事件，事件發(fā)生后，已經(jīng)按照SOP規(guī)程進(jìn)行了消毒處理，到現(xiàn)在已經(jīng)有半年了，可還是不能消除污染。PCR實(shí)驗(yàn)室在三樓，現(xiàn)在即使加樣操作放在同一幢樓房的一樓進(jìn)行，其余如混勻、溫育、離心等還放在原來(lái)的實(shí)驗(yàn)室，擴(kuò)增也在原來(lái)的實(shí)驗(yàn)室，陰性對(duì)照孔所加對(duì)照都未如標(biāo)本一樣處理（因此暴露在空氣中的時(shí)間很短），可是陰性對(duì)照孔仍有擴(kuò)增，大約在21個(gè)循環(huán)的時(shí)候開(kāi)始，陰性對(duì)照顯示的Ct約為26左右。請(qǐng)問(wèn)這是什么原因，怎么處理才能消除污染。盼指點(diǎn)！劉X20130508劉大夫：PCR實(shí)驗(yàn)室一旦出現(xiàn)嚴(yán)重污染，消除將會(huì)比較困難，通?？刹捎孟率龇椒ǎ海?）開(kāi)窗通風(fēng);（2）采用次氯酸鈉溶液擦地面及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，甚至墻面;（3）增長(zhǎng)紫外照射時(shí)間；（4）用75%乙醇空中噴霧，然后用于次氯酸鈉溶液擦地面及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。上述措施每天都要進(jìn)行，直至污染消除。不知你是否按上述方法進(jìn)行？如沒(méi)有，你可以這樣試，并請(qǐng)將效果告訴我。此外，在實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)嚴(yán)重污染后，如還要進(jìn)行工作，則可臨時(shí)更換一個(gè)廠家試劑，應(yīng)就可以。20130508李教授：您好！我是上次向您請(qǐng)教PCR實(shí)驗(yàn)室污染如何清除的小劉，我們按照您的指點(diǎn)進(jìn)行處理，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室污染已經(jīng)完全清除，非常感謝！以后我們會(huì)更加注意操作的規(guī)范及相關(guān)知識(shí)的學(xué)習(xí)！2013.7.18尊敬的李教授：您好！您所說(shuō)的措施我都實(shí)行過(guò)，只不過(guò)除通風(fēng)外，其余措施僅實(shí)施過(guò)很少幾次，我將按您所說(shuō)措施處理一段時(shí)間再看看。另外，再請(qǐng)教兩個(gè)問(wèn)題：（1）上述措施要在三個(gè)區(qū)都進(jìn)行嗎？（2）樓房第三層污染，在第一層操作怎么也會(huì)受到影響？謝謝您撥冗指教！劉X20130508好吃懶做原來(lái)是病毒在作怪2011年五大科學(xué)丑聞事件The

Scientist9月29日Mikovits被惠特莫爾?彼得森神經(jīng)免疫疾病研究所（WhittemorePetersonInstituteforNeuro-ImmuneDisease，WPI）從研究主任的位置上開(kāi)除。11月4日，WPI指控Mikovits在被開(kāi)除后，非法消除實(shí)驗(yàn)筆記，并且將其它有關(guān)研究工作信息保存在私人筆記本電腦、閃存盤和e-mail賬戶中。而WPI則獲得了臨時(shí)禁止命令，禁止Mikovits破壞