梅毒血清學(xué)檢測策略及影響因素

梅毒血清學(xué)檢測策略及影響因素

重慶市涪陵中心醫(yī)院涂偉2024/1/22.梅毒概述梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。人體受感染后，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時(shí)顯時(shí)隱，病程較長。?中華人民共和國傳染病防治法?規(guī)定要管理的主要性病之一。早期主要侵犯皮膚及粘膜，晚期除侵犯皮膚、粘膜外，還可侵犯心臟血管系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)；另一方面，梅毒又可多年無癥狀呈潛伏狀態(tài)。梅毒主要通過性接觸傳染，亦可通過血液和母嬰垂直傳播。.

梅毒螺旋體

梅毒是一種性傳播疾病，病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponemapallidumsubspeciespallidum)

極細(xì)亞種雅司病地方亞種地方性梅毒蒼白亞種梅毒蒼白螺旋體品他螺旋體品他病

密螺旋體屬.我國基本消滅（1950-1964年）現(xiàn)在呈逐年增加的趨勢我國政府針對梅毒控制的相關(guān)政策中國預(yù)防與梅毒規(guī)劃（2010-2020年）性病管理辦法（2013年）預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實(shí)施方案……….梅毒分期時(shí)間一期梅毒二期梅毒三期梅毒隱形梅毒胎傳梅毒.梅毒是一個(gè)可以臨床治愈的傳染病病例診斷依據(jù)（ws273-2007）病史癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對梅毒診斷及判愈有決定性意義.梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法病原學(xué)檢測梅毒血清學(xué)檢測組織病理學(xué)檢測白細(xì)胞檢測蛋白檢測.病原學(xué)檢測暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色法核酸檢測

（血液標(biāo)本？？）.梅毒血清學(xué)檢測方法

（1）梅毒非特異性抗體檢測（非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)）（2）梅毒特異性抗體檢測（梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)）.梅毒非特異性抗體檢測原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質(zhì)做出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（即非特異性抗體）。未經(jīng)治療的患者，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)過正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度或直至轉(zhuǎn)為陰性。.反應(yīng)原理抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和膽固醇方法包括：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)不加熱血清反應(yīng)素(USR)甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等。.中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T491-2016梅毒非特異性抗體檢測操作指南.常見的測定影響因素水平旋轉(zhuǎn)儀（100+2r/min）反應(yīng)時(shí)間專用抗原滴針的加樣量要求，抗原量每滴為17ul左右反應(yīng)板的要求：無污染、試劑打開后不可冷藏保存.局限性假陰性反應(yīng)感染梅毒螺旋體后，機(jī)體免疫應(yīng)答需要一定過程，抗類脂質(zhì)的抗體濃度尚處于實(shí)驗(yàn)方法的檢測限之下，稱為窗口期，可發(fā)生假陰性反應(yīng)。少數(shù)早期梅毒和神經(jīng)梅毒以及部分晚期梅毒，可發(fā)生定性試驗(yàn)假陰性反應(yīng)。.前帶現(xiàn)象部分早期梅毒（1%-2%的二期梅毒，0.5%-1%的一期梅毒）的樣品可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象樣品類型

血漿中抗體濃度顯著高于血清，同一患者的血清和血漿檢測結(jié)果不可直接比較。.

雖然VDRL、RPR、TRUST的檢測原理基本相同，但因采用的抗原原料和生產(chǎn)工藝的不同，各種方法和試劑之間可能存在一定范圍的敏感性和特異性的系統(tǒng)性差異。任何2中方法的定性和半定量結(jié)果，相互之間不可直接比較。當(dāng)采用梅毒非特異性抗體作梅毒篩查用途時(shí)，應(yīng)選擇敏感性高的方法或試劑。.假陽性問題假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性①技術(shù)性假陽性

由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成。②生物學(xué)假陽性

是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性。.

急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病風(fēng)疹水痘傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹.慢性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡自身免疫性溶血性貧血盤狀紅斑狼瘡結(jié)節(jié)性多動脈炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎橋本氏甲狀腺炎風(fēng)濕性心臟病干燥綜合征毒品癮者慢性腎炎肝硬化老年麻風(fēng)

(是唯一產(chǎn)生慢性生物學(xué)假陽性的感染性疾病).梅毒特異性抗體檢測抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異性抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽性，則該患者基本終生陽性。.梅毒螺旋體的抗原結(jié)果外膜脂蛋白抗原 47、44.5、43、36、34、17、15KDa成分，其中47含量高，免疫原性強(qiáng)，為主要抗原，但與其他兩種致病性螺旋體有交叉反應(yīng)）軸絲抗原

軸絲為運(yùn)動器官，37、35.5、33KDa4D抗原

為梅毒螺旋體特異性表面抗原，均勻分布在梅毒螺旋體表面。.梅毒特異性抗體檢測技術(shù)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）梅毒螺旋體血球顆粒凝集試驗(yàn)（TPHA）酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）免疫層析法—梅毒快速檢測（RT）熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）蛋白印跡試驗(yàn)（WB）.TPPA/TPHA原理TPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒TPHA試驗(yàn)中梅毒螺旋體致敏羊紅細(xì)胞特點(diǎn)梅毒螺旋體(Nichols株)全抗原.SerodiaTPPA的操作步驟6、結(jié)果判讀1、加入樣品稀釋液100μl25μl25μl25μl孔號143212、加入測試樣品25μl孔號14321致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數(shù)孔號143211:401:8025μl25μl未致敏顆粒5、混勻，加蓋，孵育2個(gè)小時(shí)3、樣品的倍比稀釋孔號14321最終稀釋倍數(shù)1:201:4025μl25μl25μl25μl棄去.判斷標(biāo)準(zhǔn)粒子光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊粒子光滑覆蓋大部分孔底粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞環(huán)粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一明顯細(xì)胞環(huán)粒子沉積孔底，中央形成一小點(diǎn)粒子緊密沉積孔底中央..ELISA/CLIA原理

用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶標(biāo)儀判定試驗(yàn)陽性反應(yīng)。特點(diǎn)

本法可用于大規(guī)模血清檢測。化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用意義基本同ELISA。化學(xué)發(fā)光的敏感性？？.免疫層析.梅毒IgM抗體IgM抗體的產(chǎn)生是感染后的早期體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。IgM抗體不能通過胎盤屏障和血腦屏障，而母體的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒，血液中的IgG抗體也可以通過血腦屏障進(jìn)入腦脊液中，因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據(jù)，而IgM抗體可作為先天梅毒的診斷依據(jù)。同時(shí)，梅毒IgM抗體檢測還可以用于神經(jīng)梅毒、早期梅毒的診斷依據(jù)。.梅毒各類抗體出現(xiàn)時(shí)間.先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)必須具備以下條件之一：1.暗視野顯微鏡鏡檢梅毒螺旋體陽性；2.梅毒螺旋體IgM抗體陽性；3.RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍以及上；4.RPR/TRUST檢測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升；5.滿18月齡后，TPPA檢測仍為陽性。.梅毒的血清固定.梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測策略.梅毒血清學(xué)檢測目的與策略的關(guān)系.傳統(tǒng)策略.逆向策略..雙檢策略試驗(yàn)結(jié)果參考結(jié)果解釋梅毒特異性抗體檢測梅毒非特異性抗體檢測陽性陽性可能為現(xiàn)癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）或極早期梅毒陰性陰性排除梅毒感染或極早期梅毒.總結(jié)非特異性和特異性兩類抗體檢測均可作為梅毒初篩試驗(yàn)。