嗜鹽菌與高鹽有機(jī)廢水的生物強(qiáng)化處理實(shí)驗(yàn)方案

嗜鹽菌與高鹽有機(jī)廢水的生物強(qiáng)化處理實(shí)驗(yàn)方案1：取樣：樣品取自威海市某鹽場（威海市雙島鹽場村鎮(zhèn)前雙島村西（264203），此處還涉及到取樣方法。聚乙烯袋中。水樣采集方法：500mL須徹底洗凈，采樣時(shí)應(yīng)選擇在較深的靜水層中采樣。方法：握住采樣（深度視水的深度而定然后瓶口朝下打開瓶地標(biāo)上樣本的種類及采集日期、地點(diǎn)生態(tài)參數(shù)2：增值培養(yǎng)：如果采集到的樣品中嗜鹽菌的數(shù)量很少可以采用在培養(yǎng)基中加入各種不同鹽分的海水（控制鹽度，調(diào)節(jié)pH因?yàn)槲⑸锎x過程中會(huì)造成pH的變化，為了保證培養(yǎng)基處于適宜的pH（具體pH值可根據(jù)土樣或水樣的pH確定）可在培養(yǎng)基中加入緩沖溶液（磷酸鹽，但是當(dāng)pH值下降的很劇烈以致加緩沖堿溶液。測定其鹽度）置于盛100mL300mL三角瓶中，在光照33－37℃、120r／min3－5d，富集菌體（用什么方法富集；用接種環(huán)取一環(huán)富集培養(yǎng)液在預(yù)先制備好的大試管固體培養(yǎng)基斜面上連續(xù)劃曲線；然后在33－372－4天，獲（接種操作使用無菌接種箱或超凈工作臺。培養(yǎng)基：酪素水解物5g,酵母浸出物（酵母膏）12g,細(xì)菌蛋白胨6g,3g,KCL3g,MgSO.7HO18g,CaCl0.2g,FeSO4 2 2 40.001g,NaCl70g,1000mL,pH7.5,高溫（121℃）20—30min。液體培養(yǎng)基的配置：：稱量用天平準(zhǔn)確稱量配置培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計(jì)算各成分的用量，然后進(jìn)行準(zhǔn)確稱量。：溶化將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水（最，用玻璃棒攪拌促進(jìn)溶解。體積。如果某種藥品用量太少時(shí)，可預(yù)先配制成較濃溶液，然后按比例吸取一定體積溶液，加入培養(yǎng)基中。PHPHPH，如果培養(yǎng)基偏酸或1mol/LNaOH1mol/LHCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。PHNaOHHCl溶液，防止局部過酸或過PH計(jì)測定，直至達(dá)到所需PH。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂（1.5%-2%）加入，并用玻璃棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，最后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去的水分。培養(yǎng)基的滅菌制好的培養(yǎng)基需要滅菌（高壓蒸氣鍋滅菌）以保證培養(yǎng)基不含雜菌。如需制成斜面，應(yīng)在高壓蒸汽滅菌鍋降壓后，取出培養(yǎng)基擺成斜面。接種步驟：：接種前在試管上貼上標(biāo)簽，注明菌名、接種日期、接種人姓名等。他4指握在左手中，使中指位于兩試管之間部位，斜面向上，并使他們位于水平位置。：旋松棉塞，先用右手將棉塞旋松，以便接種時(shí)撥出。：取接種環(huán)，右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)端燒紅滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部分均用火燒過滅菌。：拔棉塞，用右手的無名指、小指、和手掌邊先后拔出菌種管和待接使館的棉塞，然后讓試管口緩緩過火滅菌。：環(huán)冷卻，將灼燒過的接種環(huán)伸入菌種管，先使環(huán)接觸沒有長菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻。：取菌種，待環(huán)冷卻后輕輕蘸取少量菌，然后將接種環(huán)移出接種管，注意不要使環(huán)的部分碰到管壁。待接斜面試管，從斜面底部向上劃曲線，切勿劃破培養(yǎng)基。：塞棉塞，取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將棉塞納入。：環(huán)滅菌，將接種環(huán)燒紅滅菌，放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊。土中真菌的分離：（12%）的固體培養(yǎng)基上，30℃下進(jìn)行富集。水中真菌的分離：態(tài)，因此還必須分離、純化。仔細(xì)觀察上述斜面單菌落，挑取具有嗜（擁有什么特征的菌落再次在固體培養(yǎng)基斜面上連續(xù)劃線，培養(yǎng)，進(jìn)行多次分離純化得到純培養(yǎng)嗜鹽菌菌株。在上述的增值培養(yǎng)過程中可以設(shè)置鹽度梯度，對嗜鹽菌進(jìn)行馴化，以讓其適應(yīng)更高的鹽度。4：菌種鑒定：用原子力顯微鏡觀察菌體形態(tài)、大小，依據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊（9版》進(jìn)行常規(guī)生理生化鑒定，全細(xì)胞脂肪酸分析，16SrDNA序列同源性分析確定菌株的菌屬。充分生長后，用封口膜或油紙將棉塞部分包扎好，置于4℃冰箱中保藏。6：菌液制備：將上述純化的噬鹽菌菌株在32℃150r/min的液水洗滌后獲得純菌液，然后再將其加入反應(yīng)器中。配置模擬廢水針對好氧菌的降解要求按COD P為100:5:1Cr磷酸二氫鉀(72mg/1000mL)磷酸氫二鉀(30mg/1000mL)分別為氮源和磷源，加滅菌海水配制，添加NaCl12%，PH7.5，模擬廢水COD =1494/L。也可以取工業(yè)廢水。Cr7：噬鹽菌處理效果研究：反應(yīng)器為六個(gè)有機(jī)玻璃SBR反應(yīng)器SBR反應(yīng)器：反應(yīng)器（++菌液；反應(yīng)器2（++菌液3（++菌液反應(yīng)器（未滅菌海水；反應(yīng)器5（+活性污泥器6（+菌液。多孔增氧泵曝氣（每個(gè)反應(yīng)器的曝氣量應(yīng)相同，自動(dòng)調(diào)溫電熱器控制恒溫32℃，每天調(diào)節(jié)pH值至7.5，每隔24h酸鉀法測定COD 值（氧化較完全，適用于各種水樣。繪制CODCr Cr隨時(shí)間變化曲線和COD 去除率曲線，對比各個(gè)反應(yīng)器廢水處理效Cr33次測定的平均值。酸性重鉻酸鉀法測定COD 值實(shí)驗(yàn)步驟：Cr1202h至恒重，精12.2588g1000mL蒸餾水中。[FeSO4

(NH4

)SO4

.6H2

O]98g溶于蒸餾水中，邊攪拌邊緩慢加入20mL濃硫酸，冷卻后加入1000mL容量瓶中，臨用前用重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。標(biāo)定：吸取25mL 0.04167mol/L重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至250mL，加20mL濃硫酸，冷卻后加入2—3滴亞鐵靈指示劑。用硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈紅褐色為止。硫酸—11g1000mL1—2天，使其溶解。:20.00mL混合均勻的水樣（化學(xué)需氧量很高時(shí)也可取適量20.00mL）250mL磨口的回流錐形瓶（三角瓶）中，加入適量（0.4g）硫酸汞，混勻。準(zhǔn)確加入10.00mL重鉻酸鉀標(biāo)10mL含有硫酸銀的濃硫酸溶液。輕輕搖動(dòng)錐形瓶使溶液混勻，加熱回流2（沸騰時(shí)開始計(jì)時(shí)。：冷卻后，用蒸餾水淋洗冷凝管，并稀釋至150mL。冷卻后，加2-3滴亞鐵靈指示劑，用硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由黃色到藍(lán)綠色為止，記下所消耗的該標(biāo)準(zhǔn)液的毫升數(shù)（V。1：取20.00mL蒸餾