有助于維持血糖健康水平檢驗(yàn)方法

有助于維持血糖健康水平檢驗(yàn)方法1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用成年動(dòng)物，選用小鼠（26土2g）或大鼠（180土20g單一性別，每組11.2材料1.2.1試劑四氧嘧啶（C4H2N2O4·H2O,分子量160.08）或鏈脲佐菌素、地塞米松磷酸鈉注射液、葡萄糖或醫(yī)用淀粉、血糖測(cè)定試紙或試劑盒，胰島素、甘油三酯、總膽固醇測(cè)定試劑盒1.2.2高熱能飼料鼠維持飼料52.6%1.2.3儀器血糖儀、全自動(dòng)生化儀、可見光分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、天平。1.3劑量分組及受試樣品給予時(shí)間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)模型對(duì)照組，以人體推薦量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）為其中的一個(gè)劑量組，另設(shè)二個(gè)劑量組，高劑量一般不超過(guò)30倍，必要時(shí)設(shè)空白對(duì)照組。同時(shí)設(shè)給予受試樣品高劑量的正常動(dòng)物組。受試樣品給予時(shí)間30天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至45天。1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1正常動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)選健康成年動(dòng)物按禁食3－5小時(shí)的血糖水平分組，隨機(jī)選1個(gè)對(duì)照組和1個(gè)劑量組。對(duì)照組給予溶劑，劑量組給予高劑量濃度受試樣品，連續(xù)30天，測(cè)空腹血糖值（禁食同實(shí)驗(yàn)前比較兩組動(dòng)物血糖值。1.4.2高血糖模型降糖實(shí)驗(yàn)方案一1.4.2.1胰島損傷高血糖模型四氧嘧啶（或鏈脲佐菌素）是一種β細(xì)胞毒劑，可選擇性地?fù)p傷多種動(dòng)物的胰島β細(xì)胞，造成胰島素分泌低下，引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病。1.4.2.1.2造模方法購(gòu)入成年動(dòng)物，適應(yīng)3—5天后，隨機(jī)取15只動(dòng)物禁食3－5小時(shí)，測(cè)空腹血糖，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)血糖值。隨后動(dòng)物禁食24小時(shí)（自由飲水注射四氧嘧啶（用前新鮮配制）造模，小鼠45－50mg/kgBW.iv或125－130mg/kgBW.ip，大鼠50－80mg/kgBW.iv或120－160mg/kgBW.ip。5－7天后動(dòng)物禁食3－5小時(shí)，測(cè)血糖，血糖值10－25mmol/L為高血糖模型成功動(dòng)物。1.4.2.1.3高血糖模型動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)選高血糖模型動(dòng)物按禁食3－5小時(shí)的血糖水平隨機(jī)分組，設(shè)1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組（組間差不大于1.1mmol/L）。劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予溶劑，連續(xù)30天，測(cè)空腹血糖值（禁食同實(shí)驗(yàn)前比較各組動(dòng)物血糖值及血糖下降百分率。（實(shí)驗(yàn)前血糖值－實(shí)驗(yàn)后血糖值）血糖下降率%=———————————————×100%實(shí)驗(yàn)前血糖值1.4.2.1.4高血糖模型動(dòng)物糖耐量實(shí)驗(yàn)劑量分組及受試樣品給予時(shí)間同1.4.2.1.3。各組動(dòng)物禁食3－5小時(shí)，測(cè)定給葡萄糖或醫(yī)用淀粉前（即0小時(shí)）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，15－20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.0g/kgBW或醫(yī)用淀粉3－5g/kgBW，測(cè)定給葡萄糖后各組0.5、2小時(shí)的血糖值或給醫(yī)用淀粉后1、2小時(shí)的血糖值，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組給葡萄糖或醫(yī)用淀粉后各時(shí)間點(diǎn)（0、0.5、2小時(shí)）血糖值及血糖曲線下面積的變化。（0小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×0.5（2小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×1.5血糖曲線下面積＝———————————————+———————————————22方案二1.4.2.2胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型(任選其一)1.4.2.2.1地塞米松誘導(dǎo)胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型糖皮質(zhì)激素具有拮抗胰島素生物效應(yīng)的作用，可抑制靶組織對(duì)葡萄糖的攝取和利用，促進(jìn)蛋白質(zhì)和脂肪的分解及糖異生作用，導(dǎo)致糖、脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病。1.4.2.2.1.2試驗(yàn)方法購(gòu)入健康雄性大鼠（15020g普通維持料適應(yīng)飼養(yǎng)3－5天，禁食3－4小時(shí)，取尾血，測(cè)定空腹即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值，給2.5g/kg·BW葡萄糖后測(cè)定0.5、2小時(shí)血糖值，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)值。以0、0.5小時(shí)血糖水平分5個(gè)組，即1個(gè)空白對(duì)照組、1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組，每組15只?？瞻讓?duì)照組不作處理，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，連續(xù)35天。各組給予維持飼料飼養(yǎng)，1周后模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組更換高熱能飼料，喂飼2周后，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組在高熱能飼料基礎(chǔ)上分別給予地塞米松0.8mg/kgBW腹腔注射（0.008%地塞米松注射量1ml/100g體重每日1次，連續(xù)10－12天。試驗(yàn)結(jié)束，各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。1.4.2.2.1.3觀察指標(biāo)1.4.2.2.1.3.1空腹血糖、糖耐量各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，測(cè)定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，空白對(duì)照組不作處理，15－20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.5g/kgBW，測(cè)定給葡萄糖后各組0.5、2小時(shí)的血糖值，若模型對(duì)照組0.5小時(shí)血糖值≥10mmol/L，或模型對(duì)照組0.5小時(shí)、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線下面積升高，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后（0.5、2小時(shí)）血糖及0、0.5、2小時(shí)血糖曲線下面積的變化。（實(shí)驗(yàn)前血糖值－實(shí)驗(yàn)后血糖值）血糖下降率%=———————————————×100%實(shí)驗(yàn)前血糖值（0小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×0.5（2小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×1.5血糖曲線下面積＝———————————————+————————————————221.4.2.2.1.3.2膽固醇、甘油三脂各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)血清膽固醇、甘油三脂，若模型對(duì)照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性，判定模型脂代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組血脂變化。1.4.2.2.1.3.3胰島素各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)血清胰島素，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較胰島素抵抗指數(shù)無(wú)明顯下降，且動(dòng)物糖/脂代謝紊亂成立，判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對(duì)照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。血糖×胰島素胰島素抵抗指數(shù)=胰島素/22.5e-㏑血糖≈22.51.4.2.2.2四氧嘧啶誘導(dǎo)胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型高熱能飼料喂飼基礎(chǔ)上，輔以小劑量四氧嘧啶（C4H2N2O4·H2O,分子量160.08造成糖/脂代謝紊亂，胰島素抵抗，誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病。1.4.2.2.2.2造模方法購(gòu)入健康雄性大鼠（15020g普通維持料適應(yīng)飼養(yǎng)3－5天，禁食3－4小時(shí)，取尾血，測(cè)定給葡萄糖前（即0小時(shí)）血糖值，給2.5g/kgBW葡萄糖后0.5、2小時(shí)血糖值，作為該批次動(dòng)物基礎(chǔ)值。以0、0.5小時(shí)血糖水平分5個(gè)組，即1個(gè)空白對(duì)照組、1個(gè)模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組，每組15只?？瞻讓?duì)照組不作處理，3個(gè)劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，連續(xù)33天。各組給予維持料飼養(yǎng)1周后模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組更換高熱能飼料，喂飼3周后，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量禁食24小時(shí)（不禁水給予四氧嘧啶103－105mg/kgBW腹腔注射，注射量1ml/100g體重。注射后繼續(xù)給予高熱能飼料喂飼3－5天。試驗(yàn)結(jié)束，各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)空腹血糖、糖耐量、血清胰島素及膽固醇、甘油三脂水平。1.4.2.2.2.3觀察指標(biāo)1.4.2.2.2.3.1空腹血糖、糖耐量各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，測(cè)定空腹血糖即給葡萄糖前（0小時(shí)）血糖值，劑量組給予不同濃度受試樣品，模型對(duì)照組給予同體積溶劑，空白對(duì)照組不作處理，15－20分鐘后各組經(jīng)口給予葡萄糖2.5g/kgBW，測(cè)定給葡萄糖后各組0.5、2小時(shí)的血糖值，若模型對(duì)照組0.5小時(shí)血糖值≥10mmol/L，或模型對(duì)照組0.5小時(shí)、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖升高或血糖曲線下面積升高，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組空腹血糖、給葡萄糖后（0.5、2小時(shí)）血糖及0、0.5、2小時(shí)血糖曲線下面積的變化。（實(shí)驗(yàn)前血糖值－實(shí)驗(yàn)后血糖值）血糖下降率%=———————————————×100%實(shí)驗(yàn)前血糖值（0小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×0.5（2小時(shí)血糖＋0.5小時(shí)血糖）×1.5血糖曲線下面積＝———————————————+———————————————221.4.2.2.2.3.2膽固醇、甘油三脂各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)血清膽固醇、甘油三脂，若模型對(duì)照組血清膽固醇或甘油三酯明顯升高，與空白對(duì)照組比較，差異有顯著性，判定模型脂代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，觀察模型對(duì)照組與受試樣品組血脂變化。1.4.2.2.2.3.3胰島素各組動(dòng)物禁食3－4小時(shí)，檢測(cè)血清胰島素，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較胰島素抵抗指數(shù)無(wú)明顯下降，且動(dòng)物糖/脂代謝紊亂成立，判定胰島素抵抗糖\脂代謝紊亂模型成功。觀察模型對(duì)照組與受試樣品組胰島素抵抗情況。血糖×胰島素胰島素抵抗指數(shù)=胰島素/22.5e-㏑血糖≈22.51.5數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。1.5.1指標(biāo)判定1.5.1.1正常動(dòng)物降糖試驗(yàn)血糖指標(biāo)：空腹血糖受試樣品劑量組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定對(duì)正常動(dòng)物血糖無(wú)影響。1.5.1.2高血糖模型降糖試驗(yàn)空腹血糖指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，空腹血糖下降或血糖下降百分率升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品空腹血糖指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。糖耐量指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，在給葡萄糖或醫(yī)用淀粉后0.5、2小時(shí)任一時(shí)間點(diǎn)血糖下降（或血糖下降百分率升高）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，或0、0.5、2小時(shí)血糖曲線下面積降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判定該受試樣品糖耐量指標(biāo)結(jié)果陽(yáng)性。血脂指標(biāo)：模型成立的前提下，受試樣品劑量組與模型對(duì)照組比較，血清膽固醇或甘油三酯下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可判定該受試樣品降血脂指標(biāo)陽(yáng)性。1.5.2結(jié)果判定方案一：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，且對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖無(wú)影響，即可判定該受試樣品有助于維持血糖健康水平動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。方案二：空腹血糖和糖耐量二項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，且血脂（總膽固醇、甘油三酯）無(wú)明顯升高，對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖無(wú)影響，即可判定該受試樣品有助于維持血糖健康水平動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。1.6注意事項(xiàng)1.6.1為了使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物糖代謝功能狀態(tài)盡量保持一致，也為了準(zhǔn)確地按體重計(jì)算受試樣品的用量，實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物應(yīng)嚴(yán)格禁食16h（不禁水實(shí)驗(yàn)前后禁食條件應(yīng)一致，鼠類在禁食的同時(shí)應(yīng)更換襯墊物。1.6.2如用血清樣品進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)于取血后30分鐘內(nèi)分離血清，分離后血清的含糖量在6小時(shí)內(nèi)不變。用血清制備的無(wú)蛋白血濾液可保存48小時(shí)以上。1.6.3高濃度的還原性物質(zhì)如VitC亦能與色素原競(jìng)爭(zhēng)游離氧，干擾反應(yīng)，使結(jié)果偏低。1.6.4血紅蛋白能使過(guò)氧化氫過(guò)早分解，亦干擾反應(yīng)，致使測(cè)得血糖值偏低。故對(duì)已溶血的全血或血清必須制備無(wú)蛋白濾液后，再進(jìn)行測(cè)定。1.7血糖測(cè)定方法用試紙或試劑盒，按說(shuō)明書操作；若自行配制試劑，按下列方法操作：1.7.1原理葡萄糖氧化酶是一種需氧脫氫酶，能催化葡萄糖生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫，后者在過(guò)氧化物酶作用下放出氧，使4-氨基安替比林與酚氧化縮合，生成紅色醌類化合物，可在波長(zhǎng)505nm比色測(cè)定。葡萄糖氧化酶葡萄糖--------→葡萄糖酸＋過(guò)氧化氫過(guò)氧化物酶過(guò)氧化氫＋酚＋4-氨基安替比林------→紅色醌類化合物1.7.2試劑配制磷酸鹽緩沖液（0.2mol/L，pH7.00.2mol/LNa2HPO461mL，0.2mol/LKH2PO439mL混合即可。酶試劑：葡萄糖氧化酶400u，過(guò)氧化物酶0.6mg，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg，加磷酸鹽緩沖液至100mL，pH調(diào)至7。冰箱存放至少可穩(wěn)定2個(gè)月。酚試劑：酚100mg溶于100mL蒸餾水中。酶混合試劑：取等量酶試劑和酚試劑混合。在冰箱中可存放1個(gè)月。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液儲(chǔ)存液：無(wú)水D-葡萄糖（A.R.）在烤箱中80℃烤4小時(shí)，冷卻后，存放于干燥器中至恒重。精確稱取2g以0.25%苯甲酸溶液溶解并移入100mL容量瓶中，再用苯甲酸溶液稀釋至100mL。應(yīng)用液：在100mL容量瓶中準(zhǔn)確加入儲(chǔ)存液5mL，再用0.25%苯甲酸溶液稀釋至100mL，即1mg/mL應(yīng)用液。并用蒸餾水稀釋至1000mL。1.7.3操作步驟取蛋白沉淀劑1mL加入血漿（血清）50μL混勻。室溫放置7分鐘后，離心，取上清液（無(wú)蛋白血濾液）測(cè)定。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液亦進(jìn)行同樣處理。測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管無(wú)蛋白血濾液mL0.5--處理后的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液mL-0.5-蛋白沉淀液mL--0.5酶混合試劑mL444混勻后，37℃水浴保溫15分鐘，用空白管調(diào)零點(diǎn)，在波長(zhǎng)505nm處比色。1.7.4結(jié)果計(jì)算測(cè)定管OD血糖含量（mmol/L）=———————×100/18標(biāo)準(zhǔn)管OD2人體試食試驗(yàn)2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)采用隨機(jī)分組，組間對(duì)照設(shè)計(jì)。2.2受試產(chǎn)品受試產(chǎn)品必須是具有定型包裝、標(biāo)明服用方法和服用量的定型產(chǎn)品；安慰劑除功效成分外，在劑型、口感、外觀和包裝上與受試產(chǎn)品保持一致。2.3受試者選擇2.3.1納入標(biāo)準(zhǔn)選擇空腹血糖5.6－7mmol/L（100－126mg/dL）或餐后2小時(shí)血糖7.8－11.1mmol/L（140－200mg/dL）的糖調(diào)節(jié)受損（IGR）人群。2.3.2排除標(biāo)準(zhǔn)2.3.2.1糖尿病病人。2.3.2.2年齡在18歲以下或65歲以上，妊娠或哺乳期婦女，對(duì)受試樣品過(guò)敏者。2.3.2.3有心、肝、腎等主要臟器并發(fā)癥，或合并有其它嚴(yán)重疾病，精神病患者，服用糖皮質(zhì)激素或其它影響血糖藥物者。2.3.2.4不能配合飲食控制而影響觀察結(jié)果者。2.3.2.5近3個(gè)月內(nèi)有糖尿病酮癥、酸中毒以及感染者。2.3.2.6短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者。2.3.2.7凡不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定服用受試樣品，或資料不全影響觀察結(jié)果者。2.4受試者分組采用組間對(duì)照設(shè)計(jì)。根據(jù)隨機(jī)盲法的要求進(jìn)行分組。按受試者的糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白及血糖水平隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。2.5試驗(yàn)方法試驗(yàn)前對(duì)每一位受試者按性別、年齡、不同勞動(dòng)強(qiáng)度、理想體重參照原來(lái)生活習(xí)慣規(guī)定相應(yīng)的飲食，試食期間堅(jiān)持飲食控制，治療糖尿病的藥物種類和劑量不變。試食組在服藥的基礎(chǔ)上，按推薦服用方法和服用量每日服用受試樣品，對(duì)照組可服用安慰劑或采用空白對(duì)照。受試樣品給予時(shí)間2個(gè)月，必要時(shí)可延長(zhǎng)至4個(gè)月。2.6觀察指標(biāo)2.6.1安全性指標(biāo)2.6.1.1一般狀況體征包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等2.6.1.2血、尿、便常規(guī)檢查2.6.1.3肝、腎功能檢查2.6.1.4胸片、心電圖、腹部B超檢查（僅試驗(yàn)前檢查一次）2.6.2功效指標(biāo)2.6.2.1癥狀觀察詳細(xì)詢問(wèn)病史，了解患者飲食情況、用藥情況、活動(dòng)量，觀察口渴多飲、多食易饑、倦怠乏力、多尿等主要臨床癥狀，按癥狀輕重積分，于試食前后統(tǒng)計(jì)積分值，并就其主要癥狀改善（改善1分為有效觀察臨床癥狀改善率。臨床癥狀積分表無(wú)口渴感明顯，飲水量口渴顯著，飲水無(wú)無(wú)2.6.2.2空腹血糖觀察試食前后空腹血糖值、空腹血糖下降百分率、空腹血糖有效率。2.6.2.3餐后2小時(shí)血糖觀察試食前后食用100g精粉饅頭后2小時(shí)血糖值、餐后2小時(shí)血糖下降百分率、餐后2小時(shí)血糖有效2.6.2.4糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白觀察試食前后糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白變化。2.6.2.5血脂觀察試食前后血清總膽固醇、血清甘油三酯水平。2.7注意2.7.1血清(漿)中的葡萄糖能與白蛋白及其他血清蛋白分子末端的氨基上發(fā)生非酶促糖化反應(yīng)而形成高分子酮胺結(jié)構(gòu)。此酮胺結(jié)構(gòu)能在堿性環(huán)境中與硝基四氮唑蘭(NBT)發(fā)生還原反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，以1-脫氧-1-嗎啡啉果糖(DMF)作標(biāo)準(zhǔn)參照物在540nm波長(zhǎng)處(530nm－550nm)進(jìn)行比色測(cè)定，求得樣本中果糖胺的濃度。參考值為1.7mmol/L－2.5mmol/L。由于血清中白蛋白的半衰期約21d，所以糖化血清蛋白測(cè)定可反映患者過(guò)去2-3周平均血糖水平。糖尿病患者的糖化血清蛋白的增加比糖化血紅蛋白迅速，當(dāng)血糖得到較好控制時(shí)，糖化血清蛋白的下降也比糖化血紅蛋白迅速，因此能較早地提供血糖控制信息。糖化血清蛋白更能靈敏地反映近期糖尿病患者血糖的波動(dòng)情況。它的敏感度高，特異性強(qiáng)。并不受年齡，飲食，藥物，妊娠等因素的影響，對(duì)血糖濃度的臨時(shí)波動(dòng)反應(yīng)不敏感，是診斷糖尿病和較長(zhǎng)時(shí)間血糖控制水平研究的良好指標(biāo)。標(biāo)本溶血對(duì)糖化血清蛋白的測(cè)定結(jié)果有較大影響，血清中1g/L的血紅蛋白可導(dǎo)致GSP測(cè)定結(jié)果增高0.6mmol/L左右。2.7.2糖化血紅蛋白是經(jīng)過(guò)緩慢的、不可逆的、非酶促反應(yīng)而結(jié)合形成的產(chǎn)物，其濃度與紅細(xì)胞壽命(平均120天)和該時(shí)期內(nèi)血糖平均濃度有關(guān)，不受每天葡萄糖波動(dòng)的影響，也不受運(yùn)動(dòng)或食物的影響，可反映患者抽血前2個(gè)月－3個(gè)月的平均血糖水平，是判斷糖尿病長(zhǎng)期控制的良好指標(biāo)。糖化血紅蛋白在健康人體內(nèi)的波動(dòng)范圍很小(0.1%－0.2%)，正常值為4%－6%。2.8數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定凡自身對(duì)照資料可以采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；方差齊但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。2.8.1血糖下降幅度試驗(yàn)前空腹血糖—試驗(yàn)后空腹血糖空腹血糖下降百分率=—————————————————×100%試驗(yàn)前空腹血糖試驗(yàn)前餐后2小時(shí)血糖—試驗(yàn)后餐后2小時(shí)血糖餐后2小時(shí)血糖下降百分率=—————————————————————×100%試驗(yàn)前餐后2小時(shí)血糖2.8.2糖化血紅蛋白或糖化血清蛋白下降幅度試驗(yàn)前糖化血紅蛋白—試驗(yàn)后糖化血紅蛋白糖化血紅蛋白下降百分率=—————————————————————×100%試驗(yàn)前糖化血紅蛋白試驗(yàn)前糖化血清蛋白—試驗(yàn)后糖化血清蛋白糖化血清蛋白下降百分率=—————————————————————×100%試驗(yàn)前糖化血清蛋白2.8.3功效判定標(biāo)準(zhǔn)有效：⑴試驗(yàn)后空腹血糖恢復(fù)正常(≤5.6mmol/L或空腹血糖下降幅度≥10%⑵試驗(yàn)后餐后2小時(shí)血糖恢復(fù)正常(≤7.8mmol/L)，或餐后2小時(shí)血糖下降幅