電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白酶Caspase1的影響

電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白酶Caspase1的影響

01摘要一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組材料與方法二、主要試劑與儀器目錄03020405三、模型制備與干預(yù)方法五、觀察指標(biāo)與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)四、神經(jīng)功能評(píng)分與樣本收集參考內(nèi)容目錄070608摘要摘要目的：探討電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白酶Caspase1的影響。摘要方法：將40只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、電針組及藥物組，每組10只。采用改良的Longa法建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型，各組大鼠在再灌注損傷前、后不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，檢測(cè)海馬區(qū)細(xì)胞凋亡情況及Caspase1的表達(dá)。摘要結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組神經(jīng)功能評(píng)分升高（P<0.01），海馬區(qū)細(xì)胞凋亡和Caspase1陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)（P<0.01）。與模型組比較，電針組及藥物組神經(jīng)功能評(píng)分降低（P<0.01），海馬區(qū)細(xì)胞凋亡和Caspase1陽(yáng)性表達(dá)減弱（P<0.01）；且與藥物組比較，電針組上述指標(biāo)略有改善（P<0.01）。摘要結(jié)論：電針可抑制腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)細(xì)胞焦亡，其機(jī)制可能與抑制Caspase1的表達(dá)有關(guān)。摘要腦缺血再灌注損傷（cerebralischemicreperfusioninjury，CI/R）是指腦組織在缺血一段時(shí)間后恢復(fù)血液供應(yīng)，其損傷程度反而加重的現(xiàn)象。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞焦亡在腦缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，而Caspase1是細(xì)胞焦亡過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白酶。本研究以“電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬區(qū)細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白酶Caspase1的影響”摘要為題，通過(guò)建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型，觀察電針對(duì)海馬區(qū)細(xì)胞焦亡及Caspase1的影響，旨在探討電針對(duì)腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制。材料與方法一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組健康雄性SD大鼠40只，體重250～300g，由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。將40只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、電針組及藥物組，每組10只。二、主要試劑與儀器二、主要試劑與儀器戊巴比妥鈉、生理鹽水、水合氯醛、瓊脂、兔抗Caspase1多克隆抗體、羊抗兔二抗、TUNEL染色試劑盒等均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。針灸用電針儀及自制無(wú)菌針灸針由上海醫(yī)用縫合針廠生產(chǎn)；紅外光學(xué)成像系統(tǒng)為英國(guó)Leica公司生產(chǎn)；光學(xué)顯微鏡為日本Olympus公司生產(chǎn)。三、模型制備與干預(yù)方法三、模型制備與干預(yù)方法采用改良的Longa法建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型：水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠（3％水合氯醛，1mL/100g），仰臥位固定，暴露氣管，備皮。左頸總動(dòng)脈分離并結(jié)扎，制成動(dòng)脈夾閉模型?？p合皮膚切口。30min后將線拆除，將球囊導(dǎo)管拔出并放氣，取下動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流2h后拔出導(dǎo)管，形成腦缺血再灌注損傷模型。假手術(shù)組除不結(jié)扎左頸總動(dòng)脈外，其他步驟同模型組。四、神經(jīng)功能評(píng)分與樣本收集四、神經(jīng)功能評(píng)分與樣本收集各組大鼠在再灌注損傷前（T0）、后2h（T1）、6h（T2）、24h（T3）不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照Longa法：0分，無(wú)神經(jīng)功能缺損；1分，不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分，行走時(shí)向?qū)?cè)傾斜；3分，行走困難；4分，無(wú)法行走；5分，死亡。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死各組大鼠并迅速取出海馬組織制備成石蠟切片，進(jìn)行HE染色及TUNEL染色。同時(shí)取部分海馬組織于-80℃冰箱保存以備蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)。五、觀察指標(biāo)與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)五、觀察指標(biāo)與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)觀察各時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能變化情況；采用Image-ProPlus軟件對(duì)海馬區(qū)細(xì)胞凋亡情況及Caspase1陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行半定量分析；計(jì)算各組大鼠海馬組織中Caspase1陽(yáng)性表達(dá)與凋亡細(xì)胞數(shù)目的相關(guān)性。參考內(nèi)容引言引言腦缺血再灌注損傷（CI/RI）是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特征是腦組織在缺血后血流再通時(shí)引起的進(jìn)一步腦損傷。海馬半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）是一種在細(xì)胞凋亡中起關(guān)鍵作用的酶，其在腦缺血再灌注損傷中的表達(dá)增加，與神經(jīng)元的死亡密切相關(guān)。電針作為一種非藥物治療方法，已在腦缺血再灌注損傷的治療中顯示出顯著的效果。本次演示旨在探討電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表達(dá)的影響。材料與方法1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康成年雄性大鼠40只，體重250～300g，隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham）、模型組（Model）和電針組（EA），每組10只。2、模型制備2、模型制備采用改良的Longa方法制備大鼠腦缺血再灌注模型。假手術(shù)組僅進(jìn)行手術(shù)分離而不進(jìn)行栓塞。3、電針治療3、電針治療電針組在再灌注后即開(kāi)始電針治療，選取“百會(huì)”和“曲池”兩個(gè)穴位，連續(xù)治療7天。4、指標(biāo)檢測(cè)4、指標(biāo)檢測(cè)在末次治療后24h，處死大鼠，取海馬組織制備石蠟切片，進(jìn)行Caspase-3免疫組化染色。根據(jù)染色結(jié)果，計(jì)算海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。1、大體觀察1、大體觀察模型組和電針組大鼠在缺血再灌注后均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損，表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)和認(rèn)知功能障礙。電針組大鼠經(jīng)電針治療后，癥狀得到明顯改善。2、海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)2、海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與假手術(shù)組比較，模型組海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增加（P<0.01）；與模型組比較，電針組海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著減少（P<0.01）。2、海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)結(jié)論本研究結(jié)果表明，電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬Caspase-3的表達(dá)具有顯著抑制作用，這可能是其改善腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制之一。然而，本研究的觀察指標(biāo)有限，未來(lái)研究可以進(jìn)一步探討電針對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠海馬Caspase-3上游信號(hào)通路的影響，2、海馬Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)以及電針治