實驗室使用菇栽培實驗報告

實驗室使用菇栽培實驗報告（12生物技術(shù)趙倩12103179）一、

實驗?zāi)康?/p>

1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。

2.掌握平菇栽培中器械和培養(yǎng)基的滅菌方法及原理，如高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌、灼燒滅菌和紫外燈滅菌法等。

3.了解食用菌母種擴(kuò)大繁殖生產(chǎn)的基本原理,掌握斜面母種的接種和培養(yǎng)方法。

4.掌握平菇栽培中原種、栽培種培養(yǎng)基的制備方法。

5.培養(yǎng)學(xué)生自行設(shè)計出菇的方案。

二、

基本原理

1.平菇是木質(zhì)腐生菌，生長發(fā)育所需各種營養(yǎng)物質(zhì)均從木屑、棉籽殼、稻草等培養(yǎng)料中獲得。平菇生長周期短，從播種到第一批采收一般為30天到40天，栽培方法簡便，成功率高。本實驗在實驗室條件下，用袋裝方法出菇。

2.食用菌生產(chǎn)中，培養(yǎng)基、器皿及接種工具的消毒滅菌，是防止雜菌污染，提高食用菌產(chǎn)量的關(guān)鍵措施，滅菌和消毒法主要有物理方法（高溫滅菌和紫外線滅菌）、化學(xué)滅菌法。

干熱滅菌是在保持恒溫的電烘箱中進(jìn)行的,適用于各種耐熱的玻璃器皿、棉塞、濾紙、以及不能與蒸汽充分接觸的液體的滅菌.一般在160攝氏度持續(xù)1.5—2小時,就可達(dá)到滅菌的目的.灼燒滅菌可直接在酒精燈外火焰灼燒滅菌,酒精燈所用的酒精濃度要在百分之95以上。紫外燈滅菌是接種室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前開燈20—30分鐘.紫外線可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)核酸和酶發(fā)生變化而使細(xì)胞死亡,還可使空氣中氧氣產(chǎn)生臭氧,臭氧也具有殺菌作用.因其透射力差只適用于空氣及物體表面的滅菌,有效距離為1.5—2米,以1.2米內(nèi)為最好。

3.食用菌母種培養(yǎng)基和分離菌種時用斜面培養(yǎng)基，適用于一般食用菌的母種分離與培養(yǎng)用的培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（即PDA培養(yǎng)基），配成后用加壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。

4.食用菌菌種生產(chǎn)一般按母種——原種——栽培種進(jìn)行。母種數(shù)量少，要進(jìn)行試管移接擴(kuò)大培養(yǎng)才能進(jìn)行生產(chǎn)。

5.原種由母種繁殖而成，由原種擴(kuò)大培養(yǎng)成栽培種。原種和栽培種生產(chǎn)一般包括配料——裝瓶（袋）——滅菌——接種——培養(yǎng)等流程。一般用瓶裝或塑料袋裝，滅菌壓力和時間相應(yīng)延長。

三、

實驗器材

1.材料：馬鈴薯、葡萄糖（或蔗糖）、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂、75%乙醇溶液、麥粒、棉籽殼、石膏粉、碳酸鈣、麥麩

2.器具：錐形瓶、棉塞、超凈工作臺、燒杯、量筒、漏斗、天平、鐵架臺、紗布、藥匙、PH實紙、接種鏟、酒精燈、聚丙烯塑料袋、小試管、牛皮紙、高壓蒸汽滅菌鍋等

四、

實驗過程

1、配制培養(yǎng)基及其實驗的前期準(zhǔn)備①準(zhǔn)備干凈的一只試管和一個錐形瓶，貼上標(biāo)簽并制作兩個與試管和錐形瓶相配套的棉塞。

②配置PDA培養(yǎng)基：

馬鈴薯（去皮）2500克、

葡萄糖

250克

瓊脂250克

、水12500克

、自然PH值

按上述配料加，用小火加熱并用攪拌器不斷攪拌。

③分裝：將培養(yǎng)基在凝固前進(jìn)行分裝，一般到試管的1/5至1/4左右，分裝完后加塞用牛皮紙包扎好。

④滅菌：用高壓蒸汽滅菌鍋對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。

打開滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加入適量的水。將待滅菌物品放入鍋內(nèi)，然后價蓋旋緊螺旋，使蒸氣鍋密閉；

打開放氣閥加熱。自開始產(chǎn)生蒸汽后10分鐘左右關(guān)緊放氣閥讓溫度隨蒸汽壓力增高而上升，最后在115℃下，維持30分鐘。

停止加熱，待壓力降至5磅以下時，放氣，打開鍋蓋，取出滅菌物。

⑤制試管斜面：滅菌完畢降至60攝氏度后取出試管擺斜面，是斜面為試管長度的1/2。

⑥無菌檢查：將斜面培養(yǎng)基放置于37攝氏度溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24小時，若無菌長出，可存?zhèn)溆谩?、接種：

①超凈臺提前擦干凈,紫外燈殺菌,通風(fēng)打開10分鐘后可以操作；②接種菌絲型平菇母種擴(kuò)大培養(yǎng)：

左手持試管，右手持接種工具，拔去棉塞后用酒精燈封住管口

將母種用接種鏟切成0.5厘米寬長條，深度約占培養(yǎng)基2/3，再用接種鋤切成寬0.5厘米的正方形小塊接種到空白試管中央，菌絲面朝上,使之緊貼于培養(yǎng)基斜面上。

置于25℃至27℃恒溫箱中培養(yǎng)，當(dāng)菌種塊上菌絲萌發(fā)后可將溫度降至2到3℃。當(dāng)菌絲長至斜面培養(yǎng)基長度的4/5時可停止培養(yǎng)放恒溫箱中培養(yǎng)。

3、配制原種培養(yǎng)基：

制麥粒培養(yǎng)基（即原種培養(yǎng)基）：

麥粒2500克

、蔗糖

62.5克

碳酸鈣

62.5克、

水

6250克

②將麥粒培養(yǎng)基裝到錐形瓶中（約占錐形瓶的一半，不可太滿），加棉塞包扎后滅菌，滅菌條件一般采用1.4公斤/平方厘米，1.5—2.0小時。

4、原種接種培養(yǎng)：

①原種接種：在超凈工作臺上，取斜面母種，切取2.5平方厘米大小斜面菌種一塊放置于上述配置的麥粒培養(yǎng)基上，并使菌種埋在培養(yǎng)基中。接種后，用酒精燈灼燒瓶口、棉塞，用棉塞塞住瓶口，并用繩將牛皮紙扎在瓶口上。

②原種培養(yǎng)：接種后的原種的培養(yǎng)瓶，要及時移入25℃至27℃恒溫培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室中；菌種培養(yǎng)初期，每天檢查染菌情況，污染的瓶袋要及時發(fā)現(xiàn)處理；適齡的菌種為菌絲長至5—10天室最適于擴(kuò)大生產(chǎn)的；培養(yǎng)過程中，除對溫度的要求較直接外，其余對培養(yǎng)室的濕度，通風(fēng)條件等都是間接的，只要做到基本恒溫，對濕度、空氣、光線等培養(yǎng)條件只要做到一般性的綜合調(diào)節(jié)就足夠了。

5、栽培種培養(yǎng)基的制作與滅菌

制棉籽殼培養(yǎng)基（即栽培種培養(yǎng)基）：棉殼

98%

、石膏粉

1%

蔗糖

1%

、含水量

60%—65%

按配方用量分別稱取所需各種原料；

調(diào)整培養(yǎng)料的含水量：用手緊握培養(yǎng)料，以指縫中由水外滲而不往下滴為適宜，沒有水漬為過干，由水珠連續(xù)淌下為過濕。可用加水、嗮干或加料的方法調(diào)整。

②裝袋培養(yǎng)基配制好后，裝入塑料袋中，在裝的過程中插入一根小試管直達(dá)瓶底或至培養(yǎng)料4/5處（目的是增加袋內(nèi)氧氣，固定菌種和有利于菌絲沿著洞穴向下蔓延），注意裝袋袋料保持一致均勻，手握時由彈性，不下陷，不要太松或太緊，及時扎口，仔細(xì)檢查防止破損。③包扎后滅菌：滅菌條件與原種滅菌條件同。

6、栽培種接種與培養(yǎng)

①栽培種接種：采用直接在接種穴內(nèi)灌滿的接種方法，在其表面也撒些菌種碎屑，操作在超凈工作臺上進(jìn)行。

②溫培養(yǎng)3周（要求與菌種的原種培養(yǎng)條件相同），菌絲即長滿塑料袋，已分化出子實體原基。7、進(jìn)一步培養(yǎng)帶回寢室培養(yǎng)：打開塑料袋口，或?qū)⑺芰洗诩羝茢傞_，同時注意環(huán)境噴霧保濕，加強(qiáng)通風(fēng)換氣。待菌蓋長至玉米粒大小后，才開始向子實體上噴少量霧狀水，隨子實體上大，逐漸增多噴水量和次數(shù)。

8、到菌菇體成熟時采收，一般鮮銷的平菇在其成熟期的初期和中期采收。通常一手按住菇柄基部的培養(yǎng)料，一手捏住菌柄輕輕擰下，但切不可硬拔，以免將培養(yǎng)料帶起，影響下潮出菇。

五、

實驗結(jié)果

實驗結(jié)果：12月25日采收得到生長尚未成熟的平菇子實體。

具體過程：

1.母種擴(kuò)大培養(yǎng)后的菌絲從外觀看，菌絲潔白、濃密、粗壯、富有彈性，生長整齊，不產(chǎn)生色素，菌種無雜菌污染且無雜色出現(xiàn)；

2.原種培養(yǎng)得到的菌絲潔白、濃密，生長到最錐形瓶底部3.栽培種培養(yǎng)得到的菌絲潔白、濃密，生長到袋料的底部；

12月10日：子實體早期生長在培養(yǎng)基的周圍，不規(guī)則分布。

12月12-13日：菇體發(fā)育成熟的初期和中期，菌蓋邊緣尚未完全展開、菌蓋平滑完整無開裂，菌蓋邊緣韌性好，菌肉厚實肥嫩，菌柄中實柔軟。

12月25日：菇體發(fā)育成熟，菌蓋邊緣完全展開、菌蓋平滑完整稍微開裂，菌蓋邊緣韌性較好。六、實驗分析及注意事項：

實驗分析：實驗做的不是非常成功。在母種、原種培養(yǎng)時做到?jīng)]有讓菌種污染，嚴(yán)格按照無菌操作步驟，所以在得到菌種時都是好的菌種。在出菇期的培養(yǎng)，控制了培養(yǎng)基的濕度、光照、溫度等，每天檢查濕度及生長狀況。

注意事項：

①在母種、原種、栽培種接種時，必須嚴(yán)格按照無菌操作的方法進(jìn)行，接種工具在火焰上灼燒滅菌后，須在試管壁上冷卻下在切割菌種，否則菌絲被燙融影響菌種恢復(fù)。盡量在超凈工作臺上操作。

②保藏的母種在接種前應(yīng)進(jìn)行認(rèn)真檢查是否由污染現(xiàn)象，已污染雜菌的母種不能用于擴(kuò)大培養(yǎng)。

③掌握好菌種的適齡期，適齡菌種為菌絲長至瓶底后5—10天，最適于擴(kuò)大生長，此時為菌絲生長處最佳生長期，適應(yīng)性強(qiáng)。

④供制種的麥粒最好是儲存一年左右的陳麥粒，新麥制種菌絲吃料慢長勢弱；煮熟麥粒是制種的關(guān)鍵，要掌握熟而不爛，表皮不破，沒有淀粉滲出。

⑤出菇期管理要點(diǎn)：

首先：刺激子實體的發(fā)生可通過增進(jìn)散射光，延長光照時間；加大晝夜溫差；保持較濕潤環(huán)