新教材2023版高中生物第1章發(fā)酵工程第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用第1課時(shí)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)課件新人教版選擇性必修3

第1課時(shí)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)課前自主預(yù)習(xí)案課堂互動探究案課前自主預(yù)習(xí)案知識梳理·填準(zhǔn)記牢——自主·預(yù)習(xí)·先知一、培養(yǎng)基的配制1．培養(yǎng)基人們按照微生物對_________的不同需求，配制出供其__________的營養(yǎng)基質(zhì)。2．培養(yǎng)基的種類營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖凝固劑瓊脂3．培養(yǎng)基的營養(yǎng)組成各種培養(yǎng)基一般都含有________、________、________和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還需要滿足微生物生長對________、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及________的需求。水碳源氮源pHO2二、無菌技術(shù)1．獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵：防止_________。2．消毒和滅菌

消毒滅菌概念使用較為________的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體________或內(nèi)部一部分微生物使用________的理化方法殺死物體內(nèi)外________的微生物，包括____________常用方法________消毒法、巴氏消毒法、________消毒法、紫外線消毒法________滅菌、干熱滅菌、________滅菌適用對象操作空間、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等雜菌污染溫和表面強(qiáng)烈所有芽孢和孢子煮沸化學(xué)藥物濕熱灼燒3.具體操作(1)對實(shí)驗(yàn)操作的________、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和________。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行________。(3)要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與____________接觸。(4)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在____________附近進(jìn)行?？臻g消毒滅菌周圍的物品酒精燈火焰三、微生物的純培養(yǎng)1．純培養(yǎng)：在微生物學(xué)中，將接種于________內(nèi)，在合適條件下形成的含______________的群體稱為培養(yǎng)物。由____________所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得_________的過程就是純培養(yǎng)。2．微生物純培養(yǎng)的步驟：微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基、________、________、分離和培養(yǎng)等步驟。培養(yǎng)基特定種類微生物單一個(gè)體繁殖純培養(yǎng)物滅菌接種3．酵母菌的純培養(yǎng)(1)菌落：分散的微生物在適宜的__________表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的____________。(2)獲得單菌落的方法：____________法和________________法。固體培養(yǎng)基子細(xì)胞群體平板劃線稀釋涂布平板(3)酵母菌的純培養(yǎng)步驟葡萄糖瓊脂濕熱干熱50酒精燈火焰接種環(huán)稀釋分散一個(gè)未接種倒置恒溫培養(yǎng)箱知識應(yīng)用·強(qiáng)化落實(shí)——效果·檢測·定向判斷對錯(cuò)(正確的打“√”，錯(cuò)誤的打“×”)1．液體培養(yǎng)基含有水，而固體培養(yǎng)基不含水。(

)2．獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。(

)3．用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進(jìn)行消毒。(

)×

提示：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基都含有水，它們的區(qū)別為是否含有凝固劑。√×

提示：用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進(jìn)行滅菌。4．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌。(

)5．平板冷凝后應(yīng)將平板倒置，防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。(

)6．轉(zhuǎn)換劃線角度后需要灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線。(

)×

提示：培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿之前要進(jìn)行滅菌?！獭陶n堂互動探究案課程標(biāo)準(zhǔn)1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。2．闡明無菌技術(shù)是在操作過程中保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。3．概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。素養(yǎng)達(dá)成1.根據(jù)微生物的代謝類型分析培養(yǎng)基的組成。(科學(xué)思維)2．討論并掌握無菌技術(shù)的實(shí)驗(yàn)操作方法；討論并掌握微生物的純培養(yǎng)的方法。(科學(xué)探究)設(shè)疑激趣同學(xué)們，右圖中正在進(jìn)行科學(xué)研究的老人是誰？他是法國微生物學(xué)家和化學(xué)家巴斯德！19世紀(jì)中期的法國，葡萄酒釀成后的變酸問題，一直困擾著釀酒業(yè)主。巴斯德研究證明，酒質(zhì)變酸是發(fā)酵液體中的細(xì)菌在搗鬼。他經(jīng)過一次又一次試驗(yàn)，最終發(fā)現(xiàn)把葡萄酒加溫到55攝氏度，既消滅了細(xì)菌，又保持了酒的美味不變，一個(gè)困擾釀酒業(yè)的難題終于解決了。由此人們認(rèn)識到保持培養(yǎng)物純凈的重要性。防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，另一方面需要確保其他微生物無法混入。本節(jié)課我們將通過酵母菌的純培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)。夯基提能·分層突破——互動·探究·智涂學(xué)習(xí)主題一培養(yǎng)基的配制活動1下表是培養(yǎng)兩種細(xì)菌的培養(yǎng)基的配方，據(jù)此回答問題。表一培養(yǎng)基A表二培養(yǎng)基B(牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基)成分KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂含量/g1.42.10.210.01.015.0將上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL成分牛肉膏蛋白胨NaCl含量/g5.010.05.0將上述物質(zhì)溶解后，添加蒸餾水，定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH為7.0～7.2，并加入15～20g瓊脂1.表一中的碳源是________，氮源是________。表二中的氮源是_______________，瓊脂________(填“提供”或“不提供”)營養(yǎng)成分，其作用是作為________。

2．由上表可以看出，雖然培養(yǎng)不同微生物的具體配方不同，但一般都要有________、________、________、________這四類物質(zhì)。

3．不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物生長對________、______________以及________的要求。

4．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種常見的細(xì)菌培養(yǎng)基，其中牛肉膏、蛋白胨能夠提供哪些營養(yǎng)成分？葡萄糖尿素牛肉膏、蛋白胨不提供凝固劑水碳源氮源無機(jī)鹽pH特殊營養(yǎng)物質(zhì)O2提示：牛肉膏、蛋白胨能夠提供碳源、氮源、維生素(生長因子)和無機(jī)鹽?；顒?閱讀教材P9－10，思考回答下列問題：1．能夠利用無機(jī)碳源的微生物的同化作用類型是什么？

2．為什么各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都有水、無機(jī)鹽、碳源和氮源？提示：能利用無機(jī)碳源的微生物的同化作用類型是自養(yǎng)型。提示：培養(yǎng)的微生物不同，對營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，營養(yǎng)基質(zhì)的具體配方就不同。而水、碳源、氮源、無機(jī)鹽是微生物生命活動的主要營養(yǎng)物質(zhì)，因此培養(yǎng)基中一般都有。[易錯(cuò)提醒]有關(guān)培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)的四點(diǎn)提醒(1)培養(yǎng)不同的微生物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)可能不同。①自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基中可不添加有機(jī)碳源，因其可利用CO2等無機(jī)碳源。②異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基中必須添加有機(jī)碳源。(2)對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源、能源。(3)微生物需要補(bǔ)充生長因子，是由于缺乏合成生長因子所需要的酶或合成能力有限。(4)微生物需要量最大的營養(yǎng)物質(zhì)是碳源。能合成含碳有機(jī)物的是自養(yǎng)型，反之則為異養(yǎng)型。1.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：不同的微生物需求不同，根據(jù)培養(yǎng)目的進(jìn)行配制。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。(3)pH要適宜：為維持pH的相對恒定，可在培養(yǎng)基中加入緩沖劑，常用K2HPO4－KH2PO4。2．培養(yǎng)基的成分及功能營養(yǎng)物質(zhì)作用功能主要來源碳源能為微生物的代謝提供碳元素構(gòu)成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸等氮源能為微生物的代謝提供氮元素合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水是生命活動所必需的不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定外界攝入無機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素，包括大量元素細(xì)胞內(nèi)的組成成分；生理調(diào)節(jié)物質(zhì)；某些化能自養(yǎng)菌的能源；酶的激活劑無機(jī)化合物3.幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源

4.培養(yǎng)基的類型分類標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點(diǎn)作用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離與鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動、分類、鑒定液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定1．(學(xué)業(yè)水平一、二)下列關(guān)于微生物營養(yǎng)物的敘述中，正確的是(

)A.凡是碳源都能提供能量B.碳源物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源C.無機(jī)氮源也能提供能量D.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽答案：C解析：無機(jī)物碳源不提供能量，A錯(cuò)誤；同一種物質(zhì)可以既作碳源又作氮源，如牛肉膏，B錯(cuò)誤；自然界中一些微生物如硝化細(xì)菌，可以以無機(jī)氮源合成細(xì)胞物質(zhì)，同時(shí)通過氧化外界無機(jī)氮源獲得生長所需能量，叫做化能合成作用，C正確；無機(jī)物也可提供碳源和氮源，如碳酸鹽和硝酸鹽，D錯(cuò)誤。2．(學(xué)業(yè)水平一、二)關(guān)于培養(yǎng)基的配制，說法不正確的是(

)A.配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例B.合適的培養(yǎng)基可實(shí)現(xiàn)分離、鑒定微生物等不同目的C.不同微生物培養(yǎng)基的pH相同，都在7.0左右D.不同培養(yǎng)基的配方不同，但一般含有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽答案：C解析：配制培養(yǎng)基時(shí)，營養(yǎng)要協(xié)調(diào)，注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度及比例，A正確；培養(yǎng)基通過調(diào)整各種營養(yǎng)物質(zhì)的組成等可實(shí)現(xiàn)分離、鑒定微生物等不同目的，B正確；不同微生物生長所需要的最適pH不同，如細(xì)菌為7.0～8.0，酵母菌為3.8～6.0，C錯(cuò)誤；雖然各種培養(yǎng)基的配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，D正確。3．(學(xué)業(yè)水平三)有關(guān)培養(yǎng)基配制原則的表述正確的是(

)A.任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水以及無機(jī)鹽B.碳源和氮源必須具有一定比例，碳元素的含量最多，其次為氮元素C.有的培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求D.營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好答案：C解析：培養(yǎng)基一般都含有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等營養(yǎng)物質(zhì)，而分離自生固氮菌的培養(yǎng)基中，不需要加入氮源，A錯(cuò)誤；碳源和氮源必須具有一定比例，但碳元素的含量不一定最多，如自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基不需要加入碳源，B錯(cuò)誤；營養(yǎng)物質(zhì)的濃度過高可能會造成微生物滲透失水死亡，D錯(cuò)誤。4．(學(xué)業(yè)水平三，不定項(xiàng)選擇)下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，正確的是(

)A.操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B.將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)倒平板D.待培養(yǎng)基冷卻凝固后將平板倒過來放置答案：BCD解析：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，其順序不能顛倒，A錯(cuò)誤；牛肉膏比較黏稠，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯中加熱，當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙，B正確；待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，開始倒平板，C正確；培養(yǎng)基冷卻凝固后需將平板倒置，D正確。學(xué)習(xí)主題二無菌技術(shù)活動1閱讀教材P10內(nèi)容，思考回答下列問題：1．無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？

2．用于生物消毒的微生物具有什么特點(diǎn)？提示：無菌技術(shù)還能有效避免操作者被微生物感染。提示：用于生物消毒的微生物能產(chǎn)生殺死其他微生物的代謝產(chǎn)物或是寄生性的微生物?；顒?閱讀教材P10－11內(nèi)容，思考回答下列問題：1．消毒和滅菌的原理是什么？

2．消毒和滅菌都能殺死所有的微生物嗎？

3．消毒和滅菌是否適用于所有的生物和物品？

提示：都是使微生物的蛋白質(zhì)變性，借此殺死微生物。提示：滅菌可殺死處理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒僅殺死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。提示：不是，無菌技術(shù)既要考慮效果，又要考慮操作對象的承受能力。例如，活體生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能滅菌。4．選擇以下材料或用具所需的無菌技術(shù)。①吸管②培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基③培養(yǎng)皿④實(shí)驗(yàn)操作者的雙手⑤燒瓶⑥接種針⑦試管⑧接種環(huán)⑨玻璃棒消毒：______________________________________________灼燒滅菌：__________________________________________干熱滅菌：__________________________________________濕熱滅菌：__________________________________________④⑥⑧①③⑤⑦⑨②

5.注射藥液前，常用酒精擦拭注射部位，這是消毒還是滅菌？體積分?jǐn)?shù)為70%和95%的酒精，哪種效果更好？為什么？提示：酒精擦拭屬于消毒。酒精消毒時(shí)，70%的酒精殺菌效果最好。濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，酒精分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌能力減弱。[名師提醒]有關(guān)消毒和滅菌的幾點(diǎn)提醒1．酒精消毒液中酒精濃度對殺菌效果的影響：70%的酒精殺菌效果最好。原因是濃度過高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；濃度過低，殺菌能力減弱。2．無菌技術(shù)措施的選擇原則。(1)考慮效果：滅菌的效果比消毒要好。(2)考慮操作對象的承受能力：接種環(huán)或接種針等金屬用具一般用灼燒滅菌；培養(yǎng)皿等玻璃器皿用干熱滅菌；培養(yǎng)基用濕熱滅菌。操作者雙手一般用酒精擦拭，即化學(xué)消毒。牛奶用巴氏消毒法。1.無菌技術(shù)的重要性防止雜菌污染是獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵。防止外來雜菌污染培養(yǎng)物，離不開無菌技術(shù)；要防止培養(yǎng)物污染人體和環(huán)境，也離不開無菌技術(shù)。2．常用滅菌與消毒方法的比較滅菌和消毒的種類主要方法應(yīng)用范圍滅菌濕熱滅菌100kPa、121℃維持15～30min培養(yǎng)基及多種器材、物品干熱滅菌干熱滅菌箱160～170℃加熱1～2h玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒微生物接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具等，接種過程中的試管口或瓶口等消毒煮沸消毒法100℃煮沸5～6min家庭餐具等生活用品巴氏消毒法63～65℃消毒30min或72～76℃處理15s或80～85℃處理10～15s牛奶、啤酒、果酒和醬油等不宜進(jìn)行高溫滅菌的液體紫外線消毒30W紫外燈照射30min接種室空氣化學(xué)藥物消毒用體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的乙醇、碘酒涂抹，來蘇爾噴灑等皮膚、傷口、動植物組織表面和空氣、手術(shù)器械、塑料或玻璃器皿等1．(學(xué)業(yè)水平一、二)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是(

)A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B．接種純種細(xì)菌C．適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D．防止外來雜菌的入侵答案：D解析：將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌只是無菌技術(shù)的一個(gè)方面，不是無菌技術(shù)的全部；接種純種細(xì)菌是獲得純凈培養(yǎng)物的前提；適宜條件下培養(yǎng)只能提供微生物生長的條件，不能防止雜菌污染；防止外來雜菌的入侵是獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵。2．(學(xué)業(yè)水平一、二)高溫滅菌的原理是(

)A．每種微生物生長的最適溫度是一定的B．微生物對于高溫環(huán)境不適應(yīng)C．高溫破壞了微生物的蛋白質(zhì)等生物大分子，影響其生命活動D．高溫降低了環(huán)境中氧的濃度答案：C解析：高溫滅菌主要是使微生物的蛋白質(zhì)等生物大分子發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的變性。3．(學(xué)業(yè)水平三)關(guān)于滅菌和消毒的不正確的理解是(

)A．滅菌是指殺死環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子B.消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是相同的C．接種環(huán)用灼燒的方法滅菌D．常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌等答案：B解析：消毒是指用溫和的理化方法殺死體表或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，滅菌則是用強(qiáng)烈的理化因素殺死體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。4．(學(xué)業(yè)水平三，不定項(xiàng)選擇)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌和消毒。下列關(guān)于滅菌和消毒的敘述，正確的是(

)A．滅菌和消毒均可以殺死環(huán)境中的一切微生物，包括芽孢和孢子B．無菌操作時(shí)，對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣物和手進(jìn)行滅菌C．灼燒法滅菌的對象是金屬器具，也可以是玻璃器具D．消毒和滅菌的原理都是使微生物的核酸或蛋白質(zhì)變性答案：CD解析：滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子，消毒只能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物，不能殺死芽孢和孢子，A錯(cuò)誤；無菌操作時(shí)，對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣物和手進(jìn)行消毒，B錯(cuò)誤；灼燒法滅菌的對象可以是金屬器具和玻璃器具，C正確；消毒和滅菌的原理相同，都是使微生物的核酸或蛋白質(zhì)變性，D正確。學(xué)習(xí)主題三微生物的純培養(yǎng)活動1閱讀教材P11～13內(nèi)容，結(jié)合下圖，回答問題。1．為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

2．從防止雜菌污染的角度思考，培養(yǎng)基冷卻凝固后將培養(yǎng)皿倒置的原因是什么？

提示：對瓶口進(jìn)行灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。提示：培養(yǎng)基冷卻凝固后，培養(yǎng)皿的皿蓋上會凝結(jié)水珠，將培養(yǎng)皿倒置，可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。3．采用平板劃線法接種菌種時(shí)，哪些操作可防止雜菌污染？

4．在做第二次劃線以及其后的操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

提示：(1)接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。(2)接種環(huán)蘸取菌液前后，要將試管口通過火焰。(3)劃線時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，將蘸有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃線后及時(shí)蓋上皿蓋。(4)每次劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，冷卻后再進(jìn)行下一次劃線。(5)整個(gè)接種過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行。提示：劃線末端含有的菌體數(shù)目較少，每次從上一次劃線的末端開始劃線能夠使菌體的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分散成單個(gè)的菌體。5．接種操作時(shí)每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環(huán)或接種針，其目的分別是什么？

提示：劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結(jié)束后殘留的菌種。劃線結(jié)束后灼燒，能及時(shí)殺死接種環(huán)或接種針上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者?；顒?思考回答下列問題：1．培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？

2．在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。提示：不能用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生而導(dǎo)致污染。3．接種結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。如果有菌落生長，說明了什么？提示：作對照培養(yǎng)基被雜菌污染[方法技巧]單細(xì)胞菌落的獲得(1)利用平板劃線法接種時(shí)，單細(xì)胞菌落從后劃線的區(qū)域挑取。(2)利用稀釋涂布平板法接種時(shí)，只有合適的稀釋度才能得到單細(xì)胞菌落。

[歸納提升]倒平板操作的注意事項(xiàng)(1)培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻至50℃左右時(shí)才能倒平板。溫度過高，培養(yǎng)基凝固后皿蓋上冷凝水過多，落入培養(yǎng)基，造成污染；溫度過低，培養(yǎng)基又會凝固。(2)將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。(3)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板應(yīng)棄用，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。(4)整個(gè)操作過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。1.平板劃線法平板劃線操作及培養(yǎng)結(jié)果：接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。平板劃線示意圖(A)及培養(yǎng)后菌落分布示意圖(B)如下圖所示。2．稀釋涂布平板法(1)主要操作環(huán)節(jié)：系列稀釋和涂布平板。(2)系列稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示：3．平板劃線法與稀釋涂布平板法的注意事項(xiàng)(1)平板劃線法：①接種環(huán)的灼燒：a．第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物。b．每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端。c．劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。②灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種。③劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。④劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大劃破培養(yǎng)基。(2)稀釋涂布平板法：①稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。②涂布平板時(shí)：a．涂布器浸在體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。b．不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。c．酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不接觸任何物體。4．兩種純化細(xì)菌方法的比較項(xiàng)目優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較小，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延1．(學(xué)業(yè)水平一、二)如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?→2→3→4→5，下列說法不正確的是(

)A．操作前要將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒B．劃線操作須在酒精燈火焰附近進(jìn)行C．只有在5區(qū)才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌答案：C解析：在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法是在酒精燈火焰上灼燒；接種時(shí)劃線操作是在酒精燈火焰附近進(jìn)行；在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落；每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死接種環(huán)上原有的微生物(第一次劃線前)和上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)以防止污染環(huán)境和感染操作者。2．(學(xué)業(yè)水平二)某同學(xué)運(yùn)用劃線法純化酵母菌。下列敘述正確的是(

)A．滅菌時(shí)，高壓蒸汽滅菌鍋壓力達(dá)到1kg/cm2后，需持續(xù)15minB．制平板時(shí)，需將培養(yǎng)基均勻地倒在培養(yǎng)皿的整個(gè)底部C．接種時(shí)，每次劃線前，接種環(huán)均需蘸一次菌液D．培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置于4℃的冰箱中答案：A解析：滅菌時(shí)，高壓蒸汽滅菌鍋壓力達(dá)到1kg/cm2后，需持續(xù)15min，A正確；制平板時(shí)，將培養(yǎng)基倒在培養(yǎng)皿中，并輕輕搖勻即可，B錯(cuò)誤；接種時(shí)，每次劃線前，接種環(huán)均需灼燒滅菌，C錯(cuò)誤；培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，D錯(cuò)誤。3．(學(xué)業(yè)水平三、四)下圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯(cuò)誤的是(

)A．①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行B．步驟①中待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋C．步驟③中，每次劃線前后都需對接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理D．劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)答案：B解析：由圖可知，①是倒平板，②是用接種環(huán)蘸取菌液，③是進(jìn)行平板劃線，④是培養(yǎng)。①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止被雜菌污染，A正確；倒完平板后應(yīng)立即蓋上培養(yǎng)皿，冷卻后將平板倒過來放置，B錯(cuò)誤；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落，C正確；劃線接種結(jié)束后，將平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，D正確。4．(學(xué)業(yè)水平三、四，不定項(xiàng)選擇)將沒有吃完的西瓜，蓋上保鮮膜后放入冰箱，是很多人日常保存西瓜的辦法。有這樣一種說法：蓋上保鮮膜保存的西瓜中細(xì)菌種類和數(shù)目反而比沒用保鮮膜的多。某生物研究小組針對上述說法進(jìn)行探究，他們用蓋上保鮮膜保存了兩天的西瓜表面的瓜瓤制備浸出液，研究細(xì)菌的種類和數(shù)量。下列說法正確的是(

)A．應(yīng)該采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種B．瓜瓤浸出液是液體，因此培養(yǎng)時(shí)平板不用倒置C．僅需要設(shè)置盛有培養(yǎng)基的空白平板作對照D．可通過平板上菌落的特征初步判斷細(xì)菌的種類答案：AD解析：為了達(dá)到研究細(xì)菌的種類和數(shù)量，需要采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種才能計(jì)數(shù)，A正確；接種時(shí)需要將瓜瓤浸出液接種在固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)時(shí)平板需要倒置，這樣可以防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染，還可防止培養(yǎng)基表面的水分揮發(fā)，B錯(cuò)誤；該實(shí)驗(yàn)是比較兩種不同處理方式下西瓜上菌體的種類和數(shù)量，所以除需要設(shè)置盛有培養(yǎng)基的空白平板作對照，還需要設(shè)置不蓋保鮮膜同樣條件保存兩天的西瓜表面的瓜瓤制備浸出液后接種的平板做對照，C錯(cuò)誤；不同菌體的菌落特征不同，所以可通過平板上菌落的特征初步判斷細(xì)菌的種類，D正確。強(qiáng)化落實(shí)·學(xué)業(yè)達(dá)標(biāo)——?dú)w納·提升·素養(yǎng)網(wǎng)絡(luò)建構(gòu)主干落實(shí)1.各種培養(yǎng)基都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。2．獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。3．消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。4．滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。5．由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。6．菌落是分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。高效課堂·實(shí)踐運(yùn)用——隨堂·鞏固·達(dá)標(biāo)1.不同培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含(

)A．碳源、磷酸鹽和維生素B．氮源和維生素C．水、碳源、氮源和無機(jī)鹽D．碳元素、氧元素、氫元素、氮元素答案：C解析：培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，此外還應(yīng)考慮pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)及O2等條件。2．采用干熱滅菌、灼燒滅菌、濕熱滅菌、紫外線照射等幾種方法，可分別殺死哪些部位的雜菌(

)A．接種環(huán)、吸管、培養(yǎng)基、接種室B．吸管、接種環(huán)、培養(yǎng)基、接種箱C．培養(yǎng)基、吸管、接種環(huán)、接種箱D．培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基、雙手答案：B解析：干熱滅菌是將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下加熱2～3h，適用于耐高溫且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等；灼燒滅菌是利用酒精燈火焰的充分燃燒層滅菌，如接種針、接種環(huán)等；濕熱滅菌是用高壓蒸汽滅菌鍋，一般在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15～30min，主要用于培養(yǎng)基滅菌；紫外線照射適用于物體表面滅菌和空氣滅菌，如接種室、接種箱、超凈工作臺等，使用前用紫外線照射約30min。3．下列有關(guān)平板劃線操作的描述，錯(cuò)誤的是(

)A．將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅B．接種環(huán)在平板上劃線的位置是隨機(jī)的C．在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰D．最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連答案：B解析：接種環(huán)在平板上劃線的位置并不是隨機(jī)的：將蘸有菌種的接種環(huán)伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線后應(yīng)蓋上皿蓋，并灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。4．下列關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是(

)A．培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒C．接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)基被污染D．菌種分離和菌落計(jì)數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基答案：A解析：接種室、接種箱等常用紫外線消毒法處理，接種環(huán)等常用灼燒滅菌法處理，吸管、培養(yǎng)皿等常用干熱滅菌法處理，培養(yǎng)基及多種器材用高壓蒸汽滅菌法處理，A錯(cuò)誤；為了防止雜菌污染，每次接種前后，接種環(huán)都要進(jìn)行灼燒滅菌，B正確；接種后，培養(yǎng)皿需要倒置，以防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染，C正確；分離菌種可以用平板劃線法或稀釋涂布平板法，后者還可以用于微生物的計(jì)數(shù)，所用培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，D正確。5．廣泛用于牛奶、奶酪、啤酒等產(chǎn)品的消毒方法是(

)A．濕熱滅菌

B．巴氏消毒法C．酒精消毒

D．火焰灼燒答案：B解析：濕熱滅菌不屬于消毒，A錯(cuò)誤；對牛奶、啤酒等進(jìn)行消毒宜采用巴氏消毒法，原理是高溫滅菌，既能達(dá)到消毒的目的，又不會過多的破壞營養(yǎng)物質(zhì)，B正確；牛奶、奶酪、啤酒等產(chǎn)品如果采用酒精消毒，達(dá)不到消毒的目的，并且會導(dǎo)致酒精殘留，C錯(cuò)誤；火焰灼燒屬于滅菌，不屬于消毒，D錯(cuò)誤。6．下表是培養(yǎng)某微生物的培養(yǎng)基的配方，請回答下列問題：(1)培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、________和無機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是______________。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對培養(yǎng)基進(jìn)行________處理。(2)在配制培養(yǎng)基時(shí)，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。組分牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5g10g5g20g1000mL氮源牛肉膏和蛋白胨滅菌溫度酸堿度解析：(1)培養(yǎng)基中都應(yīng)含有水、無機(jī)鹽、碳源和氮源。培養(yǎng)基配制完成后要調(diào)pH和滅菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作為有機(jī)碳源。(2)配制培養(yǎng)基時(shí)，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需進(jìn)行清洗和________；空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)________，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。(4)分離純化微生物最常使用的接種方法是____________和_____