DB13-T1384-8-2011飼料中氯羥吡啶的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS65.120

B46

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T1384.8—2011

飼料中氯羥吡啶的測定

液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法

Determinationofcopidolinfeed

LC-MS/MSmethod

DB13/T1384.8—2011

飼料中氯羥吡啶的測定

液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中氯羥吡啶的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中氯羥吡啶的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為20μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T6682－1992，neqISO3696：1987〉

3原理

試樣中氯羥吡啶經(jīng)甲醇提取，用中性氧化鋁柱凈化分離，濃縮后用甲醇溶解，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

定性定量測定。.

4試劑和溶液

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1甲醇。

4.2中性氧化鋁萃取柱：1g，6mL。

4.3氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)品：純度均應(yīng)大于95%。

4.4氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別準(zhǔn)確稱取己知純度的氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)品10mg（精確至0.000lg），

置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇超聲使之完全溶解，定容至刻度，搖勻。該溶液中氯羥吡啶濃度為

100g/mL，于4℃保存可使用6個(gè)月。

4.5氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇

定容至刻度，該溶液中氯羥吡啶濃度均為10g/mL，于4℃保存可使用1個(gè)月。

4.6正己烷。

4.7氨水。

5儀器和設(shè)備

除實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備外，還包括以下儀器和設(shè)備。

5.1液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。

5.2電子天平：感量為0.lmg和1mg。

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5.3旋渦混勻器。

5.4濾膜：孔徑0.45μm，有機(jī)相。

5.5高速離心機(jī)。

5.6中性氧化鋁固相萃取柱：500mg，6mL，或相當(dāng)者。

6試樣的制備

6.1提取

準(zhǔn)確稱取樣品5g（精確至0.00lg）于50mL離心管中，加入甲醇10mL，旋渦混合，于振蕩器振蕩

30min，5000r/min離心5min，取上清液再加入10mL水、500μL氨水、10mL正己烷，渦旋30s，8000

r/min離心5min，取下層清液待凈化。

6.2凈化

將上清液移入中性氧化鋁柱中，用20mL甲醇洗脫，將過柱液及洗脫液全部接收于50mL離心管

中，氮吹至干，用lmL甲醇溶解殘?jiān)?，過0.45μm微孔濾膜，待測。

7分析步驟

7.1測定

7.1.1液相色譜條件

色譜柱：C18，5μm，150mm×2.lmm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者。

水（A）+甲醇（B）。

流速：0.25mL/min。

梯度：0～4.0min10％～90％B；4.0min～8.0min90％B，8.1min～10.0min10％B。

柱溫：25℃。

進(jìn)樣量：25μL。

7.1.2串聯(lián)質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），正離子監(jiān)測。

掃描方式：選擇離子檢測（MRM）。

霧化氣、鞘氣為高純氮?dú)?，碰撞氣為高純氦氣?/p>

電噴霧電壓、碰撞電壓等自動(dòng)優(yōu)化至最佳值。

定性離子對(m/z)：192.2/174.2，192.2/101.0。

定量離子對定量離子對(m/z)：192.2/101.0。

7.2定性、定量

氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜設(shè)定條件下分別進(jìn)樣，以樣品峰面積為縱坐標(biāo)，工作

溶液濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)，繪制6點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中

泰樂菌素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖參見附錄A。

7.3空白試驗(yàn)

2

DB13/T1384.8—2011

除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。

8結(jié)果計(jì)算

結(jié)果用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(1)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值：

V

X=c?.......................................(1)

m

式中：

X——試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）。

c——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。

V——樣品溶液定容體積，單位為毫升(mL)。

m——樣品溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

9重復(fù)性

同一分析者對同一試樣同時(shí)兩次平行測定結(jié)果的相對偏差不大于15％。

3

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AA

附錄A

（資料性附錄）

氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖

表A.1氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖

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4

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、

北京出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、楊立學(xué)、李揮、張宏、叢斌、盧曉宇、呂品、賈茜、李強(qiáng)、李志平、馬

春玲、米振杰、沈磊、高振同、武英利。

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DB13/T1384.8—2011

AA

附錄A

（資料性附錄）

氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖

表A.1氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖

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