《利用鹵蟲無節(jié)幼蟲對納米塑料進(jìn)行水生毒性評估技術(shù)指南》征求意見稿

1T/CIXXX—2024利用鹵蟲無節(jié)幼蟲對納米塑料進(jìn)行水生毒性評估技術(shù)指南本文件規(guī)定了一種測試方法，旨在最大限度地提高測試的重復(fù)性和可靠性，以確定納米塑料是否對水生生物有毒，特別是廣鹽性節(jié)肢動物鹵蟲（Artemiasp.）的無節(jié)幼蟲。本文件旨在供有能力孵化和培養(yǎng)鹵蟲并使用該類生物模型評估納米塑料毒性的生態(tài)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用。該文件使用模擬環(huán)境（人工海水）中的節(jié)肢動物鹵蟲Artemiaspp.的無節(jié)幼蟲來評估納米塑料的毒性影響。本文件適用于由納米顆粒、納米粉末、納米纖維、納米管、納米線等納米物體組成的納米塑料，以及這些納米塑料的聚集體和聚集體。本文件在制定過程中主要參考了GB/T1032-2013《納米技術(shù)納米材料風(fēng)險(xiǎn)評估》、ISO15088《Waterquality-Determinationoftheacutetoxicityofwastewatertozebrafisheggs(Daniorerio)》、ISO/TS11931《Nanotechnologies-Nanoscalecalciumcarbonateinpowderform-Characteristicsandmeasurement》、ISO/TR13014《Nanotechnologies-Guidanceonphysico-chemicalcharacterizationofengineerednanoscalematerialsfortoxicologicassessment》、ISO/TS16195《Nanotechnologies-Guidancefordevelopingrepresentativetestmaterialsconsistingolnano-objectsindrypowderform》、ISO/TS17200《Nanotechnology-Nanoparticlesinpowderform-Characteristicsandmeasurements》、IECTS62844:2016（E）《Guidelinesforqualityandriskassessmentfornano-enabledelectrotechnicalproducts》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合目前我國對新污染物納米塑料污染治理的需求，制定本文件。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T1032-2013納米技術(shù)納米材料風(fēng)險(xiǎn)評估ISO15088Waterquality-Determinationoftheacutetoxicityofwastewatertozebrafisheggs(Daniorerio)ISO26824Particlecharacterizationofparticulatesystems-Vocabulary2T/CIXXX—2024ISO10993-12Biologicalevaluationofmedicaldevices-Part12:SamplepreparationandreferencematerialsISO/TR13014Nanotechnologies-Guidanceonphysico-chemicalcharacterizationofengineerednanoscalematerialsfortoxicologicassessmentISO/TS11931Nanotechnologies-Nanoscalecalciumcarbonateinpowderform-CharacteristicsandmeasurementISO/TS12805Nanotechnologies-Materialsspecifications-Guidanceonspecifyingnano-obiectsISO/TS16195Nanotechnologies-Guidancefordevelopingrepresentativetestmaterialsconsistingolnano-objectsindrypowderformISO/TS17200Nanotechnology-Nanoparticlesinpowderform-CharacteristicsandmeasurementsISO/TS80004-1Nanotechnologies-Vocabulary-Part1:CoretermsISO/TS80004-2Nanotechnologies-Vocabulary-Part2:Nano-objectsISO/TS80004-4Nanotechnologies-Vocabulary-Part4:NanostructuredmaterialsIECTS62844:2016（E）Guidelinesforqualityandriskassessmentfornano-enabledelectrotechnicalproducts3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。在本文件中，ISO10993-12中給出的術(shù)語和定義，ISO/TS16195、ISO/TS17200、ISO/TS26824、ISO/TS80004-1、ISO/TS80004-2和ISO/TS80004-4以及以下標(biāo)準(zhǔn)均適用。ISO和IEC在以下地址維護(hù)用于標(biāo)準(zhǔn)化的術(shù)語數(shù)據(jù)庫：—IEC可在以下網(wǎng)址獲取/—ISO可在以下網(wǎng)址獲取/obp3.1材料及應(yīng)用描述materialandApplicationDescription納米塑料由顆?；蛭锢矸至?shí)體（團(tuán)塊或聚集體等）構(gòu)成。物理分立實(shí)體在初級和非團(tuán)聚狀態(tài)時(shí)，其一維（如納米片）、二維（如納米纖維）或三維（如納米顆粒）外部維度不大于100nm。本過程主要關(guān)注的是用于產(chǎn)業(yè)、化學(xué)品、制造和客戶應(yīng)用的人造納米塑料，以及納米塑料在其生命周期中與釋放相關(guān)的潛在風(fēng)險(xiǎn)。3T/CIXXX—20243.1.1團(tuán)塊agglomerate團(tuán)聚體是由弱或中等強(qiáng)度結(jié)合的粒子組成的集合體，其中團(tuán)聚體的外表面單個(gè)組分的面積與組成團(tuán)聚體的粒子表面積之和相似。注1：團(tuán)聚體之間的結(jié)合力是較弱的力，例如范德華力，或簡單的物理糾纏。注2：團(tuán)聚體也被稱為次生粒子，而原始來源的粒子被稱為原生粒子[來源：ISO/TS800004-2：2015，3.4部分]3.1.2聚集體aggregate聚集體是由強(qiáng)結(jié)合或融合的粒子組成的粒子，其外部表面積明顯小于單個(gè)組分表面積之和。注1：使聚集體保持結(jié)合在一起的力是強(qiáng)大的力，例如共價(jià)鍵或離子鍵的糾纏，或者是通過燒結(jié)或復(fù)雜物理過程結(jié)合的前置原生粒子。注2：聚集體也被稱為次生粒子，而原始來源的粒子被稱為原生粒子。[來源：ISO/TS80004-2：2015，3.5部分]3.2孵化過程hatchingProcess在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件下，將鹵蟲卵（囊胚）轉(zhuǎn)化為幼體的過程。3.2.1孵化容器hatchingVessel孵化容器適用于鹵蟲（Artemiasp.）囊胚的孵化，以便于收獲。注1：孵化容器的錐形容器部分應(yīng)為透明或半透明，以確保良好的光線透射。注2：孵化容器包括如圖1所示的玻璃等材質(zhì)的錐形容器或“V”形底部容器。注3：孵化容器底部應(yīng)持續(xù)通氣，以保持囊胚懸浮并提供足夠的氧氣供囊胚孵化。圖1鹵蟲孵化容器示意圖4T/CIXXX—20243.2.2試驗(yàn)容器testVessel容器適用于鹵蟲（Artemiasp.）的培養(yǎng)。注1：試驗(yàn)容器和所有與試驗(yàn)溶液接觸的設(shè)備，應(yīng)完全由玻璃或其他化學(xué)惰性材料制成。注2：試驗(yàn)容器包括燒瓶或燒杯等。3.2.3模式生物modelOrganism選用的水生甲殼動物屬的廣鹽性物種鹵蟲（Artemiasp.）為模式生物。3.2.4幼體nauplius新孵化的鹵蟲（Artemiasp.）幼體。注1：鹵蟲（Artemiasp.）的幼體（Nauplius）在初次孵化時(shí)的長度小于0.4mm。3.2.5囊胚cyst處于休眠狀態(tài)的鹵蟲（Artemiasp.）卵。注1：囊胚可以長期儲存，并按需孵化。3.3測試所用的納米塑料nanoplasticsUsedforTesting測試納米塑料是指經(jīng)過制造的納米材料，以分散體的形式，用于接受生物學(xué)或化學(xué)測試或評估。3.3.1納米粒徑nanoscale微塑料的粒徑長度范圍為1nm至100nm。3.3.2納米物體nano-object具有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)納米級外部尺寸的離散材料塊。納米顆粒nanoparticle納米顆粒是指所有外部尺寸都處于納米尺度的納米物體，其中納米物體的最長軸和最短軸的長度差異不顯著。注1：如果尺寸差異顯著（通常超過三倍），則可能更傾向于使用諸如“納米纖維”或“納米片”等術(shù)語，而不是“納米顆?！?。[來源：ISO/TS80004-2：2015，4.4部分]納米纖維nanofibre納米纖維是指在兩個(gè)維度上處于納米尺度，且第三個(gè)維度上長度有顯著差異的納米物體。5T/CIXXX—2024注1：最大的外部尺寸不一定處于納米尺度。注2：也可以使用“納米纖絲”和“納米細(xì)絲”等術(shù)語。[來源：ISO/TS80004-2：2015，4.5部分]納米片nanoplate納米板是指其中一個(gè)外部維度尺寸處于納米尺度，而另外兩個(gè)維度尺寸具有顯著差異的納米物體。注1：較大的外部尺寸不一定處于納米尺度。[來源：ISO/TS80004-2：2015，4.6部分]3.4對照control對照是指為了排除試驗(yàn)系統(tǒng)誤差的影響，在試驗(yàn)組之外安排的一個(gè)或多個(gè)對照組。這些對照組的設(shè)立是為了和試驗(yàn)組進(jìn)行比較，有助于消除誤差、提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，從而更準(zhǔn)確地評估試驗(yàn)因素對結(jié)果的影響。對照試驗(yàn)通常分為空白或陽性對照組等。在隨機(jī)分組后，實(shí)驗(yàn)組接受某種實(shí)驗(yàn)變量處理，而對照組則不接受這種處理，或者接受另一種處理。這樣，試驗(yàn)組和對照組之間的差異就可以歸因于實(shí)驗(yàn)變量，從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具可信度。3.4.1陽性對照positiveControl陽性對照是指經(jīng)過充分研究的材料或物質(zhì)，當(dāng)使用特定的測試方法對其進(jìn)行評估時(shí)，能證明測試系統(tǒng)適合于在測試系統(tǒng)中產(chǎn)生可重復(fù)、適當(dāng)?shù)年栃皂憫?yīng)。注1：在鹵蟲毒性測試中，建議使用重鉻酸鉀（K2Cr2O7）作為陽性對照的處理。3.4.2空白對照controlSolution不含待測樣品的試驗(yàn)介質(zhì)。3.5毒性相關(guān)參數(shù)toxicityRelatedParameters在納米塑料對鹵蟲產(chǎn)生的主要毒性作用中，主要包括死亡率/活動能力喪失、發(fā)育/生長改變、生化指標(biāo)變化、基因表達(dá)改變以及腸道損傷。除死亡率/活動能力喪失這一指標(biāo)外，其他效應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化代表性較弱，故本標(biāo)準(zhǔn)僅選擇死亡率/活動能力喪失作為鹵蟲水生毒性指標(biāo)。3.5.1活動能力喪失immobilization活動能力喪失指的是在試驗(yàn)溶液和對照溶液經(jīng)過輕微攪動后的15秒內(nèi)，鹵蟲無節(jié)幼體6T/CIXXX—2024處于無法游泳的狀態(tài)，即使在這種情況下，鹵蟲幼體的附肢仍然可以移動。[來源：IS06341：2012，3.3部分，已修改——將“生物體”替換為“鹵蟲幼體”，將“觸角”替換為“附肢”]3.5.2EC50EC50是指符合測試標(biāo)準(zhǔn)的濃度，在該濃度下對50%的生物體產(chǎn)生影響。[來源：ISO15088:2007，3.3部分]4試驗(yàn)材料4.1測試生物體testorganism可以使用不同種類的鹵蟲（Artemiasp.但鹵蟲（A.salina）是首選的測試物種。鹵蟲卵囊的商業(yè)來源很多。鹵蟲幼體（新生鹵蟲）應(yīng)通過在實(shí)驗(yàn)室孵化高質(zhì)量的卵囊來生產(chǎn)。4.2化學(xué)品Chemicals4.2.1人工海水。4.2.2重鉻酸鉀（K2Cr2O7）。4.2.3盧戈?duì)柸芤海ūR戈?duì)柕猓?.2.4次氯酸鈉（5.25%NaOCl）。4.2.5氫氧化鈉溶液（400g/LNaOH）。5試驗(yàn)設(shè)備5.1適當(dāng)?shù)臏囟瓤刂圃O(shè)備。5.2顯微鏡。5.3雙目立體顯微鏡（體視鏡）。5.4離心機(jī)。5.5空氣泵。5.6移液管。5.7實(shí)驗(yàn)室天平。5.8實(shí)驗(yàn)室水凈化系統(tǒng)。5.9實(shí)驗(yàn)室烘箱。5.10實(shí)驗(yàn)室高壓滅菌器。5.11離心機(jī)。7T/CIXXX—20245.12超聲波系統(tǒng)。5.13熱板攪拌器。5.14溶氧量計(jì)。5.15溫度計(jì)。5.16pH計(jì)。5.17鹽度計(jì)（鹽度測量儀）。5.18多參數(shù)光度計(jì)。5.19光源。5.20用于控制光照條件和測量光強(qiáng)度的裝置（照度計(jì)）。5.21用于測定總有機(jī)碳的設(shè)備。5.22用于測定化學(xué)需氧量（COD）的設(shè)備6納米塑料分散體的制備與表征6.1分散體的準(zhǔn)備dispersionPreparation大多數(shù)納米材料在水中容易團(tuán)聚/聚集，在鹽水中這種情況可能會加劇。在使用鹵蟲（Artemiasp.）評估納米塑料的毒性之前，應(yīng)將納米塑料在人工海水中充分分散。納米塑料分散體的制備過程通過標(biāo)準(zhǔn)操作程序，用20‰人工海水配制成相應(yīng)濃度，并用適量小蘇打（NaHCO3）調(diào)節(jié)pH至8.5左右。納米塑料在人工海水懸浮液中的分散可以通過攪拌、超聲處理或通過功能化基團(tuán)以及使用生物相容性分散劑試劑來實(shí)現(xiàn)。通過攪拌、超聲波或官能團(tuán)以及使用生物相容性分散劑試劑，可以實(shí)現(xiàn)原液懸浮液中MNMs的分散。超聲處理應(yīng)以不產(chǎn)生其他新材料的方式進(jìn)行，并應(yīng)評估超聲處理的效果。應(yīng)避免使用會對鹵蟲產(chǎn)生有害影響的化學(xué)品。當(dāng)使用此類載體時(shí)，空白對照應(yīng)暴露于與測試納米塑料懸浮液中使用相同濃度的載體中。6.2分散體的表征dispersionCharacterization分散體應(yīng)通過動態(tài)光散射（DLS）進(jìn)行表征。納米塑料的分散狀態(tài)應(yīng)按照IS022412或其他適當(dāng)方法（如IS020998-1中所述的超聲波衰減光譜法）進(jìn)行描述。6.3原液懸浮液中分散體的穩(wěn)定性dispersionstabilityinStockSuspension納米塑料分散體的大小分布及其在一段時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定性應(yīng)得到表征。原液懸浮液中納米粒子的尺寸分布、穩(wěn)定性及濃度應(yīng)在相關(guān)間隔內(nèi)進(jìn)行評估。6.4人工海水中分散體的穩(wěn)定性dispersionStabilityinArtificialSeawater8T/CIXXX—2024在實(shí)驗(yàn)過程中（6h、24h和48h），應(yīng)驗(yàn)證人工海水中分散體的穩(wěn)定性以及納米塑料的實(shí)際濃度。由于海水可能會對測試納米材料的物理化學(xué)性質(zhì)產(chǎn)生影響，因此建議對測試納米塑料進(jìn)行進(jìn)一步的表征，并評估聚集/團(tuán)聚的程度（或粒徑分布的變化）。6.5毒性試驗(yàn)暴露介質(zhì)的制備preparationofExposureMediaforToxicityTests所有的暴露介質(zhì)都是從納米塑料原料懸浮液（例如1000mg/L）中新鮮制備的。應(yīng)將適當(dāng)體積的原料懸浮液直接添加到滅菌的人工海水中，以在暴露介質(zhì)中達(dá)到相關(guān)濃度的納米塑料。盡管鹵蟲在孵化和生長過程中不需要無菌條件，但仍應(yīng)盡量減少單細(xì)胞藻類和細(xì)菌污染的發(fā)生。無菌過濾是在不改變?nèi)斯ずＫ瘜W(xué)成分的情況下對人工海水進(jìn)行消毒的最佳方法，因此建議使用可以使用0.1μm過濾器來獲得無菌人工海水。7孵化步驟7.1概述general用淡氯溶液徹底清洗孵化器和培養(yǎng)容器，沖洗，并自然風(fēng)干。避免使用肥皂，因?yàn)樗鼤粝螺p微殘留物，在孵化過程中通氣時(shí)會產(chǎn)生泡沫，并使囊胚留在水面上。盡管材料沒有必要完全無菌，但仍應(yīng)盡量減少單細(xì)胞藻類和細(xì)菌污染的發(fā)生。7.2稀釋水dilutionWater用于孵化和所有毒性測試的稀釋水應(yīng)為鹽度為20‰的標(biāo)準(zhǔn)人工海水。經(jīng)過24小時(shí)的曝氣和穩(wěn)定后，稀釋水的pH值應(yīng)為8.0±0.5，氧含量應(yīng)至少達(dá)到90%的飽和度。如有必要，應(yīng)使用濃鹽酸或適量小蘇打（NaHCO3）調(diào)節(jié)pH值。在使用鹽水之前，應(yīng)通過0.1μm過濾器進(jìn)行過濾。7.3鹵蟲卵（囊胚）的儲存storageofArtemiasp.Cysts密封的鹵蟲卵（囊胚）可在室溫下保存數(shù)年，但一旦打開，應(yīng)在兩個(gè)月內(nèi)使用完畢。每次使用后，應(yīng)封閉并儲存在冰箱中。如果同一封閉體積中的鹵蟲卵（囊胚）在兩個(gè)月內(nèi)無法用完，則剩余部分應(yīng)放置在緊密封閉的容器中冷凍，直到需要時(shí)再取出。7.4鹵蟲卵（囊胚）的消毒disinfectionofArtemiasp.Cysts7.4.1準(zhǔn)備200ppm次氯酸鈉（NaOCl）溶液。7.4.2以每升50g鹵蟲卵（囊胚）的密度浸泡30分鐘。7.4.3在125μm的篩網(wǎng)上用蒸餾水徹底沖洗鹵蟲卵（囊胚）三次。7.4.4鹵蟲卵（囊胚）已準(zhǔn)備好進(jìn)行孵化。7.5鹵蟲囊（囊胚）的孵化hatchingMethodofArtemiasp.Cysts9T/CIXXX—20247.5.1使用透明或半透明（最好是無色）孵化容器。7.5.2通過開放式通氣管道將空氣向下供應(yīng)至容器錐形部分的頂端（圖1）。7.5.3向容器中加入1000mL人工海水。7.5.4將溫度調(diào)節(jié)在27°C~29°C之間。7.5.5通過加入適量的濃鹽酸或適量小蘇打（NaHCO3），將pH值調(diào)節(jié)在8左右。7.5.6在水面上施加至少1000lux的照明。7.5.7以2克/升的密度孵化已消毒的鹵蟲卵（囊胚）。7.5.8孵化24h后，獲得鹵蟲的無節(jié)幼蟲。注：孵化時(shí)間隨孵化溫度和所用鹵蟲（Artemiasp.）的地理品系7.6鹵蟲無節(jié)幼體的收集harvestingofArtemiasp.Nauplii7.6.1關(guān)閉通氣5至10分鐘，已孵化出無節(jié)幼體的囊殼會浮起并可以從表面移除，而無節(jié)幼體和未孵化的鹵蟲卵（囊胚）會集中在底部。7.6.2由于無節(jié)幼體具有正趨光性，可以通過遮蔽孵化容器上部并將光源聚焦在底部透明錐形部分來提高其濃度。7.6.3通過使用細(xì)網(wǎng)篩（<150μm）在過濾器上虹吸收集濃縮的無節(jié)幼體，細(xì)網(wǎng)篩應(yīng)始終浸沒在水中，以防止對無節(jié)幼體造成物理損傷。7.6.4用人工海水徹底沖洗收集的無節(jié)幼體，以去除可能的污染物和孵化代謝產(chǎn)物，如甘油7.6.5每次新孵化都要準(zhǔn)備新鮮的海水。7.7孵化率的計(jì)算calculationofHatchingPercentage7.7.1孵化率是指在標(biāo)準(zhǔn)孵化條件下，從100個(gè)健康鹵蟲卵（囊胚）中能夠產(chǎn)生的無節(jié)幼體的數(shù)量。7.7.224h后，從每個(gè)培養(yǎng)箱中取出6個(gè)250μL的子樣本，用移液管將每個(gè)子樣本移到一個(gè)小瓶中，并通過加入幾滴Lugol溶液（含有2克碘化鉀KI、1克碘I2和100克水H2O的水溶液）固定樣本。7.7.3使用立體顯微鏡，計(jì)數(shù)每個(gè)子樣本中孵化的無節(jié)幼體的數(shù)量，并計(jì)算平均數(shù)量（N）。同時(shí)，計(jì)算每個(gè)樣本中處于傘形階段的胚胎數(shù)量，并計(jì)算平均值（U）。7.7.4通過向每個(gè)小瓶中加入一滴氫氧化鈉溶液和五滴3%-6%次氯酸鈉溶液，將未孵化的鹵蟲卵（囊胚）脫殼并溶解空的鹵蟲卵（囊胚）。T/CIXXX—20247.7.6計(jì)算每個(gè)子樣本的孵化百分比（H%）：H%=（N×100）÷（N+U+E）計(jì)算六個(gè)重復(fù)的平均值。8納米塑料對鹵蟲無節(jié)幼體的影響effectofNanomaterialonArtemiasp.Nauplii8.1試驗(yàn)組和對照組testGroupsandControls8.1.1測試容器內(nèi)填充適當(dāng)體積的人工海水和測試樣品的懸浮液。然后將鹵蟲無節(jié)幼體放入測試容器中。每個(gè)試驗(yàn)濃度和對照組應(yīng)使用至少10個(gè)鹵蟲無節(jié)幼體，每組3~5次重復(fù)。8.1.2除處理系列外，設(shè)置陽性對照及空白對照組。8.2試驗(yàn)濃度testConcentrations8.2.1可進(jìn)行范圍測定測試，以確定最終測試的濃度范圍。為此，無節(jié)幼體暴露于一系列間隔較大的測試納米塑料濃度中。每個(gè)測試濃度下至少應(yīng)暴露10個(gè)無節(jié)幼體。8.2.2至少應(yīng)使用五種測試濃度。它們應(yīng)按幾何級數(shù)排列。如果測試的系列少于五個(gè)，且分離因子不超過2，則應(yīng)提供理由。如果導(dǎo)致100%的不動性，則使用這些濃度。測試的最高濃度和最低濃度應(yīng)使得矯正死亡率在0%~100%之間。8.3暴露條件exposureCondition8.3.1水溫應(yīng)在27°C~29°C的范圍內(nèi)，每個(gè)單獨(dú)測試中的水溫變化應(yīng)不超過±1°C。建議使用16小時(shí)光照和8小時(shí)黑暗周期的循環(huán)。完全的黑暗也是可以接受的，特別是對于光敏感的納米塑料。8.3.2在急性毒性測試期間（24h），由于鹵蟲的無節(jié)幼體在剛孵出的24h內(nèi)營養(yǎng)來源于自身的卵黃，為保證試驗(yàn)的均一同質(zhì)性，不建議給鹵蟲無節(jié)幼體喂食；在長期毒性測試期間（14d），每天兩次（間隔12h）投喂小球藻（Chlorella，密度為105cells/mL），每3天換一次水。8.4持續(xù)時(shí)間duration8.4.1在急性毒性測試，試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為24h。8.3.2在長期毒性測試，試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為14d。8.5觀察observations在測試開始后的24h或14d，應(yīng)檢查每個(gè)測試容器中的無節(jié)幼體是否不動或死亡。除了不動性外，還應(yīng)報(bào)告任何異常行為或外觀。8.6分析測量analyticalMeasurements8.6.1至少在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，在對照和最高試驗(yàn)納米塑料濃度下測量溶解氧和pH。在T/CIXXX—2024任何一次測試中，pH值的變化通常不應(yīng)超過1.5個(gè)單位。溫度通常在控制容器或環(huán)境空氣中測量，并應(yīng)在測試期間連續(xù)記錄，或至少在測試開始和結(jié)束時(shí)記錄。8.6.2在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，應(yīng)至少在含有最高和最低試驗(yàn)濃度的容器中測量試驗(yàn)納米塑料的總濃度。結(jié)果應(yīng)以測量的濃度為基礎(chǔ)。8.6.3在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，應(yīng)至少在含有最高和最低試驗(yàn)濃度的試驗(yàn)容器中驗(yàn)證分散體的穩(wěn)定性和納米塑料的尺寸分布。9數(shù)據(jù)分析dataAnalysis9.1數(shù)據(jù)應(yīng)以表格形式進(jìn)行匯總，并顯示每個(gè)處理組和對照組在每個(gè)觀察點(diǎn)的無節(jié)幼體不動或死亡情況。應(yīng)列出使用的無節(jié)幼體數(shù)量和百分比，以及每個(gè)濃度的校正死亡率。數(shù)據(jù)通過適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法（例如概率分析等）進(jìn)行分析，以計(jì)算曲線的斜率和9