試劑使用規(guī)則

試劑使用規(guī)則使用試劑前應(yīng)該仔細辨認標簽，看清名稱及濃度，是否為本實驗所需。取出試劑后，立即將瓶塞蓋好，放回原位；未用完的試劑決不可倒回原瓶。取標準溶液時，應(yīng)該將標準溶液倒入干試管中，再用干凈吸管吸取標準液，以免污染瓶中的標準液體。使用滴管時，滴管尖端朝下，避免試劑流入橡皮帽內(nèi)。使用有毒試劑及強酸強堿時，盡可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。1吸量管的使用正確拿法：中指和拇指拿住吸管上端，食指頂住吸量管頂端。移液管的使用：使用時應(yīng)根據(jù)需量取的液體體積，選用能一次吸取即可的最小規(guī)格的移液管，以減少誤差，如用5ml移液管吸取4.5ml蒸餾水，用0.5ml的移液管吸取0.5ml0.0125%的高錳酸鉀溶液。取液：用吸耳球吸取液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸量管上端。調(diào)刻度：吸量管與地面保持垂直，下口與試劑瓶接觸，并成一角度；用食指控制液體下降至最上一刻度處；液體凹面、刻度和視線應(yīng)在一水平面上。放液：吸量管移入準備接受溶液的容器中，使其出口尖端接觸器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放開食指，使液體自動流出。吸量管應(yīng)最后靠壁15秒。2吸量管上端標有“吹”字。將所量液體全部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶液。此類吸量管為“吹出式”，未標“吹”字的吸量管，則不必吹出管尖的殘留液體，0.5ml以下的都要吹。吸量管尖應(yīng)接觸受器內(nèi)壁，但不應(yīng)插入受器內(nèi)的原有液體之中，以免污染吸量管及試劑。吸取血液、尿、組織樣品、粘稠試劑或有顏色的吸量管，用后應(yīng)及時用自來水沖洗干凈。如果吸取一般試劑的吸量管可不必馬上沖洗，待實驗完畢后，用自來水沖洗干凈，晾干備用。

吸量管的使用注意事項3一般玻璃儀器：如試管、燒杯、錐形瓶等，先用自來水洗刷后，用洗衣粉刷洗，再用自來水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水淋洗2～3次，干燥備用。容量分析儀器：吸量管、滴定管、容量瓶等，先用自來水沖洗，待晾干后，再用鉻酸洗液浸泡數(shù)小時，然后用自來水充分沖洗，最后用蒸餾水淋洗2～3次，干燥備用。比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗。洗不凈時，用鹽酸或適當溶劑沖洗，再用自來水沖洗。避免用堿液或強氧化劑清洗，切忌用試管刷或粗糙布(紙)擦拭。上述所有玻璃器材洗凈(以倒置后器壁不掛水珠為干凈的標準)后，根據(jù)需要晾干或烘干。玻璃器皿的清洗方法4分光光度法光是一種電磁波，通常用頻率和波長來描述光。人的視覺所能感覺到的光稱為可見光，波長范圍在400～760nm，人的眼睛感覺不到的還有紅外光（波長大于760-5000000nm）、紫外光（波長200-400nm）、X射線等。在可見光區(qū)，不同波長的光呈不同的顏色，但各種有色光之間并沒有嚴格的界線，而是由一種顏色逐漸過渡到另一種顏色。溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系5Beer-Lambert定律－吸收光譜法基本定律描述物質(zhì)對單色光吸收強弱與厚度和待測物濃度的關(guān)系。含義：一束單色光通過溶液時，光能被吸收的程度與溶液的濃度和液層厚度成正比。A＝KCL或lgI0/I=KCLA為溶液對光的吸光度，反映了物質(zhì)對光的吸收程度；C為溶液濃度；L為溶液厚度；I0為照射待測物質(zhì)的單色光強度，I為透過待測物質(zhì)光線的光強度，透光度T=I/I0即溶液透過光的強度與入射光的強度之比；K為吸光系數(shù)，是物質(zhì)在單位濃度和單位厚度的條件下對入射光的吸光度。實驗中溶液厚度不變，則A＝KC6光吸收示意圖I0IbC7吸收光譜和物質(zhì)的定性分析物質(zhì)的吸收光譜與物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。吸收光譜曲線是物質(zhì)的特征曲線。用各種不同波長的光線作為入射光測定物質(zhì)的吸光度（Absorbance），然后以波長（λ）為橫軸，相應(yīng)的吸光度（A）為縱軸，按結(jié)果作圖，可得到該物質(zhì)的吸收光譜曲線，這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對不同波長的光的吸收能力。在一定的溫度、pH值等條件下吸收光譜的曲線形狀是一定的。在吸收光譜中，往往可找到一個或幾個吸收最大值，該處的波長稱為最大吸收波長（λmax）。物質(zhì)不同，它們的最大吸收波長也往往不同。8物質(zhì)的定量分析標準曲線法配制一系列不同濃度的標準溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長的入射光。測定時先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%，然后分別測定標準系列的吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標作圖得到一條通過原點的直線，叫做標準曲線（或稱A-C曲線）。標準管法對個別樣品進行測定，且A-C曲線線性良好直接比較測定結(jié)果。

A標=K標c標b標

A測=K測

c測

b測

c測=A測

/A標×c標9不同濃度的VitB12溶液對相同波長的光的不同吸收μg/mlAλ＝550nm10分光光度計的基本構(gòu)造儀器中光源經(jīng)過單色器中的單色原件（如棱鏡），所得到的單色光（入射光）進入樣品室，透出的光被受光器（光電池或光電色）產(chǎn)生光電流，放大后在測量儀上顯示出吸光度（A）或透光度（T）。光源單色器樣品室受光器測量器11722分光光度計使用方法接通電源，打開儀器電源開關(guān)，打開樣品室蓋，預(yù)熱10min;將空白液或?qū)φ找杭皽y定液分別裝入比色杯3/4體積并用擦鏡紙擦凈外壁，放入樣品室內(nèi),空白液一般放于最外格，樣品比色杯放入位置與試管位置對應(yīng);調(diào)好波長;調(diào)節(jié)按鈕開蓋時，調(diào)T

參數(shù)

調(diào)為0合上蓋，調(diào)T參數(shù)調(diào)為10

0(對照液在光路上）逐步拉出樣品室拉桿（聽到“咔”一聲），讀取吸光度值(A）;讀數(shù)完打開樣品室蓋，再將讀數(shù)寫入記錄本。

12722分光光度計使用注意事項樣品室蓋應(yīng)輕開輕放；比色皿拿其磨砂面，液體裝入約3/4高度，并用擦鏡紙擦凈外壁，每次用完后自來水沖洗干凈，倒置于濾紙上；倒取試劑時不能在儀器表面上方操作，儀器上請勿放任何物品；每調(diào)換一次波長，都應(yīng)將空白溶液的吸光度調(diào)至“0”。13第一部分高錳酸鉀吸收曲線的繪制實驗?zāi)康恼莆辗止夤舛扔嫷脑?、操作和?yīng)用能夠熟練使用移液管14實驗原理同一高錳酸鉀水溶液對不同波長的光線可有不同的吸收程度。用722型分光光度計測定相應(yīng)波長下的高錳酸鉀吸光度并作圖可得吸收曲線，分析高錳酸鉀溶液的最大吸收波長。15實驗操作取0.0125％高錳酸鉀溶液0.5m1，加蒸餾水4.5ml，作為測定管;另用蒸餾水作為空白管；用722型分光光度計測定不同波長的吸光度，從450nm至500nm，每隔10nm；502nm至538nm，每隔2nm；540nm至560nm，每隔10nm；在座標紙上以吸光度(A)為縱座標，波長(nm)為橫座標，繪制吸收曲線，并指出最大吸收波長；熟練722分光光度計的操作，在不進行測量時樣品室蓋應(yīng)打開；兩人合作，一人操作分光光度計，一人記錄數(shù)據(jù)。16第二部分雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量實驗?zāi)康牧私夂驼莆针p縮脲測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法。17蛋白質(zhì)在強堿性溶液中與稀硫酸銅溶液作用產(chǎn)生顏色反應(yīng)，生成紫紅色化合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)在堿性溶液中，能與Cu2+形成紫紅色絡(luò)合物，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，故可以用來測定蛋白質(zhì)的濃度。在一定的濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系。因此可用比色法測定蛋白質(zhì)濃度。實驗原理18紫紅色銅雙縮脲配合物分子結(jié)構(gòu)19在分光光度法中，許多不吸收光的無色物質(zhì)可以用顯色反應(yīng)變成有色物質(zhì)，使之能進行比色測定，并能提高測定的靈敏度和選擇性。在比色分析或分光光度分析中，將待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫做顯色反應(yīng)，與待測組分反應(yīng)生成有色化合物的試劑叫顯色劑。在實際分析中，同一待測組分可與多種顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)，生成不同的有色物質(zhì)。為了保證測定的靈敏度和準確度，在分析時常需對顯色反應(yīng)進行選擇，選擇原則如下：1.選擇性好，干擾少或干擾易消除；2.靈敏度要高；3.生成有色化合物的組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定；4.生成的有色化合物與顯色劑之間的顏色須有明顯的差別，最大吸收波長之差大于60nm。顯色劑與顯色反應(yīng)20管號試劑0123456牛血清標準蛋白溶液（ml）2mg/ml—0.61.21.82.43.00待測蛋白液（ml）——————3.0蒸餾水（ml）32.41.81.20.600蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）00.40.81.21.62.