DB21-T 3043-2018蘋果芽變鑒定規(guī)范

ICS65.020.20

B05

備案號(hào)：61339-2019DB21

遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB21/T3043—2018

蘋果芽變鑒定規(guī)范

Identificationofapplesport

DB21/T3043—2018

蘋果芽變鑒定規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)蘋果芽變的形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)、孢粉學(xué)和生理生化等常用的鑒定技術(shù)進(jìn)行規(guī)范。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于全省各地開展蘋果芽變選種工作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T19557.1植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南總則

NY/T2424-2013植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南蘋果

3術(shù)語(yǔ)和定義

NY/T2424-2013確立的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1芽變sport

體細(xì)胞突變的一種,即突變發(fā)生在芽分生組織細(xì)胞中,當(dāng)芽萌發(fā)長(zhǎng)成枝條,并在性狀上表現(xiàn)出與原來(lái)

植株類型不同的性狀即為芽變。

3.2芽變選種sportselection

體細(xì)胞突變的一種,即突變發(fā)生在芽分生組織細(xì)胞中,當(dāng)芽萌發(fā)長(zhǎng)成枝條,并在性狀上表現(xiàn)出與原來(lái)

植株類型不同的性狀即為芽變。

3.3飾變modification

由種種環(huán)境條件造成的不能遺傳的變異。

4鑒定

4.1原則

依據(jù)NY/T2424來(lái)確定芽變品種與原品種的特異性、一致性和穩(wěn)定性。鑒定原則按由田間觀察、調(diào)

查到室內(nèi)測(cè)定，由簡(jiǎn)單方法到復(fù)雜的方法順序進(jìn)行鑒定。

4.2材料及方法

4.2.1材料

蘋果的葉片、枝條、花粉和果實(shí)。

1

DB21/T3043—2018

4.2.2方法

蘋果芽變形態(tài)學(xué)鑒定見(jiàn)附錄A，解剖學(xué)鑒定見(jiàn)附錄B，孢粉學(xué)鑒定見(jiàn)附錄C，生理生化鑒定見(jiàn)附錄

D。

4.3芽變初選時(shí)期

蘋果花朵性狀發(fā)生的變異篩選，應(yīng)著重在開花期；葉片性狀發(fā)生變異的篩選，應(yīng)在8月～10月，葉

片形成以后；枝條性狀發(fā)生變異的篩選，主要在果樹休眠期；果實(shí)性狀發(fā)生變異的篩選，主要在果實(shí)采

收期進(jìn)行；果實(shí)成熟期發(fā)生變異則應(yīng)在采收前1個(gè)月開始；抗性為育種目標(biāo)時(shí)，應(yīng)著重抓住災(zāi)害發(fā)生之

后的時(shí)期進(jìn)行篩選。

4.4芽變初選地點(diǎn)

蘋果芽變初選在各地果園進(jìn)行。

4.5芽變識(shí)別方法

變異的性質(zhì)如屬于典型的質(zhì)量性狀，可判定是芽變；變異體發(fā)生范圍如是不同立地、不同技術(shù)的多

株變異，即可排除環(huán)境和技術(shù)的影響，可判定是芽變；變異的方向，凡是與環(huán)境的變化不一致的，如樹

冠下部或內(nèi)膛處發(fā)現(xiàn)果實(shí)濃紅色變異，可判定是芽變；變異性狀雖經(jīng)不同年份的環(huán)境變化而表現(xiàn)穩(wěn)定，

可判定是芽變。

4.6田間試驗(yàn)

4.6.1鑒定地點(diǎn)

鑒定通常在原發(fā)地進(jìn)行。如果某些芽變性狀在該地點(diǎn)不能充分表達(dá)，可在其他符合條件的地點(diǎn)對(duì)芽

變品種及原品種進(jìn)行觀測(cè)。

4.6.2繁殖材料的要求

按照NY/T2424中的標(biāo)準(zhǔn)繁殖材料。

4.6.3田間管理

按照NY/T2424中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行田間管理。

4.6.4芽變鑒定周期

鑒定周期至少為2個(gè)正常生長(zhǎng)并開花結(jié)果的年生長(zhǎng)周期。

4.6.5變異性狀描述

按照NY/T2424規(guī)定的方法對(duì)基本性狀和變異性狀進(jìn)行描述。根據(jù)測(cè)試需要，將性狀分為基本性狀

和變異性狀。變異性狀是測(cè)試中必須觀測(cè)的性狀。

4.6.6鑒定時(shí)期

按照NY/T2424中的性狀描述的標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)不同器官變異性狀，在適于觀測(cè)的時(shí)期進(jìn)行鑒定。

4.6.7鑒定數(shù)量

2

DB21/T3043—2018

對(duì)芽變品種與原品種的觀測(cè)應(yīng)至少分別在10株樹上進(jìn)行，在觀測(cè)植株的器官或部位時(shí)，每個(gè)植株上

取樣數(shù)量應(yīng)至少為3個(gè)。

4.6.8不同變異性狀的鑒定內(nèi)容

①短枝型變異的品種，應(yīng)著重調(diào)查葉片厚度、枝條的長(zhǎng)度、粗度、節(jié)間長(zhǎng)、枝類比、樹體的樹

高、冠徑、始果年限及產(chǎn)量。

②花的變異，應(yīng)著重調(diào)查花期、花冠大小、花瓣大小形狀及顏色。

③果實(shí)大小發(fā)生變異的品種，應(yīng)著重看果實(shí)成熟階段的發(fā)育規(guī)律及果實(shí)成熟時(shí)果實(shí)縱徑、橫徑

及單果重的變化。

④著色變異的芽變品種，應(yīng)著重看果實(shí)將近成熟時(shí)果實(shí)著色的變化。

⑤果實(shí)成熟期的變化應(yīng)確定果實(shí)適宜的采收期。

⑥果實(shí)品質(zhì)變異重點(diǎn)在果實(shí)成熟時(shí)對(duì)果實(shí)的可溶性固形物、可滴定酸、硬度等變異的測(cè)定。

⑦樹體抗性發(fā)生變異應(yīng)對(duì)不同的抗性變異相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)；抗寒性變異，重點(diǎn)通過(guò)田間調(diào)

查樹體的抗性，測(cè)定休眠期枝條的電導(dǎo)率；抗銹變異，重點(diǎn)調(diào)查果面銹斑多少；抗病蟲變異

重點(diǎn)調(diào)查不同變異病情指數(shù)的變化。

⑧樹體倍性發(fā)生變異應(yīng)對(duì)遺傳物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，重點(diǎn)對(duì)染色體數(shù)目進(jìn)行檢測(cè)。

4.6.9芽變品種判定

依據(jù)NY/T2424提供的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合調(diào)查統(tǒng)計(jì)的結(jié)果，對(duì)芽變品種與原品種的特異性、一致性和穩(wěn)定

性進(jìn)行判定。

A

3

DB21/T3043—2018

附錄A

（規(guī)范性附錄）

蘋果芽變的形態(tài)學(xué)鑒定

A1針對(duì)葉片變異的形態(tài)學(xué)鑒定

A1.1材料與方法

按照NY/T2424方法，將蘋果原品種與芽變品種在同一栽培管理?xiàng)l件下，在8月～10月，葉片形成后，

描述葉片形狀，調(diào)查葉片形態(tài)。

A1.2調(diào)查結(jié)果

將調(diào)查結(jié)果填入表A.1和A.2。經(jīng)調(diào)查分析，上述性狀原品種與芽變品種間有顯著性差異的可判定為

新類型。

表A.1葉片的形態(tài)描述

品種葉長(zhǎng)（cm）葉寬（cm）葉柄長(zhǎng)（cm）葉形指數(shù)葉長(zhǎng)與葉柄長(zhǎng)比值

原品種

芽變品種

表A.2葉片的形態(tài)調(diào)查

品種葉長(zhǎng)（cm）葉寬（cm）葉柄長(zhǎng)（cm）葉形指數(shù)葉長(zhǎng)與葉柄長(zhǎng)比值

原品種

芽變品種

A2針對(duì)果實(shí)變異的形態(tài)學(xué)鑒定

蘋果果實(shí)大小、形狀、著色等發(fā)生變異，要開展果實(shí)形態(tài)描述及調(diào)查。

A2.1材料與方法

按照NY/T2424的方法，將蘋果原品種與芽變品種在同一栽培管理?xiàng)l件下，在果實(shí)成熟后，調(diào)查描

述果實(shí)的形態(tài)。

A2.2調(diào)查結(jié)果

將調(diào)查結(jié)果填入表A.3和A.4。經(jīng)觀察統(tǒng)計(jì)分析，上述指標(biāo)原品種與芽變品種間有明顯不同且表現(xiàn)穩(wěn)

定的，結(jié)果有顯著性差異的可判定為新類型。短枝型變異品種果柄明顯變短。

表A.3果實(shí)形態(tài)描述

品種形狀底色蓋色著色程度著色類型果面的光潔度

原品種

芽變品種

4

DB21/T3043—2018

表A.4果實(shí)形態(tài)調(diào)查

品種單果重(g)縱徑(cm)橫徑(cm)果形指數(shù)果柄長(zhǎng)(cm)

原品種

芽變品種

A3針對(duì)樹體、枝條變異的形態(tài)學(xué)鑒定

短枝型、垂枝型變異品種需要進(jìn)行樹體、枝條形態(tài)學(xué)鑒定。

A3.1材料與方法

將蘋果原品種與芽變品種在同一栽培管理?xiàng)l件下，在果樹結(jié)果后，按照NY/T2424的方法，調(diào)查描

述樹體、枝條的形態(tài)。

A3.2調(diào)查內(nèi)容

將調(diào)查結(jié)果填入表A.5，A.6。經(jīng)調(diào)查分析，上述指標(biāo)芽變品種表現(xiàn)樹體矮小，結(jié)果早、產(chǎn)量高，一

年生枝短、粗，節(jié)間短，短枝比例高，可判定為短枝型變異類型；垂枝型變異表現(xiàn)樹體開張，枝條基角

大于90°，萌芽率高，短枝比例高。

表A.5短枝型變異的相關(guān)性狀調(diào)查

品種樹高（m）冠徑始果年限（年）畝產(chǎn)量（kg/667m2）長(zhǎng)度（cm）粗度（cm）節(jié)間長(zhǎng)枝類

（m）（cm）比

原品種

芽變品種

表A.6垂枝型變異的相關(guān)性狀調(diào)查

品種樹形樹高（m）冠徑（m）枝條基角（°）萌芽率枝類比

原品種

芽變品種

B

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

解刨學(xué)鑒定一葉片結(jié)構(gòu)解剖學(xué)鑒定

B1材料

選用在同樣栽培管理?xiàng)l件下的蘋果芽變品種及原品種的葉片。

B2方法

B2.1蘋果葉片氣孔的觀察

采用酸解離法。10%的硝酸溶液和10%的鉻酸溶液按1：1比例混合即配成葉片解離液。在8月中旬采

集圃內(nèi)供試品種的葉片，葉片取于向陽(yáng)面樹枝的中上部。采葉時(shí)間一般在晴日上午，保證氣孔完全開放。

取材于葉片第2葉脈與第3葉脈之間，取葉片1cm2大小左右。將新鮮葉片使用葉片解離液浸泡16～26小

時(shí)。解離后用鑷子取出下表皮，用清水浸洗，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。在顯微鏡下觀察視野內(nèi)的氣孔

數(shù)目（M），用測(cè)微尺測(cè)量視野直徑（D），觀測(cè)時(shí)每葉片觀察5個(gè)視野，調(diào)查每視野的氣孔個(gè)數(shù)，中心

視野的氣孔長(zhǎng)和氣孔寬，共觀察30個(gè)視野。氣孔密度＝M/3.14（D/2）2。結(jié)果用LSD方法進(jìn)行差異顯著

性分析。

B2.2蘋果葉片結(jié)構(gòu)的觀察

葉片截面觀察采用徒手切片法。每品種隨機(jī)選6個(gè)葉片進(jìn)行調(diào)查，在葉片的第2葉脈與第3葉脈之間

制作徒手切片，每個(gè)葉片要觀測(cè)5個(gè)切片并在光學(xué)顯微鏡下觀察葉片截面的結(jié)構(gòu)，調(diào)查上表皮厚、柵欄

組織、海綿組織、下表皮及葉片厚度。共觀察30個(gè)視野，結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析。

B3調(diào)查內(nèi)容

將調(diào)查結(jié)果填入表B.1和B.2。芽變品種的保衛(wèi)細(xì)胞的寬度與原品種比較有變長(zhǎng)的趨勢(shì)；短枝型芽變

品種中的氣孔密度有變小的趨勢(shì)；短枝型芽變品種柵欄組織厚度與原品種比較有變小的趨勢(shì)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分

析，上述指標(biāo)芽變品種與原品種間有顯著性差異的可確定為新類型。

表B.1蘋果芽變品種氣孔觀察

品種氣孔密度（個(gè)/mm2）保衛(wèi)細(xì)胞長(zhǎng)(μm)保衛(wèi)細(xì)胞寬(μm)

原品種

芽變品種

表B.2蘋果芽變品種葉片結(jié)構(gòu)的觀察

(單位：m)

Cμ

品種上表皮厚柵欄組織厚海綿組織厚下表皮厚葉厚

原品種

芽變品種

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附錄C

（規(guī)范性附錄）

孢粉學(xué)鑒定－花粉形態(tài)掃描電鏡觀察

C1材料與方法

C1.1材料

選用在同樣栽培管理?xiàng)l件下的蘋果芽變品種及原品種的花粉。

C1.2方法

花粉采集后涼干，用棉簽蘸花粉，輕拍手腕，讓花粉均勻撒在粘有雙面膠的樣品托上，用吸耳球吹

去多余的花粉。用離子濺射儀做噴金處理，噴鍍電流為7mA～8mA，噴鍍時(shí)間約為300s，然后置于掃描

電鏡下觀察，選取典型的花粉粒拍照。取6個(gè)不同的視野，每個(gè)視野選5個(gè)方位一致、典型的花粉調(diào)查花

粉粒的極軸及赤道軸的長(zhǎng)度。在1800倍下分別對(duì)花粉粒的雙溝側(cè)面和單溝側(cè)面進(jìn)行拍照，在3000倍下對(duì)

花粉的極面進(jìn)行拍照，每品種取6個(gè)典型的花粉在5000倍下對(duì)花粉紋飾拍照，并將相片通過(guò)掃描，在電

腦中觀察花粉紋飾，調(diào)查不同品種花粉條脊寬、條脊距、穿孔最大直徑，每項(xiàng)指標(biāo)調(diào)查50個(gè)數(shù)據(jù)，調(diào)查

結(jié)果用LSD方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

C2調(diào)查內(nèi)容

將調(diào)查結(jié)果填入表C.1。芽變品種的P/E值與原品種比較有變小的趨勢(shì)，早熟類型變異品種的P/E值

要小于其他變異類型的P/E值。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，上述指標(biāo)原品種與芽變品種間有顯著性差異的可確定為新

類型。

表C.1不同蘋果芽變品種花粉的掃描電鏡觀察比較

(單位：μm)

品種極軸長(zhǎng)赤道軸長(zhǎng)極軸/赤道軸（P/E）條脊寬條脊距穿孔直徑

原品種

芽變品種

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DA

附錄D

（規(guī)范性附錄）

生理生化鑒定

D1材料與方法

D1.1材料

選用的試材為在相同的栽培管理?xiàng)l件下的原品種和芽變品種（樹齡、樹勢(shì)、樹形、負(fù)載量等應(yīng)一致）。

測(cè)定成熟果實(shí)果實(shí)可溶性固形物、總糖、可滴定酸含量及果皮中花青素含量及果皮色澤。

D1.2方法

可溶性固形物含量采用數(shù)字手持袖珍折射儀測(cè)定，以%表示；總酸含量采用數(shù)字測(cè)酸儀檢測(cè)，以百

分含量表示；果實(shí)去皮硬度采用果實(shí)硬度計(jì)測(cè)定，以kg/cm2表示；花青素采用鹽酸乙醇法，以mol.g-1FW

表示。果實(shí)色澤測(cè)定用色差計(jì)，測(cè)定每個(gè)果實(shí)對(duì)稱兩面的L（光亮度）、a（紅綠色差）、b（黃藍(lán)

色差）。L值表示表面顏色深淺，L值越大顏色越淺、果面越有光澤，反之顏色越深果面暗淡無(wú)光澤；

a值表示紅綠的程度，a值越大紅色越深；b值表示黃青的程度，b值越大黃色越深，底色越好。結(jié)果

進(jìn)行LSD方法統(tǒng)計(jì)分析。

D2檢測(cè)內(nèi)容

將調(diào)查結(jié)果填入表D.1。經(jīng)LSD方法統(tǒng)計(jì)分析，上述指標(biāo)原品種與芽變品種間有顯著性差異的可確定

為新類型。一般情況下在果實(shí)成熟期，同一階段的早熟變異品種與原品種比較可溶性固形物、花青素含

量高而可滴定酸和硬度變低。果實(shí)色澤也優(yōu)于同期的原品種。

表D.1蘋果芽變果實(shí)品質(zhì)檢測(cè)

品種可溶性固形物可滴定酸(%)