轉(zhuǎn)基因果蠅實(shí)驗(yàn)-崔麗嘉

轉(zhuǎn)基因果蠅的雜交重組和鑒定（周四組）崔麗嘉生972009011868同組：張夢(mèng)璐、馮天師、毛文志、何天驊2011.6.4一實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理1實(shí)驗(yàn)?zāi)康模豪蠋熖峁┙o我們的果蠅品系tA、tB分別含有轉(zhuǎn)入的基因A和基因B，我們需要通過(guò)重組交換將這兩個(gè)基因整合到同一品系果蠅的同一條染色體上，得到可以穩(wěn)定保存的品系（balanced或homozygous）。2果蠅的轉(zhuǎn)基因原理：轉(zhuǎn)基因果蠅（transgenicfly）是將帶有目的基因的質(zhì)粒通過(guò)顯微注射轉(zhuǎn)入白眼果蠅卵中，這些質(zhì)粒上一般帶有P轉(zhuǎn)座子序列（PelementsaretransposablepiecesofDNAthatrandomlyinsertthemselvesintogenomicDNA），使得目的基因可以插入到果蠅染色體中。一般使用白眼果蠅的卵進(jìn)行顯微注射，質(zhì)粒上帶有的mini-white基因（紅眼）可以作為轉(zhuǎn)基因成功的標(biāo)記（marker），帶有目的基因的果蠅將成為紅眼果蠅。mini-white的表達(dá)量決定了果蠅眼睛紅色的深淺，這與目的基因插入位置和copy數(shù)目有關(guān)（插入位置附近的染色體結(jié)構(gòu)和啟動(dòng)子決定mini-white表達(dá)量，純和果蠅比雜合果蠅表達(dá)量也高，有多個(gè)插入位點(diǎn)的比單個(gè)插入位點(diǎn)的表達(dá)量高，一般情況下只有一個(gè)插入位點(diǎn)）。常用的帶P轉(zhuǎn)座子載體示意圖如下：實(shí)驗(yàn)提供幾種轉(zhuǎn)基因果蠅，由于受質(zhì)粒大小的限制，一般一個(gè)轉(zhuǎn)基因果蠅品系只能轉(zhuǎn)入一個(gè)目的基因，有時(shí)需要把不同目的基因整合到同一個(gè)果蠅品系中，研究?jī)蓚€(gè)基因的功能及相互作用等。如果兩個(gè)目的基因都插在不同果蠅品系的同一個(gè)染色體上，可以通過(guò)遺傳重組的方法得到重組型后代（眼睛顏色），重組型后代將在同一個(gè)染色體上同時(shí)帶有兩個(gè)目的基因，并可以建立穩(wěn)定保持的品系。例如有基因A的轉(zhuǎn)基因果蠅系tA和基因B的轉(zhuǎn)基因果蠅系tB，A和B分別插在tA和tB的三號(hào)染色體上（t表示transgenic），通過(guò)重組交換可以得到三號(hào)染色體上同時(shí)帶有基因A和基因B的轉(zhuǎn)基因果蠅系tAB，將tAB穩(wěn)定保存即可。3平衡子的使用原理：重組實(shí)驗(yàn)還需要帶TM3平衡子(balancer)的果蠅來(lái)輔助，帶平衡子的果蠅相應(yīng)染色體不能發(fā)生重組，使得雜交過(guò)程和鑒定方法更為簡(jiǎn)單。4UAS-Gal4系統(tǒng)的應(yīng)用原理：實(shí)驗(yàn)還需要應(yīng)用到一個(gè)UAS-Gal4系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞的driver，為GMR-Gal4，進(jìn)行重組成功的鑒定。GAL4/UAS系統(tǒng)是目前果蠅中十分常用的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（見下圖說(shuō)明）。該系統(tǒng)利用組織特異性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，將GAL4基因與啟動(dòng)子或增強(qiáng)子相連接,建立GAL4轉(zhuǎn)基因系，通過(guò)這種啟動(dòng)子以細(xì)胞和組織特異性的方式來(lái)控制GAL4的表達(dá)。另外，將UAS與靶基因融合，建立帶有UAS-靶基因的轉(zhuǎn)基因系。在雜交后代中,特異性表達(dá)的GAL4能以同樣的方式調(diào)節(jié)UAS-靶基因的表達(dá)。二實(shí)驗(yàn)材料1）轉(zhuǎn)基因果蠅A/A：tA是純合體，A為Tau基因。2）轉(zhuǎn)基因果蠅B/Ser：tB為純合致死，B基因帶有GFP基因，能自發(fā)綠色熒光，在熒光顯微鏡下可觀察。Ser為翅膀缺刻的基因，是一個(gè)平衡子。3）果蠅Tb/Sbbalancer:Sb為短剛毛、白眼基因（顯性），是一個(gè)平衡子。4）果蠅GMR-Gal4：tA與GMR-Gal4果蠅系進(jìn)行雜交，其在GMR-Gal4的驅(qū)動(dòng)下，產(chǎn)生子代的成體果蠅眼睛缺陷，表現(xiàn)為發(fā)育不全。三實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)P:F1:P:F1:F2:F3:F4:AOOAOOABO產(chǎn)生可穩(wěn)定遺傳的品系×產(chǎn)生可穩(wěn)定遺傳的品系GMR/Gal4子代果蠅約半數(shù)眼睛有缺陷子代果蠅約半數(shù)眼睛有缺陷上圖為我們所進(jìn)行的雜交方案，目的是將AOOAOO與OBOOSerO雜交，借助OOtb1）P代，我們將老師提供的樣本tA♀與tB♂雜交，將A、B兩個(gè)基因集中在一只果蠅上（A、B會(huì)分散兩條染色體上），此代正反交均可，但老師提供的tA幾乎都是♀，tB幾乎都是♂，所以我們采取了tA♀與tB♂的雜交方案。2）F1代，我們獲得兩種子代個(gè)體——缺刻翅的AOOASerO和正常翅的AOOOBO。我們將正常翅的蠅分出，與白眼短剛毛的品系OOtbOOsb雜交。此代對(duì)親本性別有要求，必須用♀A3）F2代，我們獲得8種子代個(gè)體——長(zhǎng)剛毛的OOOOOtbAOOOOtbOBOOOtbABOOOtb和短剛毛的OOO*****實(shí)際操作中，我們將ABOOOsb♂和ABOOOsb♂都挑選出，與♀OOtbOOsb做了雜交。之所以這樣，是因?yàn)檫@一代中雄性鮮紅眼短剛毛的紅眼后代中，只有1/2會(huì)帶上父方的Sb基因，而雄性鮮紅眼長(zhǎng)剛毛的紅眼后代，也有1/2會(huì)帶上母方的Sb基因。換言之，無(wú)論父方攜帶了Sb基因還是Tb基因，它們的鮮紅眼后代都有1/2的概率得到Sb基因，成為我們所需要的鮮紅眼短另外，我們發(fā)現(xiàn)ABOOOsb♀和ABOOOtb♀眼色的紅色也具有AOOOOsb<鎖基因可能在產(chǎn)生配子時(shí)又因重組而分開，不能被子代一起繼承。4）F3代中，有四種基因型，其中OOsbOOsb純合致死，AOOOOtb長(zhǎng)剛毛，OOsb*******實(shí)際操作中，我們的自交瓶出現(xiàn)三齡幼蟲時(shí)，與GMR/Gal4的雜交瓶中還沒有成蠅出現(xiàn)。為了方便助教一次為我們做完兩方面的檢測(cè)，我們將三齡幼蟲孵化出的成蠅又做了一輪自交。這個(gè)過(guò)程中，我們觀察到自交瓶出的成蠅90%以上都是紅眼短剛毛，且雌雄同比例。這說(shuō)明我們所作出的品系是滿足要求的。四實(shí)驗(yàn)過(guò)程與結(jié)果分析1P代雜交過(guò)程：日期備注AOO3.24雜交數(shù)量：2×9出幼蟲3.27轉(zhuǎn)瓶共計(jì)1次2F1代篩選及雜交過(guò)程日期備注F1代成蠅孵出3.27—4.11子代兩種性狀，數(shù)量近似相等缺刻翅AOO正常翅AOOOBO：挑出其中的♀AOOOBO♀4.5---4.11雜交數(shù)量：11×21出幼蟲4.6轉(zhuǎn)瓶共計(jì)5次3F2代篩選及雜交過(guò)程日期備注F2代成蠅孵出4.6—5.12總數(shù)目>357子代中有八種基因型，對(duì)應(yīng)性狀為白眼長(zhǎng)剛毛、淡紅眼長(zhǎng)剛毛、橙紅眼長(zhǎng)剛毛、鮮紅眼長(zhǎng)剛毛(重組型)、白眼短剛毛、淡紅眼短剛毛、橙紅眼短剛毛、鮮紅眼短剛毛(重組型)，挑選出其中的鮮紅眼長(zhǎng)剛毛雄性、鮮紅眼短剛毛雄性，基因型為ABOOOsb/tb♂，同時(shí)挑選鮮紅眼長(zhǎng)剛毛雌性ABOOOtb♀、鮮****備注：這一步挑選和篩蠅過(guò)程，耗費(fèi)時(shí)間最長(zhǎng)。這主要是源于我們對(duì)如何挑最紅眼色個(gè)體把握不準(zhǔn)。在4月27日，我們統(tǒng)一了篩選方法——從之前出的33只雄性果蠅中挑出兩只眼色最紅的，同時(shí)從27日開始，每?jī)商煸O(shè)一個(gè)觀察瓶，將當(dāng)日出的最紅眼雄蠅放入，之后停放兩天，待瓶中果蠅眼色穩(wěn)定后，再篩選出其中最紅的雄蠅與Tb/Sb雜交。到5月12日為止，共篩選了6批。ABO4.19---5.12雜交數(shù)量：26×40，分6批觀察并分別雜交。ABO4.23---4.27雜交數(shù)量：8×2ABO4.23---4.27雜交數(shù)量：11×9****備注：我們希望盡量擴(kuò)大篩選紅眼雄蠅的樣本量，所以后來(lái)也將此瓶中出的紅眼雄蠅進(jìn)觀察瓶，用于后續(xù)雜交出幼蟲4.23---5.124F3代篩選及雜交過(guò)程日期備注F3代成蠅孵出5.6—5.24子代出現(xiàn)三種性狀，紅眼長(zhǎng)剛毛ABOOOtb，白眼短剛毛OOsbOOtb，紅眼短剛毛ABOO****觀察瓶1所孵出的果蠅大分眼色異常的突變體，詳細(xì)情況見“額外的發(fā)現(xiàn)與探究”中第3部分。我們挑選出了子代中的少數(shù)眼色正常的雌雄紅眼短剛毛果蠅，進(jìn)行了后續(xù)的自交、雜交。ABO5.115.21雜交數(shù)量：3×3因?yàn)榕cGMR/Gal4不同期，5月21日我們將后代再次自交了一代。養(yǎng)到三齡幼蟲時(shí)，上交老師。ABO5.12雜交數(shù)量：3×6孵化出40只左右成蠅時(shí)，上交老師。出幼蟲5.23----5.28上交老師做檢測(cè)5.28****注：為了與上述品系的果蠅進(jìn)行雜交，我們的對(duì)Tb/Sb和GMR/Gal4品系的果蠅也不斷進(jìn)行了傳代和篩選處女蠅的工作。鑒于篇幅有限，這些工作記錄未列出。5上交品系的果蠅及幼蟲的檢測(cè)結(jié)果：ABOOOsb♂×♀ABOOOsb共得到17只幼蟲，其中13只有綠色熒光，含有B基因。但是仍有4只幼蟲沒有綠色熒光，根據(jù)助教提供的去年相同實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們分析可能是環(huán)境導(dǎo)致的基因表達(dá)問(wèn)題。B基因表達(dá)受環(huán)境影響，這如圖所示，左圖為不發(fā)熒光的幼蟲，顯現(xiàn)出暗綠色；右圖為發(fā)熒光的幼蟲，亮綠色，且身體內(nèi)前1/3處有一個(gè)明顯的亮點(diǎn)。前已提及，ABOOOsb♂×♀GMR/Gal4和如上圖所示，左圖為正常眼，眼部可見均勻條紋狀網(wǎng)格；右圖為缺陷眼個(gè)體，網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)已經(jīng)損壞，眼表面油亮，有些部位甚至有破損的黑斑或黑條。五額外的發(fā)現(xiàn)與探究1）Tb/Sb中的Tb基因是純和致死的隱形基因：Sb攜帶balancer，自身純和致死。因此在實(shí)驗(yàn)之初，我們認(rèn)為Tb/Sb的自交后代會(huì)有長(zhǎng)剛毛Tb/Tb和短剛毛Tb/Sb兩種，可事實(shí)上我們只能獲得Tb/Sb短剛毛這一種果蠅，這說(shuō)明Tb是一個(gè)缺陷基因，純和（OOtbOOtb）時(shí)會(huì)2）AB基因重組：我們對(duì)F2代成蠅進(jìn)行了將近一個(gè)月的觀察篩選，在907只子代果蠅中篩選出約26只最紅眼色的雄性進(jìn)行與Tb/Sb的雜交。篩選過(guò)程：挑選當(dāng)日新孵化的成蠅中深紅眼色雄蠅（篩選比例為1：10，即在每10只紅眼色雄蠅中挑選最紅的一只），放入觀察瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。連續(xù)篩選兩日，之后繼續(xù)培養(yǎng)三日，這三日不再放入新蠅。后續(xù)三日的培養(yǎng)是為了拉平不同時(shí)間段孵化的差異，因?yàn)楣壯凵珪?huì)隨時(shí)間逐漸加深。三日后進(jìn)行第二次篩選，將觀察瓶中約30只果蠅再進(jìn)行1：10篩選出最紅的作為AB重組型進(jìn)行雜交。因而所有進(jìn)行的雜交深紅眼蠅都進(jìn)行了2次篩選。所有深紅眼子代和白眼子代都含有一條發(fā)生過(guò)基因重組的染色體，由此可計(jì)算出重組率：重組率=重組染色體數(shù)目染色體總數(shù)=26×但是，我們最終用來(lái)進(jìn)行雜交的紅眼雄蠅只是所有重組型子代的一部分（因?yàn)榉浅?yán)格的篩選，我們棄去了很多重組個(gè)體）。由此計(jì)算出的重組率低于真實(shí)重組率，但是這個(gè)計(jì)算值對(duì)于以后進(jìn)行轉(zhuǎn)基因果蠅實(shí)驗(yàn)具有重要的參考價(jià)值。3）ABOOOsb♀也具有眼色紅色根據(jù)老師的指導(dǎo)，只有ABOOOsb♂具有眼色紅色AOOOOsb<OBOOOsb<ABOOOsb的特點(diǎn)。然而在觀察中，我們發(fā)現(xiàn)F2代果蠅中的雌性個(gè)體眼色也有差別，即白色、淺紅色、橙紅色、鮮紅色都有。當(dāng)時(shí)，我們便猜測(cè)這很可能因?yàn)锳BOOOsb♀也具有這個(gè)特點(diǎn)。當(dāng)時(shí)本著擴(kuò)大親本量和驗(yàn)證我們猜想的目的，我們把眼色最紅的雌蠅，即我們認(rèn)為的ABOOOsb♀和ABOOOtb4）ＨＩＧＨＬＩＧＨＴI意外發(fā)現(xiàn)！觀察瓶1的雜交后代中，我們發(fā)現(xiàn)其中的絕大多數(shù)，為暗紅色眼的雌蠅和白色眼的雌蠅，發(fā)生了明顯的性狀分離。這種紅的暗紅色，與我們之前所觀察到的ABOOOsb、如上圖所示，左圖為我描述的觀察瓶1后代的暗紅眼，它既不同與GMR/Gal4的那種蠟狀紅眼（中圖），也不同于ABOOOsb的鮮紅色紅眼（右圖）。以下為觀察1性狀數(shù)目比例深紅眼♀>41~50%深紅眼♂00白眼♀00白眼♂>33~50%鮮紅眼♀4極少數(shù)鮮紅眼♂6極少數(shù)II展開探究：為了尋找這個(gè)深紅眼突變性狀的特點(diǎn)，我們進(jìn)行了三組雜交探究實(shí)驗(yàn)：A深紅眼♀×♂GMR/Gal4鮮紅眼中央有黑斑暗紅眼中央無(wú)黑斑長(zhǎng)剛毛♂1717短剛毛♂2123長(zhǎng)剛毛♀2621短剛毛♀1314如上圖所示，左圖為鮮紅眼中央有黑斑，右圖為暗紅眼中央無(wú)黑斑。B深紅眼♀×♂白眼暗紅眼，黑斑均可見長(zhǎng)剛毛♂78短剛毛♂1513長(zhǎng)剛毛♀1522短剛毛♀2019如上圖所示，左圖是白眼，右圖是暗紅眼（與它們的深紅眼親本的那種深紅色一致）C(A所得子代中的)鮮紅眼黑斑♀×鮮紅眼黑斑♂，結(jié)果如下：雌蠅占多數(shù)，均為鮮紅眼帶黑斑；雄蠅占少數(shù)，分鮮紅眼帶黑斑和暗紅眼無(wú)黑斑兩種。III猜想：根據(jù)以上探究結(jié)果，我們組提出了“雜蠅說(shuō)”和“突變說(shuō)”兩種猜想，后期又提出了“轉(zhuǎn)座說(shuō)”。先介紹前兩種猜想：雜蠅說(shuō)：認(rèn)為在A_B_OOOtb/sb♂×OOtbOOsb♀突變說(shuō)：我們認(rèn)為兩只雄蠅中一只得性染色體發(fā)生突變，產(chǎn)生了暗紅眼形狀，且只出現(xiàn)在子代雌蠅個(gè)體中。對(duì)這兩種可能出現(xiàn)的狀況進(jìn)行比較分析。首先混入雜蠅和發(fā)生突變都是小概率事件，但都是有可能發(fā)生的。當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)室中“野生”果蠅很多，無(wú)人照料，有可能在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶過(guò)程中飛入培養(yǎng)瓶中，又因?yàn)殡s蠅本身是紅眼，不能被區(qū)分，也就當(dāng)作正常蠅進(jìn)行了雜交。我們還對(duì)其它組的紅眼果蠅進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)他們的紅眼性狀更類似于我們定義的暗紅眼而不是正常紅眼，這一現(xiàn)象支持了雜蠅說(shuō)。果蠅發(fā)生突變也是可能的，在AOOOBO♀×IV推論：這個(gè)異?；驊?yīng)該位于X染色體上，因?yàn)槟撤N原因發(fā)生于♂ABSb×♀TbSb中的兩只親本雄蠅中的一只上。更可能的原因是，這個(gè)突變只發(fā)生在他的性腺細(xì)胞中，甚至只發(fā)生在他的精原細(xì)胞中，這就是為什么我們會(huì)在按眼色挑選時(shí)把他誤當(dāng)做ABSb卻沒有發(fā)現(xiàn)任何異常。我們記此突變產(chǎn)生的新基因?yàn)镽，則該雄蠅為XRY。產(chǎn)生子代為：XRX和XYA深紅眼與GMR-Gal4雜交的后代主要有兩種：有黑斑和無(wú)黑斑。有黑斑的果蠅，尤其是雄蠅，眼色要比無(wú)黑斑的果蠅眼色更淺。由于黑斑這個(gè)性狀之前未出現(xiàn)過(guò)，與GMR-Gal4對(duì)比發(fā)現(xiàn)GMR-Gal4沒有黑斑，所以猜測(cè)黑斑可能與異?；蛴嘘P(guān)。這里，作為理論知識(shí)的空缺，不是很清楚GMR-Gal4果蠅的紅眼基因的位置，所以，假設(shè)其眼色決定型與野生型一樣是在X染色體上，則記GMR-Gal4上所帶的紅眼基因?yàn)閞，則與GMR-Gal4雜交時(shí)（XRX×XrY），的子代為：XRXr、XrX、XRY和XY，其中XY應(yīng)為白眼雄蠅。實(shí)際上并未觀察到白眼雄蠅，故，如果真的GMR-Gal4的紅眼基因真的在X上，則之前的推論基本就是錯(cuò)的。但如果GMR-Gal4的紅眼基因與A和B一樣不在X染色體上而是與Gal4基因一起在常染色體上，那么就比較好解釋了：XRX×XY產(chǎn)生的自代為：XRX、XX、XRY和XY，其中，XRX和XRY為有黑斑蠅，而XX和XY為無(wú)黑斑蠅。兩種蠅在R基因影響的的基礎(chǔ)上還要表達(dá)GMR-Gal4所含有的紅眼基因。B深紅眼與TbSb的雜交檢測(cè)比較簡(jiǎn)單，因?yàn)門bSb不帶有其他影響顏色的基因，所以驗(yàn)證的結(jié)果很好，果蠅的的黑斑也很明顯。（XRX×XY產(chǎn)生的自代為：XRX、XX、XRY和XY，其中，XRX和XRY為有黑斑蠅，而XX和XY為無(wú)黑斑蠅。）C之后的驗(yàn)證為自交：XRX×XRY。顯然，子代中雌蠅一定含有黑斑（XRX，XRXR），而雄蠅部分有黑斑（XRY有黑斑，XY無(wú)黑斑）。這與實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，R基因決定的性狀應(yīng)為淺紅眼+黑斑。至此，有兩個(gè)現(xiàn)象我們?nèi)匀粺o(wú)法解釋：為什么最早的突變雄蠅產(chǎn)生的子代雌蠅的顏色會(huì)那么深？為什么檢測(cè)時(shí)有黑斑果蠅的眼色會(huì)有差異？V關(guān)于突變基因R來(lái)源的假設(shè)我和馮天師經(jīng)過(guò)討論，對(duì)這個(gè)突變基因R的來(lái)源做了大膽假設(shè)：首先，回顧一下這個(gè)基因決定的性狀特點(diǎn)：一方面，R的表達(dá)使眼睛變?yōu)闇\紅色的基因，另一方面是眼睛中部產(chǎn)生一個(gè)輪廓模糊的黑斑。而最可能兼具這兩方面的特點(diǎn)，就是tA系最初被轉(zhuǎn)入的那個(gè)基因A！這是因?yàn)锳基因帶Tau毒基因，本身在Gal4蛋白的驅(qū)動(dòng)會(huì)產(chǎn)生眼缺陷的性狀；此外，A基因在轉(zhuǎn)入果蠅中時(shí)上面帶有了mini-white基因，這個(gè)基因會(huì)使眼色變紅，但只能是淺紅。在實(shí)驗(yàn)之初轉(zhuǎn)入A的過(guò)程中，我們用到了P轉(zhuǎn)座子技術(shù)。在構(gòu)建tA品系果蠅時(shí)，隨著A基因轉(zhuǎn)座進(jìn)入果蠅的3號(hào)染色體，轉(zhuǎn)座子的一小部分序列很可能也被順帶著轉(zhuǎn)入了3號(hào)染色體中。而轉(zhuǎn)座子的存在一定程度上增加了染色體的不穩(wěn)定性和A基因在特定情況下繼續(xù)轉(zhuǎn)座至它處的可能性。我猜想，在那只特殊雄蠅的某些性腺細(xì)胞中，A基因正是因?yàn)檗D(zhuǎn)座而進(jìn)入了X染色體上（與臨近的mini-white基因一起轉(zhuǎn)的）。由于果蠅中X染色體的基因表達(dá)水平較其他染色體有一定特殊性，例如雄蠅X染色體的基因會(huì)過(guò)量表達(dá)，而雌蠅的X染色體的基因會(huì)減量表達(dá)。雖然A基因需要借助Gal4蛋白才能驅(qū)動(dòng)表達(dá)，表現(xiàn)出眼缺陷的性狀，但我猜想因?yàn)閄染色體的特殊性，使得其上的A基因在沒有Gal4的情況下仍進(jìn)行了微量地表達(dá)，從而表現(xiàn)出黑斑的性狀。又由于A是和它鄰近的miniwhite基因一起轉(zhuǎn)入的，所以還可以表現(xiàn)淺紅眼性狀來(lái)。綜上，因轉(zhuǎn)座進(jìn)入X染色體上的基因A，可能就是我們的異?；騌！六總結(jié)與收獲1養(yǎng)果蠅的小經(jīng)驗(yàn)：養(yǎng)果蠅足有兩個(gè)多月了，我也積累了不少經(jīng)驗(yàn)，拿出來(lái)曬曬吧。1）培養(yǎng)基狀況判定：培養(yǎng)基的狀況多變，有時(shí)黏，有時(shí)干。這既與最初配制培養(yǎng)基時(shí)的操作有關(guān)，也與瓶中果蠅的數(shù)目、活動(dòng)力有關(guān)。培養(yǎng)過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)放入蠅較多的瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，表面凹凸不平、顏色呈乳黃色，被活化得很好；相反放入蠅較少，或蠅活動(dòng)力較差的瓶的培養(yǎng)基，表面油亮、光滑，顏色呈暗黃色，甚至變黑。因此，為了讓培養(yǎng)基的狀況達(dá)到最佳，我們應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)瓶中盡量放置多一些的蠅，另外，對(duì)于在相近時(shí)間段內(nèi)孵化的成蠅蠅，能合并在一起養(yǎng)的，就合并在一起，而不選擇分散在多個(gè)瓶中。2）側(cè)放培養(yǎng)瓶：1）中提到，培養(yǎng)基有時(shí)會(huì)很黏。處于麻醉狀態(tài)的果蠅如果直接放入瓶中，很容易粘在瓶底。一旦粘住，我們即使使勁拍瓶底，往往也很難把果蠅救出，還容易釀成培養(yǎng)基傾瀉而下的慘劇；而如果用解剖針把果蠅從培養(yǎng)基上挑下，又容易損傷果蠅，而粘附在果蠅腳上或翅膀上的少量培養(yǎng)基，還會(huì)讓被搶救出果蠅又粘在瓶壁上，總之是后患無(wú)窮。后來(lái)我們?cè)囍雅囵B(yǎng)瓶側(cè)放，瓶底沖有光方向（目的是把瓶中原有果蠅光誘到瓶底，防止其飛出），把麻醉狀態(tài)的果蠅小心放在瓶壁上。把側(cè)倒的瓶移進(jìn)筐中，等到下一班的同學(xué)來(lái)時(shí)，果蠅早已蘇醒，這時(shí)再把瓶立起來(lái)就無(wú)妨了。3）轉(zhuǎn)瓶：轉(zhuǎn)瓶時(shí)，有時(shí)剛剛把迷瓶立起來(lái)，瓶蓋里那團(tuán)棉花就掉下來(lái)。因?yàn)槊藁▓F(tuán)上面的乙醚密度很高，粘在上面的果蠅基本無(wú)力生還。后來(lái)，我們盡量用棉花團(tuán)體積較大的瓶蓋，或直接用那種塞衛(wèi)生紙卷的瓶蓋（衛(wèi)生紙遇乙醚后縮小得幅度比棉花小很多，不易在瓶立起后脫落），而且盡量避免將迷瓶豎起，在把迷瓶側(cè)放的狀態(tài)下麻醉果蠅。4）用載玻片放果蠅：顯微鏡的視野很狹窄，當(dāng)一批果蠅被麻醉后，如果直接倒在顯微鏡上，我們需要用解剖針或毛筆把每個(gè)果蠅依次撥到視野下，才能觀察。這樣操作很麻煩，而且頻繁觸碰果蠅，也增加了對(duì)果蠅損傷的概率。我在同學(xué)的推薦下，開始試著將麻醉后的果蠅倒在載玻片上，把載玻片放在鏡下。這樣想觀察不同果蠅時(shí)，只需要輕輕移動(dòng)載玻片就可以了。更方便的是，在把觀察、挑選好的果蠅放回瓶里時(shí)，原來(lái)我需要一只只地用毛筆蘸著送回瓶中，現(xiàn)在只要把瓶側(cè)放后，瓶底沖著有光方向，將載玻片伸進(jìn)瓶口，輕輕抖兩下，上面的果蠅就落在瓶壁上了。5）性狀觀察：A雌雄鑒別：a性梳：雄性在第一對(duì)足第一跗節(jié)處有性梳，雌雄則沒有此特征。這個(gè)性狀觀察時(shí)需要翻動(dòng)果蠅身體達(dá)到最佳角度，還要變化焦距以對(duì)準(zhǔn)第一跗節(jié)所在平面，觀察起來(lái)較費(fèi)時(shí)間。b腹部背面條紋：左圖所示的，是雌雄果蠅的背面觀。腹部背面三條黑紋最后一條延伸為大黑斑為雄性，5條黑紋為雌性。這個(gè)性狀可以直接肉眼看出，可用于粗略判斷。c尾端：右圖所示的，是雌雄果蠅的腹面觀。雄性尾端腹側(cè)面有一圓圓的小黑點(diǎn)，雌性尾端不黑且略尖。這是我最常用到的觀察方法。對(duì)于剛剛孵化的果蠅，往往背部黑斑沒有形成，性梳發(fā)育也不完善，觀察尾端是否尖和交尾器是否存在不失為判