DB21-T 3169-2019柞蠶蛹蟲草生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B05

備案號：63301-2019DB21

遼寧省地方標準

DB21/T3169—2019

柞蠶蛹蟲草生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

TechnicalspecificationforproductionofcordycepsMilitarisinTussahsilkworm

DB21/T3169—2019

柞蠶蛹蟲草生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標準規(guī)定了柞蠶蛹蟲草生產(chǎn)的術(shù)語和定義，產(chǎn)地環(huán)境，生產(chǎn)設(shè)施，技術(shù)要求，采收，包裝及儲存。

本標準適用于柞蠶蛹蟲草生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準

GB/T23509食品包裝容器及材料分類

GB/T33320食品包裝材料和容器用膠粘劑

GB/T8321農(nóng)藥合理使用準則

GB/T12728食用菌術(shù)語

NY/T391綠色食品產(chǎn)地環(huán)境技術(shù)條件

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求

NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程

NY/T5099無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求

3術(shù)語和定義

GB/T12728界定的及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1柞蠶蛹ChineseOakSilkwormPupae

柞蠶幼蟲吐絲結(jié)繭后形成的與成蟲之間的過渡形態(tài)，初化的蛹表皮柔軟、體色也淺，之后表皮逐漸

硬化體色也變得越來越深，最終成為黃褐色或黑褐色。

3.2僵蛹Muscardinepupa

蛹蟲草菌（Cordycepsmilitaris）感染活體柞蠶蛹后硬化的蠶蛹。

3.3出草germination

子實體從柞蠶蛹體內(nèi)長出來的過程。

3.4柞蠶蛹蟲草Cordycepsmilitaris

由僵蛹體內(nèi)長出金黃色或橘紅色的棒狀子實體與僵蛹形成的復(fù)合體。

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4產(chǎn)地環(huán)境

應(yīng)選擇生態(tài)條件良好，遠離污染源的生產(chǎn)區(qū)域，符合NY/T391的要求。

5生產(chǎn)設(shè)施

5.1生產(chǎn)車間

應(yīng)設(shè)原料準備室、洗刷室、滅菌室、菌種制備室、接種室、發(fā)菌室、培養(yǎng)室、烘干室、包裝室、儲

存室。培養(yǎng)室有專用的通風口，通風口處需安裝過濾風裝置，四周及過道安裝40W的日光燈。

5.2生產(chǎn)設(shè)備

天平、高壓滅菌鍋、超凈工作臺或接種箱、恒溫振蕩器及培養(yǎng)箱、顯微鏡、空調(diào)等。

5.3培養(yǎng)架

層架要求金屬結(jié)構(gòu),架子高矮、大小、長寬根據(jù)生產(chǎn)場地條件決定,通常一個架子設(shè)六層,層距

0.4m，每層擺放4個塑料盤子,貨架間距人行道0.8m～1.0m。

5.4培養(yǎng)盤

應(yīng)符合GB/T23509和GB/T33320的要求，通常采用耐高溫硬質(zhì)塑料盤，規(guī)格為（30cm～60cm）

×（30cm～35cm）×（6cm～10cm）。

6技術(shù)要求

6.1菌種的選擇

應(yīng)符合NY/T1742的要求，引進有菌種生產(chǎn)資質(zhì)的單位的母種或自行分離獲得的母種，經(jīng)培育繁殖

和提純復(fù)壯獲得優(yōu)良菌株用于生產(chǎn)。

6.2柞蠶蛹的選擇

秋季柞蠶蛹作為培養(yǎng)基應(yīng)符合NY/T5099的規(guī)定。柞蠶繭健蛹率>90％，將柞蠶繭環(huán)割，選擇無破

損、健康的柞蠶蛹備用。

6.3水

生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749生活飲用水衛(wèi)生標準。

6.4生產(chǎn)菌種的制備

6.4.1培養(yǎng)基推薦配方

1馬鈴薯200.0g，蔗糖20.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B10.02g，水1000ml，

pH值6.0～7.0。

2葡萄糖25.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B10.02g，

水1000ml，pH值6.0～7.0。

6.4.2培養(yǎng)基配制

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配方1土豆去皮200g，切成1cm3小塊，放入鍋中加水文火煮沸30min后4層紗布過濾。在濾

液中加入蔗糖20g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，VB10.02g加水至1000mL，pH值6.0～7.0，用

三角瓶分裝(固體培養(yǎng)基加瓊脂18g)，在121℃下滅菌40min，備用。配方2稱取各組成成分依次溶

于1000mL水中，按配方1方法分裝滅菌。

6.4.3菌種的制備

母種在10℃～15℃、相對濕度60%的環(huán)境下可存放一個月，4℃條件下可保存一年左右。用接

種鏟從母種斜面中切取1cm2菌面(可稍帶培養(yǎng)基)放入液體菌種培養(yǎng)瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳

膠圈封扎瓶口，接種后在18℃～22℃溫度條件下，培養(yǎng)5d～7d，培養(yǎng)4d取樣對菌種進行分析檢測,

按照NY/T1846進行，均符合要求的為合格菌種。將液體菌種用無菌水按1:5比例稀釋成接種用菌液。

6.5接種

6.5.1接種前準備

接種室、培養(yǎng)室和相關(guān)容器必須提前徹底消毒，使用藥劑符合GB/T8321要求，選用高效、低毒、

低殘留藥劑，嚴格按照說明使用，也可以使用紫外燈、臭氧進行室內(nèi)消毒。將柞蠶蛹用清水沖洗干凈，

再經(jīng)70％濃度的酒精浸泡2min進行消毒，置于無菌托盤中淋干后立即接種。

6.5.2接種方法

用微量注射器每個柞蠶蛹接種200μL～400μL菌液，在蠶蛹翅下或腹部節(jié)間膜處，與蛹體平行進

針(向頭部方向)，均勻放入培養(yǎng)盤中。

6.6菌絲培養(yǎng)管理

接種后的柞蠶蛹送入培養(yǎng)室黑暗培養(yǎng)，溫度控制在17℃～20℃，室內(nèi)濕度60%～65%，通風換

氣保持空氣新鮮，5d后每天2次觀察清理病壞的柞蠶蛹，7d后相對濕度調(diào)整到65%～70%，隨機檢

查蛹體，確認菌絲布滿整個蛹體，12d～15d后全部硬化成僵蛹。

6.7出草管理

6.7.1保濕

用無菌水沖洗僵蛹數(shù)遍，放置在備好的無菌培養(yǎng)盤中，用聚乙烯薄膜將培養(yǎng)盤封口，薄膜留有透氣

孔。每天在培養(yǎng)架通道內(nèi)用加濕器噴霧1次，培養(yǎng)室相對濕度控制在70%。

6.7.2子實體原基培養(yǎng)

接種20d左右當蛹體表面長出白色菌絲，進行見光培養(yǎng)，白天以自然散射光為主，傍晚用日光燈

補助照明3h～4h，白天溫度控制在18℃～22℃，夜間降到15℃～17℃，相對濕度保持在75％，每天

上午通風1次，時間為30min，再經(jīng)過3d～5d的培養(yǎng)，長出黃色的小突起即形成了子實體原基。

6.8子實體培養(yǎng)管理

25d后進入子實體培養(yǎng)階段，溫度應(yīng)為16℃～20℃，濕度75%～80%，打開光照設(shè)備，光照強度

在500lx～800lx,光照時間每天14h～18h，逐漸加大室內(nèi)空氣的流通和交換，每天通風換氣2次，每

次30min。

7采收

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DB21/T3169—2019

7.1采收標準

當子實體長到5cm～8cm時，子實體頭部膨大飽滿，及時采收。

7.2采收與干燥方法

采收時用鑷子連蛹帶草一起從盤中提出,經(jīng)過整理,放入不銹鋼盤中,采取50℃～60℃烘干或冷凍

干燥等方法處理。

8包裝與儲存

8.1包裝

將干燥后的柞蠶蛹蟲草擺放在塑料盒中為宜，以免擠壓，用薄膜袋密封后，稱重包好。

8.2儲存

包裝好的柞蠶蛹蟲草應(yīng)置于冷柜或冷庫低溫儲存，溫度適于0℃～4℃。

9生產(chǎn)記錄

應(yīng)對每批生產(chǎn)建立獨立、完整的生產(chǎn)記錄檔案，保留生產(chǎn)過程中各個環(huán)節(jié)的有效記錄，以證實所有

的農(nóng)事操作遵循本指導性技術(shù)文件規(guī)定。記錄應(yīng)當保留兩年以上。具體參見附錄A。

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附錄A

(資料性附錄)

生產(chǎn)記錄表格

表A生產(chǎn)情況記錄表

單位名稱：負責人：電話：

菌種來源：種植區(qū)域地點：種植規(guī)模（盤）：

接種時間：出草時間：采收時間：

采收標準：產(chǎn)量（kg/m2）：

具體農(nóng)事操作記錄

日期生產(chǎn)活動內(nèi)容投入品內(nèi)容使用量使用設(shè)備操作人技術(shù)負責人

負責人：制表人：制表日期：

_____________

5

DB21/T3169—2019

前言

本標準按照GB/T1.1-2009標準化工作導則起草。

本標準由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本標準起草單位：遼寧省海洋水產(chǎn)科學研究院。

本標準主要起草人：李亞潔，孟楠，溫