分光光度計基線校正的原理和方法

【原創(chuàng)】關于分光光度計基線校正的原理和方法/shtml/20081115/1587186/對于雙光束而言在使用前必須要做基線校正（也稱為基線記憶），對于此項工作的原理和操作方法許多使用者的認識不盡相同；為此談談我的認識。

（一）為何要做基線校正？

眾所周知、光度計的光學系統(tǒng)基本是由光源（氘燈、鎢燈）—單色器（光柵、狹縫）—檢測器（光敏二極管、光電倍增管）等三部分組成的。在我們使用的波長區(qū)域中（一般紫外可見儀器均在190nm～1100nm范圍里，）上述部件在不同的波長下的響應值（光源的發(fā)射強度、單色器的色散強度、檢測器的放大倍數）均不相同；通俗地說、即使沒有樣品，儀器如果不做基線校正，那么在190nm至1100nm的范圍中，吸光值或透過率不會是一條直線，這是一種客觀的物理現象，如下圖；

盡管上圖反映的是單光束的能量圖，但在基線未校正狀態(tài)下，即使改用雙光束測量方式來掃描一個樣品，其所得到的圖譜或吸光值也是不可信的。

（二）被校正的基線種類和用途

（1）系統(tǒng)基線：

所謂系統(tǒng)基線就是儀器固有的波長范圍的總基線；例如一臺儀器出廠設計的波長全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統(tǒng)基線就是這個范圍。一般來講，作為分析人員對一臺儀器做全程掃描測試是比較少見的；之所以要做系統(tǒng)基線的目的一般是將儀器的光學系統(tǒng)的響應值校正到基本一致；這就類似馬拉松賽跑一樣，只要大家在同一起跑處（注意：不是起跑線）比賽，前后差幾米出發(fā)無所謂。

（2）用戶基線：

所謂用戶基線就是分析者自己設定的測量波長區(qū)域的一段基線；由于這是分析所需要的區(qū)域，為了保證測試的準確性，故用戶基線的校正是非常重要和必要的；這就類似百米賽跑一樣，運動員要在同一個起跑線上比賽而不能搶跑，否則無法準確計算成績。

（三）基線校正的方法

（1）系統(tǒng)基線：

系統(tǒng)基線的校正較為簡單，一般情況下樣品室內不放樣品，僅做光學系統(tǒng)的校正；如果一定要使用全波段的測量那另當別論。同時需要注意的是：系統(tǒng)基線無需經常校正，一般半個月或一個月校正校正一次即可。對有的儀器來說，系統(tǒng)基線校正過于頻繁反而會造成基線漂移嚴重。

（2）用戶基線校正：

正確的校正方法是：兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長范圍要大于分析波長范圍；例如、分析設定范圍為220nm～500nm，那么校正波長就要設定為210nm～510nm；等待校正結束后再將波長設定回到原來的220nm～500nm范圍。這種校正方法的優(yōu)點是：如果校正波長與分析波長完全吻合一致，有可能在校正后的基線兩端出現大的噪聲；如果校正范圍大于實際分析范圍并掐頭去尾后可以提高分析精度。我將這種校正方法起名為“豆芽菜原理”，目的是便于記牢；（因為我們吃豆芽菜時均要掐頭去根，僅吃中間部分，故以前的飯館將炒豆芽這道菜稱為“炒掐菜”；對不起、跑題了）。關于這種校正方法，許多使用者往往不知曉或忽略掉了，在此順便介紹給版友。

值得注意的是，有的者在做基線校正時，參比一側不放參比溶液，也就是用空氣來做參比對照。這種方法在可見區(qū)對有的樣品也許有時影響不大，但在紫外區(qū)影響就會很明顯了。嚴格的說，用空氣做參比所測得的結果不是真正意義上的校正光譜。

（四）基線校正的

（1）基線校正時要保證儀器有一定的預熱時間

（2）每更換一種參比溶液后均要重新做基線校正

（3）如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時測試結果會出現負值，此時要考慮使用何種溶液做基線校正了。

（4）做基線校正時要考慮試劑的使用波長范圍問題，因為有的試劑在某個波長以下的吸光度值會無限大，這時去做校正會超出儀器的有效量程范圍，無法得到