盲審上傳-定稿0301-復方烏雞片的制備工藝與質量標準研究

復方烏雞片制備工藝與質量標準研究分類號學校代碼10412密級學號2021013江西中醫(yī)學院碩士學位論文復方烏雞片制備工藝與質量標準研究學位申請人指導教師姓名專業(yè)名稱中藥專業(yè)申請學位類型科學學位論文辯論日期年月日

江西中醫(yī)學院碩士學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的碩士學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經特別加以注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本人的研究做出重要奉獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承當。學位論文作者簽名__________日期：年月日關于碩士學位論文使用授權的聲明本人完全了解江西中醫(yī)學院有關保存使用碩士學位論文的規(guī)定，同意學院保存或向國家有關部門機構送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權江西中醫(yī)學院可以將本碩士學位論文的全部或局部內容編入有關數據庫進行檢索?？梢圆捎糜坝?、縮印或其他復印手段保存和匯編本碩士學位論文?！脖Ｃ苷撐脑诮饷芎髴袷卮艘?guī)定〕論文作者簽名_________論文導師簽名__________日期：年月日

中文摘要目的：復方烏雞片由烏雞、山藥、白術、茯苓、熟地黃、牡丹皮、黃芪(蜜灸)、黨參、川芎、當歸、白芍(酒炒)、五味子(酒制)共十二味藥精制而成，具補氣血，益肝腎。臨床主治婦女氣血兩虛或肝腎兩虛的月經不調，脾虛或腎虛帶下。對復方烏雞片的制備工藝、質量標準和穩(wěn)定性三方面進行了研究與考察，確定了制劑工藝，質量檢測指標，產品有效期，使之更適用于工業(yè)化大生產的需要，對推進藥物開發(fā)戰(zhàn)略的實施，具有重大的意義。方法：1.1提取工藝研究烏雞提取工藝研究以得膏率和含氮量為指標,考察提取溶劑用量對試驗結果的影響，結果確定提取溶劑用量為藥材量的2倍。山藥、黃芪等藥材提取工藝研究由于原提取工藝條件較為詳細，因此仍沿用“復方烏雞口服液〞中藥材的提取工藝，驗證了相關參數。1.2成型工藝根據片劑的制劑要求，通過對所用輔料進行篩選，確定處方及制法。制法：稱取干膏混合物、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素混勻，用3%PVPk30乙醇溶液作為粘合劑制成顆粒，60℃烘干，整粒，參加顆粒量1%的硬脂酸鎂，混勻，壓片，包薄膜衣，即得。2.成品的質量標準研究2.1鑒別優(yōu)化了方中牡丹皮、當歸、白芍的薄層鑒別方法。2.1.2建立了方中川芎藥材的薄層鑒別方法2.3含量測定原制劑質量標準中，只規(guī)定了總氮量的測定，無專屬性，但考慮烏雞為處方中君藥，其蛋白質經水解成為氨基酸和多肽，故本質量標準中仍保存該項測定，通過10批樣品的檢測結果，擬定“〞。另增加了用高效液相色譜法測定方中芍藥苷的含量，方法學實驗說明，在以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，乙腈:0.1mol/L磷酸〔15:～μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程：Y=1188801X-21765，r=0.9997，3回收率為100.95%，RSD=1.39%〔n=6〕，通過10批樣品的測定結果，擬定“本品每粒含芍藥苷〔C23H28O11〞。3．穩(wěn)定性考察對制劑進行了9個月的長期穩(wěn)定性考察，說明本品內在質量穩(wěn)定；6個月加速實驗〔溫度40?C±2?C，相對濕度75%±5%〕，說明本品內在質量穩(wěn)定。故暫定有效期為24個月。結果：1．確定了復方烏雞片的生產工藝。2．建立了丹皮酚對照品；當歸、川芎對照藥材；白芍對照藥材、芍藥苷對照品的薄層色譜鑒別方法。3.首次建立了芍藥苷的HPLC含量測定方法，該方法準確、快速、靈敏，可以作為復方烏雞片的質量控制指標。討論：1．原復方烏雞口服液含量測定只規(guī)定了總氮量的測定，無專屬性，但考慮烏雞為處方中君藥，其蛋白質經水解成為氨基酸和多肽，故本質量標準中仍保存該項測定，本制劑同時以芍藥苷為質控指標，采用高效液相法測定，簡單易行，靈敏度高。2.復方烏雞片的制備過程中，成型工藝很關鍵，實驗中對處方的配比、賦形劑的選擇與用量進行了考察，還有待于在今后的生產中進一步完善。劑，使之成為具有較高生物利用度，服用攜帶方便的制劑，從根本上克服了原制劑的缺點，根本實現了“三效、三小、五方便〞的目的，同時也將創(chuàng)造更大的經濟效益和社會效益。關鍵詞：復方烏雞片；芍藥苷；高效液相色譜法；制備工藝；質量標準StudyonthePreparationProcessandQualityStandardoftheCompoundWujiTablet[Author]Directedby[Abstract]ObjectiveTheCompoundWujiTabletconsistsof12ChinesemedicinewhichareGallusgallus,Dioscoreaerhizoma,Rhizomaatractylodis,Poriacocos,RadixRehmanniaePraeparata,CortexMoutan,RadixAstragalipraeparatacummelle,Radixcodonopsis,Rhizomachuanxiong,Radixangelicaesinensis,Radixpaeoniaealba(wine-processed)andFructusschisandraechinensis(wine-processed).Itisappliedmainlytobenefitqiandblood,andreinforceliverandkidneyandmainlyforthetreatmentofclinicalwomen’sabnormalmenstruation,spleendeficiency,ormorbidleukorrheaofkidneydeficiencycausedbythedeficiencyofbothqiandbloodorthedeficiencyofliverandkidney.Bythestudyonthreeaspectsincludingthepreparationprocess,qualitystandardsandstabilizationoftheCompoundWujiTablet,preparationprocess,qualityinspectionindexes,andtheproductionperiodofvalidityweredeterminedandbetterappliedtomeettheneedsofthemassproductionwhichhasgreatsignificanceforthepromotionofdrugdevelopment.Methods:ProcessresearchExtractionprocessresearchExtractionprocessresearchofGallusgallusWiththeextractyieldandnitrogencontentasmarkersandinspectionoftheinfluenceontheexperimentresultsofdifferentamountsofextractionsolvent,theamountofextractionsolventwasdetermined,thatistwiceasmuchastheamountofthemedicinalmaterials.ExtractionprocessresearchofDioscoreaerhizoma,Radixastragalipraeparatacummelleetc.Astheoriginalprocessisrelativelydetailed,theextractionprocesscontinuestousetheoneof‘CompoundWujiOralLiquid’fortheextractionoftheChinesemedicinalmaterialsandtherelatedparameterswereverified.1.2StudyontheprocessofpreparingdosageformBasedontabletspreparationrequirements,prescriptionandpreparationprocessweredeterminedbyscreeningexcipientsused.Method:weighandmixdryextractmixture,microcrystallinecelluloseandL-HPC,makeintoparticlesbyusing3%PVPk30EthanolSolution,dryat60℃,dressingparticles,add1%magnesiumstearate,doblending,pelleting,andfilmcoatingStudyonthequalitystandardsofproductionIdentificationOptimizedthemethodofthinlayeridentificationforCortexMoutan,RadixangelicaesinensisandRadixpaeoniaealbaintheprescription.EstablishedthethinlayeridentificationforRhizomachuanxiongintheprescription.ContentdeterminationAsthereisonlythetotalnitrogencontentdeterminationofnospecificityintheoriginalpreparationqualitystandards,consideringGallusgallusbelongedtothesovereigndrugintheprescription,whoseproteinwillbehydrolyzedintoaminoacidandpeptide,thedeterminationwasretainedinthisqualitystandards.Basedontheresultsofthe10samples,itisdeterminedthat’thenitrogencontent(N)oftheproductionisnotlessthan5.5mgpertablet’Also,themethodusingHPLCtodeterminethecontentofpaeoniflorinintheprescriptionwasadded.TheMethodologyExperimentshowsthatusingoctadecylester-bondedmonolithicsilicaasthefillingagent,acetonitrile:0.1mol/Lphosphoricacid(15:85)asflowphase，under230nmdetectionwavelengthofgaschromatography,thereisnodisturbancefactortopaeoniflorin,andbaselineseparationcanbeshown.Theinputofpaeoniflorinbetween0.1079-1.0790μgshowsfitnesslinearrelationshipwiththepeakarea.Regressionequations:Y=1188801X-21765,r=0.9997,therecoveryrateis100.95%,RSD=1.39%(n=6),basedontheresultsofthe10samples,itisdeterminedthat‘thepaeoniflorin(C23H28O11)contentofthisproductionisnotlessthan0.85mgpertablet’Studyonthestability9-month-long-termstabilitiesforthepreparationshowstheinternalqualityisstable:6-month-accelerationtest(temp.40℃±2℃,relativehumidity75%±5%)showstheinternalqualityofthepreparationisstable.Therefore,theResults:TheproductionprocessoftheCompoundWujiTabletwasestablished.Paeonolstandardsubstance;Radixangelicaesinensis,Rhizomachuanxiongreferencecrudeherb;Radixpaeoniaealbareferencecrudeherb,PaeoniflorinStandardsubstanceofthethinlayerchromatographyidentification.EstablishedthemethodusingHPLCtodeterminethecontentofpaeoniflorin.Thismethod,whichisaccurate,rapidandsensitive,canbeusedasthequalitycontrolindexoftheCompoundWujiTablets.Discussion:Asthereisonlythetotalnitrogencontentdeterminationofnospecificityintheoriginalpreparationqualitystandards,consideringGallusgallusbelongedtothesovereigndrugintheprescription,whoseproteinwillbehydrolyzedintoaminoacidandpeptide,thedeterminationwasretainedinthisqualitystandards.Paeoniflorinisusedasthequalitystandardofthepreparationatthesametime.ThemethodHPLCwhichiseasytooperateandsensitivewasapplied.TheprocessofpreparingdosageformoftheCompoundWujiTabletiscritical.Intheexperiment,theproportionofprescription,theselectionandthedosageoftheexcipientwerestudied,stilltheprocessneedtobeimprovedinthefutureproduction.Makingthisproductionintotabletswhichhaverelativelyhighbioavailabilityandtheconveniencetotakeandcarrysupplementedthedisadvantagesoftheoriginalpreparation.Thepurpose‘threeeffects,threesmallsandfiveconveniences’wasbasicallyachievedandgreatereconomicalandsocialbenefitswillbecreatedatthesametime.Keywords:CompoundWujiTablet;Paeoniflorin;HPLC;Preparationprocess;Qualitystandard目錄TOC\o"1-2"\h\z\u引言 1正文 21復方烏雞片工藝研究 2處方來源 2工藝路線設計 2藥材的來源和鑒定 4提取工藝研究 5制劑工藝研究 7各輔料的來源及在處方中的作用 11確定的生產工藝路線 112質量標準研究 13鑒別 13檢查 14含量測定 153質量標準起草說明 19復方烏雞片質量標準草案 19復方烏雞片質量標準草案起草說明 224復方烏雞片穩(wěn)定性研究實驗 28樣品來源 28試驗設備 28檢查工程 284.4加速穩(wěn)定性考察 284.5長期穩(wěn)定性考察 304.6結論 32結論 33參考文獻 35附錄 36文獻綜述 41致謝 57個人簡介 58PAGE12引言復方烏雞片是由復方烏雞口服液經劑型改革而來，主要以江西泰和武山烏骨雞，配以多味滋陰補腎、調氣養(yǎng)血的中藥組成，具有補氣血、益肝腎功能，用于氣血兩虛或肝腎兩虛月經不調；脾虛或腎虛帶下，是婦科疾病的一味良藥。中醫(yī)治病遵循?內經?“謹守病機〞及“謹察陰陽所在而調之，以平為期〞的宗旨，月經不調屬氣血缺乏，肝腎兩虛者，治當補氣行氣，養(yǎng)血活血，滋陰補腎為主，到達調理經血的目的；而婦女體虛、脾虛失運，腎虛失固致內濕加重，使帶脈失約，任脈不固，帶下量明顯增多，稱虛證帶下病，治當調補脾腎為主，到達健脾固腎、祛濕止帶的目的。烏雞白鳳丸，被譽為婦科三大圣藥之一，目前已有百年歷史。是古書?濟陰綱目?中大小烏雞丸的加減方，由烏骨雞、人參、黃芪、丹參、當歸、白芍、川芎、生地、熟地、甘草、香附、鹿角膠、鹿角霜、銀柴胡等20味中藥制成。復方烏雞口服液源于烏雞白鳳丸，該藥丸收載于明朝?壽世保元?書中，系婦科常用方，歷來被推為治療婦女體虛血虧，月經不調，崩漏帶下等癥的食藥。方中烏骨雞在?本草綱目?中曰其可“補虛羸勞弱，治婦女崩中帶下，一切虛損諸病〞；熟地、山藥、五味子可補血健脾、滋補腎陰；白芍養(yǎng)肝、當歸可養(yǎng)血調經；黃芪、黨參可補中益氣；川芎有行氣活血之成效，諸藥相伍，具有補氣血、益肝腎、健脾胃之功能，因而本方對氣血兩虛或肝腎兩虛月經不調和脾虛或腎虛帶下病是切中病機?，F代研究證實烏雞白鳳丸具有調節(jié)內分泌功能、促進腎上腺皮質功能作用，可增加肝糖原，保護肝損傷，降低轉氨酶，抑制炎癥反響，減輕關節(jié)腫脹等。近代烏雞白鳳丸臨床應用范圍越來越廣泛，尤其是近年我所將傳統(tǒng)烏雞白鳳丸通過劑型改革，研制成口服液、膠囊、顆粒等實用、方便、效佳的新劑型，賦予了傳統(tǒng)名方新的活力，同時也取得了較好的社會效益和經濟效益。這次在復方烏雞口服液的根底上進一步開發(fā)成復方烏雞片，使服用和攜帶〔體積小〕更為方便，適應更多患者用藥的習慣和喜好，為醫(yī)患雙方提供多一種劑型選擇，有利于臨床更進一步的推廣應用。同時，烏雞又為我省道地藥材之一，進一步開發(fā)我省的烏雞特色藥品，也有助于促進江西老區(qū)的經濟進一步開展。正文1復方烏雞片工藝研究處方來源本品種處方來源于部頒標準第7冊收載的“復方烏雞口服液〞[WS3–160(Z-54)-94(Z)]，由烏雞、山藥、白術、茯苓、熟地黃、牡丹皮、黃芪(蜜灸)、黨參、川芎、當歸、白芍(酒炒)、五味子(酒制)共十二味藥精制而成。功能補氣血，益肝腎。臨床主治婦女氣血兩虛或肝腎兩虛的月經不調，脾虛或腎虛帶下。由以下流程圖可知，原工藝條件根本合理，但尚有未明確的工藝參數，故我們對局部工藝條件進行了研究，以明確其工藝參數。復方烏雞片制備工藝與質量標準研究生產工藝流程圖調pH值至5~6，冷藏過夜加稀硫酸回流3小時，雞塊宰殺，烏雞濾液去除油脂，濾過濾過去毛、爪、腸減壓濃縮濾液1、調pH值至5~6，冷藏過夜加稀硫酸回流3小時，雞塊宰殺，烏雞濾液去除油脂，濾過濾過去毛、爪、腸減壓濃縮濾液稠膏稠膏粉碎干膏粉Ⅰ減壓枯燥粉碎干膏粉Ⅰ減壓枯燥干膏Ⅰ濾液2、濾液切成碎塊，加7倍量水浸漬3h，合并山藥、黨參、茯苓、黃芪切成碎塊，加7倍量水浸漬3h，合并山藥、黨參、茯苓、黃芪清膏減壓濃縮至相對密度1.15(60℃)加5倍水量煎煮30min加熱煎煮30分鐘，濾過清膏減壓濃縮至相對密度1.15(60℃加5倍水量煎煮30min加熱煎煮30分鐘，濾過濾液濾渣濾液濾渣減壓濃縮回收乙醇加乙醇調節(jié)含醇量為50%，濾過減壓濃縮回收乙醇加乙醇調節(jié)含醇量為50%，濾過干膏粉Ⅱ粉碎干膏Ⅱ濃縮液干膏粉Ⅱ粉碎干膏Ⅱ濃縮液濾液靜置過夜，濾過靜置過夜，濾過3、70%乙醇滲漉減壓濃縮濃縮液回收乙醇滲漉液粉碎藥材粗粉干膏粉Ⅲ粉碎干膏Ⅲ白術、牡丹皮、熟地黃、川芎、當歸、白芍、五味子70%乙醇滲漉減壓濃縮濃縮液回收乙醇滲漉液粉碎藥材粗粉干膏粉Ⅲ粉碎干膏Ⅲ白術、牡丹皮、熟地黃、川芎、當歸、白芍、五味子4、混勻制粒干膏粉Ⅰ、Ⅱ混勻制粒干膏粉Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ干顆?？菰餄耦w粒混合物料干顆?？菰餄耦w粒混合物料微晶纖維素低取代羥丙基纖維素包薄膜衣素片混勻微晶纖維素低取代羥丙基纖維素包薄膜衣素片混勻檢驗,分裝成品壓片 檢驗,分裝成品壓片硬脂酸鎂硬脂酸鎂復方烏雞片制備工藝與質量標準研究來源和鑒定藥材來源.1烏雞購于江西泰和縣產地江西泰和縣.2黃芪〔蜜炙〕購于樟樹市川陜藥材站產地內蒙.3山藥購于樟樹市川陜藥材站產地湖南.4黨參購于樟樹市川陜藥材站產地甘肅.5白術購于樟樹市川陜藥材站產地浙江.6川芎購于樟樹市川陜藥材站產地四川.7茯苓購于樟樹市川陜藥材站產地湖南.8當歸購于樟樹市川陜藥材站產地甘肅.9熟地黃購于樟樹市川陜藥材站產地河南.10白芍(酒炒)購于樟樹市川陜藥材站產地安徽.11牡丹皮購于樟樹市川陜藥材站產地安徽.12五味子(酒制)購于樟樹市川陜藥材站產地遼寧.2鑒定依據.2.1烏雞烏骨雞〔Gallusgallusdomesticusbrisson〕，俗名烏雞，藥雞、武山雞、絨毛雞、黑腳雞。體軀短而小。頭小，頸短，具肉冠，耳葉綠色，略呈紫藍。遍體毛羽色白，除兩翅外，全呈絨絲狀；頭上有一撮細毛突起，下頜上連兩頰面生有較多的細短毛。皮、肉、骨、嘴均烏色。翅較短，而主翼羽的羽毛呈分裂狀，致飛翔力特別強。毛腳，5爪。跖毛多而密。.2.2黃芪〔蜜炙〕本品為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembramaceus(Fisch.)Bge.的枯燥根的炮制加工品。本品應符合中國藥典2005年版一部第213頁炙黃芪項下的有關規(guī)定。.2.3山藥本品為薯蕷科植物薯蕷DioscoreaoppositaThunb.的枯燥根莖。本品應符合中國藥典2005年第一部第21頁山藥項下的有關規(guī)定。本品為桔?？浦参稂h參Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參Codonopsispilosula或川黨參CodonopsistangshenOliv.的枯燥根。本品應符合中國藥典2005年版一部第199頁黨參項下的有關規(guī)定。.2.5白術本品為菊科植物白術AtractylodesmacrocephalaKoidz的枯燥根莖。本品應符合中國藥典2005年版一部第68頁白術項下的有關規(guī)定。.2.6川芎本品為傘形科植物川芎LigusticumChuanxiongHort的枯燥根莖。本品應符合中國藥典2005年版一部第28頁川芎項下的有關規(guī)定。.2.7茯苓本品為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos〔Schw〕Wolf的枯燥菌核。本品應符合中國藥典2005年版一部第166頁茯苓項下的有關規(guī)定。.2.8當歸本品為傘形科植物當歸Angelicasinensis〔Oliv〕Diels的枯燥根。本品應符合中國藥典2005年版一部第89頁當歸項下的有關規(guī)定。.2.9熟地黃本品為玄參科植物地黃RehmanniaglutinosaLibosch.的塊根的炮制加工品。本品應符合中國藥典2005年版一部第83頁熟地黃項下的有關規(guī)定。.2.10白芍〔酒炒〕本品為毛莨科植物芍藥PaeoniaLactifloraPall.的枯燥根。本品應符合中國藥典2005年版一部第69頁白芍項下的有關規(guī)定。.2.11牡丹皮本品為毛莨科植物牡丹PaeoniaSuffruticosaAndr.的枯燥根皮。本品應符合中國藥典2005年版一部第119頁牡丹皮項下的有關規(guī)定。.2.12五味子〔酒制〕本品為木蘭科植物五味子SchisandraChinensis〔Turcz〕Baill的枯燥成熟果實。本品應符合中國藥典2005年版一部第45頁五味子項下的有關規(guī)定。以上藥材均由江西省藥物研究所朱良輝教授鑒定。提取工藝研究復方烏雞口服液是我單位研制成功的新藥，其提取分為三局部，各局部提取工藝均較為詳細，其具體提取工藝如下：1、烏雞宰殺去毛、爪、腸洗凈。切成碎塊，參加倍量稀硫酸，加熱回流3小時，過濾，濾液用20%碳酸鈣溶液調至PH5～6，冷藏過夜，去除油脂，過濾，濾液水浴濃縮至1:1濃度，備用。2、山藥、茯苓、黨參、炙黃芪切成碎塊，加水7倍量，浸漬3小時，加熱、煮沸30分鐘，過濾，合并兩次濾液，濃縮至約1:4濃度，加倍量95%乙醇處理，靜置過夜，過濾回收乙醇，并濃縮至1:1的濃度，備用。3、白術、牡丹皮、熟地黃、川芎、當歸、酒白芍、酒制五味子打成粗粉，加70%乙醇，浸漬3天，滲漉。收集滲漉液，藥渣再滲漉一次，合并兩次漉液，并減壓〔-600mmHg〕回收乙醇濃縮至1:1的濃度，待用。由于原提取工藝條件較為詳細，因此，我們僅對其中烏雞的提取溶劑用量進行研究，其余藥材提取工藝沿用“復方烏雞口服液〞中的提取工藝。烏雞提取工藝研究烏雞宰殺后，除去毛、爪、腸等，冼凈，切成碎塊，分成3份，分別加稀硫酸2、4、6倍量，加熱回流，濾過，濾液用20%碳酸鈣溶液調pH值至5～6，冷藏過夜，去除油脂，濾過，濾液濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉。以得膏率和含氮量為指標進行比擬，結果見表1-1。表1-1烏雞不同提取溶劑用量比擬試驗結果烏雞用量(g)提取溶劑用量烏雞干膏得率(%)含氮量(mg/g)15002倍15004倍15006倍結果說明，提取溶劑用量對試驗結果影響不大，考慮到稀硫酸腐蝕性較強，因此確定提取溶劑的用量為藥材量的2倍。山藥、黃芪等四味藥材提取工藝研究由于原提取工藝條件較為詳細，因此，我們仍沿用“復方烏雞口服液〞中山藥、黃芪等藥材的提取工藝，經3批重復試驗，結果見表1-2。表1-2山藥、黃芪等藥材提取工藝研究試驗結果提取批次藥材用量(g)干膏量(g)得膏率(%)平均得膏率(%)126163002261628532616315由上表可見，試驗結果重復性較好，因此山藥、黃芪等四味藥材的提取工藝沿用“復方烏雞口服液〞中的工藝條件，具體如下：山藥、黃芪、黨參、茯苓切碎塊，加水7倍量，浸漬3小時，加熱煮沸30分鐘，濾過，收集濾液，藥渣再加5倍量的水，煮沸30分鐘，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.15(60℃)，加乙醇至含醇量為50%，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至適量，減壓枯燥熟地黃等七味藥材提取工藝研究由于原提取工藝條件較為詳細，因此，我們仍沿用“復方烏雞口服液〞中熟地黃等七味藥材的提取工藝，照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法〔中國藥典2000年版一部附錄IO〕，用8倍量70%乙醇作溶劑進行滲漉，控制流速3ml/min/kg。經3批重復試驗，結果見表1-3。表1-3熟地黃等七味藥材提取工藝研究試驗結果提取批次藥材用量(g)干膏得量(g)干膏得率(%)干膏平均得率(%)1281893592281881032818910由上表可見，試驗結果重復性較好，因此熟地黃等七味藥材的提取工藝沿用“復方烏雞口服液〞中的工藝條件，具體如下：熟地黃、白術、白芍、牡丹皮、川芎、當歸及五味子粉碎成粗粉，用70%乙醇浸漬3天后進行滲漉，控制流速3ml/min/kg，收集滲漉液，濾過，濾液低溫減壓回收乙醇，濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉。制劑工藝研究處方篩選根據片劑的制劑要求，對所用輔料進行篩選，在保證質量的前提下，考慮本錢因素，最終確定處方組成。方法：將各藥材提取干膏分別粉碎，混勻，根據表4處方設計分別與各輔料混勻，制備工藝均采用濕法制?？菰锖髩浩?，以顆粒成型性、可壓性、崩解時限為指標進行篩選，結果見表1-4、1-5。表1-4制劑成型工藝研究試驗處方〔500片〕處方原輔料1234干膏混合物(g)130130130130微晶纖維素(g)50505050羧甲基淀粉鈉(g)20///低取代羥丙基纖維素(g)/20/20交聯聚維酮(g)//20/80%乙醇(ml)202020/3%PVPk30乙醇溶液(ml)///20硬脂酸鎂(g)2222表1-5制劑成型工藝研究試驗結果處方顆粒成型性可壓性片重差異崩解時限(min)1一般可壓性一般，硬度較小，3kg符合要求232一般可壓性一般，硬度較小，3kg符合要求223一般可壓性一般，硬度較小，3kg符合要求124較好可壓性好，硬度適中，6kg符合要求35結果說明，以上四個處方均符合要求，從本錢角度以及包衣工藝對素片的要求考慮，我們選擇處方4作為最終確定處方。確定處方綜合以上處方篩選試驗結果，確定處方如下：干膏混合物1份微晶纖維素 0.4份低取代羥丙基纖維素0.15份硬脂酸鎂適量制成 1000片制法：稱取干膏混合物、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素混勻，用3%PVPk30乙醇溶液作為粘合劑制成顆粒，60℃烘干，整粒，參加顆粒量1%的硬脂酸鎂顆粒性狀考察取復方烏雞浸膏粉適量，參加低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素，混勻，以適量的3%PVPK30〔用25%乙醇配制〕為粘合劑，用40目篩制粒，60?C枯燥，整粒；參加硬脂酸鎂，過40目篩，整粒，測休止角。結果見表1-6。表1-6藥粉顆粒休止角測定編號123休止角30°31°31°用3%PVPK30〔用25%乙醇配制〕為粘合劑制粒，片子成型性較好，硬度適中，崩解時限為30分鐘。1.5.4包衣由于本品素片易吸潮，且味苦，故我們采用薄膜包衣的方法。試驗說明選用全水胃溶型藥用薄膜包衣料進行包衣后，對藥片的崩解無影響，同時改善了藥片外觀，到達了防潮和掩蓋苦味的目的，同時提升了產品檔次。歐巴代一Y一1一700015g80%乙醇250ml1000片片芯增重3%按處方量將歐巴代一Y一1一7000溶于80%乙醇溶液中，浸泡10min，攪拌均勻，經膠體膜研磨20min，過200目篩，除去粗顆粒，以防堵塞噴槍，制成膜液備用。將壓制的復方烏雞片篩去細粉置于包衣鍋內預熱至45℃左右，啟動空壓機，翻開空氣閥，并調節(jié)兩者的流量使成細而均勻的霧狀，噴霧速度以控制不造成粉末飛揚又能及時枯燥為宜，在包衣過程中膜液持續(xù)攪拌。包衣設備:高速包衣鍋輸液設備:蠕動泵〔40mm硅膠管)噴液設備:自動噴槍(噴槍直徑1.4mm，高平形噴霧)噴嘴和片床間距:150mm進風量:8m2/min進風溫度:85℃片床溫度:41℃左右霧化壓力:2bar進料流速:2g/min轉速：15～20r/min最后枯燥:放在淺盤，置于硅膠枯燥室中3～5小時，即得。包衣片外觀:完整，光滑。綜上所述，確定復方烏雞片的制法為:處方中十二味藥材，山藥、黃芪、黨參、茯苓切碎塊，加7倍量的水，加熱煮沸30分鐘，濾過，收集濾液。藥渣再加5倍量的水，煮沸30分鐘，濾過，合并濾液，濃縮，加乙醇適量，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉，備用；另取烏雞宰殺后，除去毛、爪、腸等，冼凈，切成碎塊，加稀硫酸適量，加熱回流提取3小時，濾過，濾液調pH值至5～6，冷藏過夜，脫脂，濾過，濾液濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉，備用；其余熟地黃、白術、白芍、牡丹皮、川芎、當歸及五味子粉碎成粗粉，用70%乙醇浸漬后進行滲漉，收集滲漉液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉，備用；將上述三種干膏細粉混勻，取1份干膏粉，參加0.4份微晶纖維素、0.15份低取代羥丙基纖維素，混勻，用3%PVPk30乙醇溶液作為粘合劑制成顆粒，60℃烘干，參加顆粒量1%的硬脂酸鎂，混勻，1.5.5為了進一步考察工藝的可行性和穩(wěn)定性，我們按10倍制劑處方量進行連續(xù)3批中試生產，并對產品進行檢驗，結果見表1-7～1-9。表1-7三批中試提取工藝主要參數批號藥材投料量(kg)干膏量(kg)干膏總量(kg)20210501烏雞山藥等四味4.36熟地黃等七味20210502烏雞山藥等四味熟地黃等七味20210503烏雞山藥等四味熟地黃等七味表1-8三批中試生產試驗結果批號202105012021050220210503投料干膏混合物(kg)微晶纖維素(kg)11.03低取代羥丙基纖素(kg)硬脂酸鎂(kg)制粒制粒篩網目數(目)161616顆?？菰餃囟?℃)606060整粒篩網目數(目)161616顆粒水分(%)顆粒量(kg)壓片片子硬度(kg)半成品量(kg)包衣進風溫度(℃)858585片床溫度(℃)414140霧化壓力(bar)222進料流速(g/min)3～43～43～4轉速(r/min)15～2015～2015～20包衣增重(%)333結論理論量(片)100001000010000成品量(片)945695169468成品率(%)表1-9三批中試生產產品質量檢驗結果批號崩解時限(分鐘)重量差異鑒別含量(mg/片)(1)(2)(2)總含氮量芍藥苷2021050130符合規(guī)定呈正反響呈正反響呈正反響2021050231符合規(guī)定呈正反響呈正反響呈正反響2021050330符合規(guī)定呈正反響呈正反響呈正反響由以上結果可知，三批中試生產重復性較好，成品率在95%左右，產品質量符合本品質量標準草案要求，說明本工藝條件合理，能適應工業(yè)化大生產。1.6各輔料的來源及在處方中的作用1.各輔料在處方中的作用微晶纖維素 填充劑、崩解劑低取代羥丙基纖維素崩解劑硬脂酸鎂潤滑劑聚維酮K30粘合劑歐巴代包衣料包衣材料，改善片劑的外觀1.輔料來源及質量標準輔料來源見表1-10，其質量標準附后。表1-10輔料來源及質量標準輔料名稱來源質量標準微晶纖維素上海昌為醫(yī)藥輔料技術中國藥典2005年版二部低取代羥丙基纖維素深圳市勁峰工貿開展中國藥典2005年版二部聚維酮K30博愛新開源藥業(yè)中國藥典2005年版二部硬脂酸鎂湖州展望藥業(yè)化學中國藥典2005年版二部歐巴代包衣料上?？房蛋录夹g滬衛(wèi)藥準字(1998)第235001號根據工藝研究結果，確定了以下生產工藝流程圖，在符合原工藝條件根本上，明確了工藝參數。復方烏雞片制備工藝與質量標準研究加兩倍稀硫酸回流3小時，生產工藝流程加兩倍稀硫酸回流3小時，調pH值至5~6，冷藏過夜雞塊宰殺，烏雞濾液去除油脂，濾過濾過去毛、爪、腸減壓濃縮濾液1、調pH值至5~6，冷藏過夜雞塊宰殺，烏雞濾液去除油脂，濾過濾過去毛、爪、腸減壓濃縮濾液稠膏稠膏粉碎干膏粉Ⅰ減壓枯燥粉碎干膏粉Ⅰ減壓枯燥干膏Ⅰ濾液2、濾液切成碎塊，加7倍量水浸漬3h，合并山藥、黨參、茯苓、黃芪切成碎塊，加7倍量水浸漬3h，合并山藥、黨參、茯苓、黃芪清膏減壓濃縮至相對密度1.15(60℃)加5倍水量煎煮30min加熱煎煮30分鐘，濾過清膏減壓濃縮至相對密度1.15(60℃加5倍水量煎煮30min加熱煎煮30分鐘，濾過濾液濾渣濾液濾渣減壓濃縮回收乙醇加乙醇調節(jié)含醇量為50%，濾過減壓濃縮回收乙醇加乙醇調節(jié)含醇量為50%，濾過干膏粉Ⅱ粉碎干膏Ⅱ濃縮液干膏粉Ⅱ粉碎干膏Ⅱ濃縮液濾液靜置過夜，濾過靜置過夜，濾過加8倍70%乙醇滲漉加8倍70%乙醇滲漉減壓濃縮濃縮液回收乙醇滲漉液粉碎藥材粗粉干膏粉Ⅲ粉碎干膏Ⅲ白術、牡丹皮、熟地黃、川芎、當歸、白芍、五味子減壓濃縮濃縮液回收乙醇滲漉液粉碎藥材粗粉干膏粉Ⅲ粉碎干膏Ⅲ白術、牡丹皮、熟地黃、川芎、當歸、白芍、五味子控制流速3控制流速3ml/min/kg4、混勻制粒干膏粉Ⅰ、Ⅱ混勻制粒干膏粉Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ干顆粒枯燥濕顆?；旌衔锪细深w粒枯燥濕顆?；旌衔锪衔⒕Юw維素低取代羥丙基纖維素包薄膜衣素片混勻微晶纖維素低取代羥丙基纖維素包薄膜衣素片混勻檢驗,分裝成品壓片 檢驗,分裝成品壓片硬脂酸鎂硬脂酸鎂復方烏雞片制備工藝與質量標準研究2質量標準研究2.1鑒別建立了方中牡丹皮的薄層鑒別本實驗仍參照原制劑質量標準中的該項鑒別，以牡丹皮中主要成分丹皮酚為對照，以含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G為薄層板，展開劑為環(huán)己烷-醋酸乙酯〔3:1〕，以鹽酸酸性5%的三氯化鐵乙醇溶液為顯色劑；通過陰性對照實驗及三批樣品的實驗觀察，說明本法成立。建立了方中當歸、川芎的薄層鑒別原制劑標準中此項薄層為當歸的鑒別，并且實驗過程中發(fā)現，除去當歸的陰性對照仍有干擾，并證實干擾來自川芎，這是因為方中川芎和當歸都含有藁本內酯類成分，我們試圖利用川芎中另含生物堿成分的不同與當歸加以區(qū)分，但試驗沒有成功。故陰性對照除去了當歸、川芎兩味藥材，本實驗以當歸、川芎對照藥材分別作對照，以含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G為薄層板，展開劑為正己烷-醋酸乙酯〔3:1〕，置紫外光燈〔365nm〕下檢視。通過陰性對照實驗及三批樣品的實驗觀察，說明本法成立。建立了方中白芍的薄層鑒別白芍的主要有效成分為芍藥苷，但處方中牡丹皮也含有芍藥苷，原劑型質量標準中的該項鑒別僅以芍藥苷為對照品，專屬性不強，為鑒別白芍而防止牡丹皮的干擾，本鑒別采用了芍藥甙對照品與白芍對照藥材同時作對照，使信息量增加，提高了其專屬性。因處方中藥味多，干擾大，采用了三氧化鋁柱進行別離，排除局部干擾，經濃縮后，將樣品溶液、對照品溶液以及白芍對照藥材溶液分別點在同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸〔40:5:10:0.2〕為展開劑，以5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，供試品色譜中在與對照品芍藥苷色譜相應的位置上顯相同的蘭紫色斑點，在與白芍對照藥材色譜相對應的位置上顯相同的斑點。通過陰性對照實驗及三批樣品的實驗觀察，說明本法成立。其他藥材的鑒別.1炙黃芪的鑒別研究參照中國藥典一部黃芪項下的鑒別方法以黃芪甲苷對照品為對照，對本品進行了TLC研究，結果，供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上沒有呈現相同顏色的斑點。.2五味子的鑒別研究參照中國藥典一部五味子項下的鑒別方法以五味子甲素對照品為對照，對本品進行了TLC研究，結果，供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上沒有呈現相同顏色的斑點。.3白術的鑒別研究參照中國藥典一部白術項下的鑒別方法以白術對照藥材為對照，對本品進行了TLC研究，結果，供試品色譜中在與對照藥材色譜相應的位置上斑點不能完全對應，尤其少了一個主斑點。.4黨參的鑒別研究參照?時珍國醫(yī)國藥?雜志2000年11卷3期的一篇關于黨參的薄層鑒別文獻的方法進行了研究，以黨參對照藥材為對照，用水飽和正丁醇萃取處理樣品，以氯仿-甲醇-水〔11:6:2〕的下層溶液為展開劑，以10%磷鉬酸乙醇液為顯色劑對本品進行研究，結果供試品色譜中的斑點不能與對照藥材的色譜斑點完全對應。.5熟地黃的鑒別研究參照中國藥典一部熟地黃項下的鑒別方法，以5-羥甲基糠醛對照品為對照，對本品進行薄層鑒別研究，結果供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上沒有相同顏色的斑點。綜上，以上幾味藥的鑒別研究，均因含量低或干擾大等原因，結果不理想，而未獲得成功，另山藥、茯苓兩味藥材無特征性化學成分，故未進行試驗研究。崩解時限參照?中國藥典?一部附錄ID片劑項下的崩解時限檢查法檢查，結果均符合規(guī)定。見表2-1。表2-1崩解時限檢查試驗結果批號崩解時限〔應在60分鐘內全部崩解〕結果2021030132合格2021030230合格2021030331合格2021050130合格2021050231合格2021050330合格重量差異照?中國藥典?一部附錄ID片劑項下重量差異檢查法檢查，結果均符合規(guī)定〔應在±5%范圍以內〕。見表2-2。表2-2樣品重量差異檢查結果批號范圍〔～〕結果20210301～合格20210302～合格20210303～合格20210501～合格20210502～合格20210503～合格重金屬按?中國藥典?一部附錄ⅨE重金屬檢查法第二法檢查了3批樣品，結果均未超過百萬分之十，故此項檢查暫不納入質量標準。結果見表2-3。表2-3樣品重金屬檢查結果批號結果20210501＜百萬分之十20210502＜百萬分之十20210503＜百萬分之十砷鹽按?中國藥典?一部附錄ⅨF砷鹽檢查法第一法檢查了3批樣品，結果均未超過百萬分之一，故此項檢查暫不納入質量標準，結果見表2-4。表2-4樣品砷鹽檢查結果批號結果20210501＜百萬分之一20210502＜百萬分之一20210503＜百萬分之一含量測定總氮量的測定烏雞為方中君藥，其蛋白質經水解成為氨基酸和多肽，因此在正文中仍保存了原劑型總氮量的測定。.1方法取本品，精密稱定，照氮測定法〔中國藥典2005年版一部附錄ⅨL第二法〕測定。.2樣品測定依法測定了數批樣品，結果見表2-5。表2-5樣品總氮量測定結果批號含氮量〔mg/片〕平均含氮量〔mg/片〕〔1〕〔2〕202103012021030220210303202105012021050220210503202106019.16202106022021060320210901根據上述測定結果，并參照原標準，擬定本品每片含氮量〔N〕不得少于5.5mg。芍藥苷含量測定此項測定為新增工程，白芍系方中臣藥，芍藥苷為其主要成分，佐藥牡丹皮也含有芍藥苷，測定芍藥苷這一有效成分的含量對控制產品質量是有效的。正文采用了十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，建立了一種靈敏、專屬、可靠的高效液相色譜法測定芍藥苷含量。.1儀器與試藥Waters2487紫外檢測器、Waters515pump、島津CTO-10ASCVP柱溫箱、浙大智達N2000色譜工作站，大連依利特高效液相色譜系統(tǒng)〔包括UV200紫外可變波長檢測器，PⅡ200高壓恒流泵，HW2000色譜工作站〕。PERKINELMERLambda12紫外分光光度計KQ-250DE型超聲波清洗器〔昆山市超聲儀器〕METTLERPB203-N〔d=〕METTLERAE100電子天平〔d=〕METTLERM3〕電熱恒溫水浴鍋〔琴臺醫(yī)療器械廠〕甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純芍藥苷對照品，購于中國藥品生物制品檢定所〔供含量測定用，批號：110736-200423〕復方烏雞片：自制.2檢測波長確實定取芍藥苷對照品的水溶液，經紫外200～400nm波長范圍掃描，結果芍藥苷最大吸收波長為231nm，與文獻報道根本一致，參照藥典標準，選擇檢測波長為230nm。結果見圖1。.3色譜條件色譜柱〔AlltimaC18250mm×，5μ〕，流動相：乙腈-0.1mol/L磷酸〔15:85〕，流速：1ml/min，檢測波長：230nm，柱溫：室溫。在該條件下其它成分對芍藥苷無干擾，能到達基線別離，理論塔板數按芍藥苷峰計算均為5000以上，結果見圖2-1、2-2。.4陰性樣品試驗按處方及生產工藝制備不含白芍、牡丹皮的樣品，按正文含量測定方法試驗，結果在芍藥苷峰處未見干擾，見圖2-3。.5線性關系的考察精密稱取芍藥苷對照品5mg置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中分別精密吸取1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml和10.0ml至10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再分別從中精密吸取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=1188801X－21765，r～與峰面積積分值呈良好的線性關系，測定數據見表2-6。表2-6芍藥苷標準曲線測定結果序號123456進樣量(μg)峰面積1117942297674879567443231017837.6精密度試驗分別精密吸取同一對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，測定，記錄峰面積，結果見表2-7，RSD為1.05%。表2-7精密度試驗結果進樣次數對照品溶液峰面積值RSD〔%〕150674624996033500753450299054948506492472.2.7樣品溶液穩(wěn)定性考察取供試品溶液于0、1、2、4、8、12小時內分別測定，結果RSD為%，說明樣品溶液在12小時內穩(wěn)定，見表2-8。表2-8樣品溶液穩(wěn)定性考察試驗結果放置時間〔小時〕峰面積RSD〔%〕0614136160571126111724604586861315912611735.8重復性試驗取同一批號樣品〔批號：20210501〕共6份，照正文中含量測定方法測定，結果見表2-9。表2-9重復性試驗結果序號含量〔mg/g〕平均含量〔mg/g〕RSD〔%〕123456.9回收率試驗取含量的本品〔批號：20210501〕適量，研細，精密稱取適量，共6份，分別精密參加一定量的芍藥苷對照品，照正文中含量測定方法測定，計算回收率及RSD，結果見表2-10。表2-10加樣回收試驗結果稱樣量(g)樣品中含量(mg)參加對照品量(mg)實測值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.2909100.9510.10樣品測定按正文含量測定方法分別測定了10批樣品，結果見表2-11。表2-11樣品測定結果樣品批號含量〔mg/片〕平均含量〔mg/片〕〔1〕〔2〕20210301202103022021030320210501202105022021050320210601202106022021060320210901根據以上測定結果，擬定本品每片含白芍以芍藥苷〔C23H28O11〕計，不得少于5mg。功能主治補氣血，益肝腎。主治婦女病：氣血兩虛或肝腎兩虛的月經不調，脾虛或腎虛帶下。癥見：面色咣白、五心煩熱、腰酸膝軟、舌紅苔白或淡有齒痕，脈細緩或數者。用法用量口服，一次2片，一日2次。月經不調者于月經干凈后服用，12天為一療程，可連用3個療程；帶下病，10天為一療程，可連用一個月。規(guī)格每片重g。貯藏密封。有效期24個月。3質量標準起草說明復方烏雞片質量標準草案復方烏雞片FufangWujiFensanpian[處方]烏雞375g黃芪(蜜灸)140g山藥280g黨參140g白術140g川芎47.5g茯苓94g當歸94g熟地黃白芍(酒炒)94g牡丹皮94g五味子(酒制)47.5g[制法]以上十二味，山藥、黃芪、黨參、茯苓切碎塊，加7倍量的水，加熱煮沸30分鐘，濾過，收集濾液。藥渣再加5倍量的水，煮沸30分鐘，濾過，合并濾液，濃縮，加乙醇適量，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉，備用；另取烏雞宰殺后，除去毛、爪、腸等，冼凈，切成碎塊，加稀硫酸適量，加熱回流提取3小時，濾過，濾液調pH值至5～6，冷藏過夜，脫脂，濾過，濾液濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉，備用；其余熟地黃、白術、白芍、牡丹皮、川芎、當歸及五味子粉碎成粗粉，用70%乙醇浸漬后進行滲漉，收集滲漉液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至適量，減壓枯燥成干膏，粉碎成細粉，備用；將上述三種干膏細粉混勻，取1份干膏粉，參加0.4份微晶纖維素、0.15份低取代羥丙基纖維素，混勻，用3%PVPk30乙醇溶液作為粘合劑制成顆粒，60℃烘干，參加顆粒量1%的硬脂酸鎂，混勻，[性狀]本品為薄膜衣片，除去薄膜衣后，顯棕褐色；氣微香，味微苦。[鑒別]〔1〕取本品18片，除去包衣，研細，加乙醚60ml冷浸1小時，時時振搖，濾過，藥渣備用，取濾液揮干，殘渣加丙酮0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法〔中國藥典2005年版一部附錄ⅥB〕試驗，吸取供試品溶液10μl、對照品溶液5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-醋酸乙酯〔3:1〕為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點?！?〕取[鑒別]〔1〕項下的供試品溶液，作為供試品溶液。另分別取當歸、川芎對照藥材各，加乙醚10ml冷浸1小時，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法〔中國藥典2005年版一部附錄ⅥB〕試驗，吸取供試品溶液10μl、對照藥材溶液各2μl，分別點一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正已烷-醋酸乙酯〔9:1〕為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈〔365nm〕下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。〔3〕取[鑒別]〔1〕項下的備用藥渣，揮去乙醚，加水100ml，加熱使溶解，放冷，離心，取上清液，置分液漏斗中用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗2次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液置水浴上濃縮至1～2ml，加適量中性氧化鋁，置水浴上拌勻，枯燥，裝入一預先填好的中性氧化鋁小柱〔200目，2g，內徑1cm〕頂部，以醋酸乙酯-甲醇〔1:1〕30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取白芍對照藥材1g，加乙醇15ml冷浸1小時，時時振搖，濾過，濾液濃縮至約0.5ml，作為對照藥材溶液。再取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法〔中國藥典2005年版一部附錄ⅥB〕試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸〔40:5:10:0.2〕為展開劑，展開，取出，晾干，噴以.5%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。[檢查]應符合片劑項下有關的各項規(guī)定〔中國藥典2005年版一部附錄ID〕[含量測定]總氮量取本品，精密稱定，照氮測定法〔中國藥典2005年版一部附錄ⅨL第二法〕測定。本品每片含氮量(N)不得少于5.5mg。芍藥苷照高效液相色譜法〔中國藥典2005年版附錄Ⅶ〕測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1mol/L磷酸〔15:85〕為流動相，檢測波長為230nm。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于5000。對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷減壓枯燥36小時的芍藥苷對照品，加水制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密參加水50ml，密塞，稱定重量，超聲處理〔功率250W，頻率40KHz〕30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每片含白芍以芍藥苷〔C23H28O11〕計，不得少于mg。[功能主治]補氣血，益肝腎。主治婦女病：氣血兩虛或肝腎兩虛的月經不調，脾虛或腎虛帶下。癥見：面色咣白、五心煩熱、腰酸膝軟、舌紅苔白或淡有齒痕，脈細緩或數者。[用法用量]口服，一次3片，一日2次。月經不調者于月經干凈后服用，12天為一療程，可連用3個療程；帶下病，10天為一療程，可連用一個月。[規(guī)格]每片重g。[貯藏]密封。[有效期]24個月。復方烏雞片質量標準草案起草說明[名稱]本品為復方烏雞口服液經劑型改革而來，因為工藝無質的改變，又因為劑型為片，故全名為復方烏雞片。[處方]同正文所述[制法]同正文所述[性狀]本品為薄膜衣片，除去薄膜衣后，顯棕褐色；氣微香，味微苦。[鑒別]根據處方中藥味及其有效成分，我們對其鑒別進行了研究，本標準仍保存了原復方烏雞口服液標準中的牡丹皮、當歸、白芍的薄層鑒別，但在方法和操作上有所改良。.1鑒別〔1〕系方中牡丹皮的薄層鑒別本實驗參照原制劑質量標準中的該項鑒別，以牡丹皮中主要成分丹皮酚為對照，以含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G為薄層板，展開劑為環(huán)己烷-醋酸乙酯〔3:1〕，以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液為顯色劑；通過陰性對照實驗及三批樣品的實驗觀察，說明本法成立。見圖4。.2鑒別〔2〕系方中當歸和川芎藥材的薄層鑒別原制劑標準中此項薄層為當歸的鑒別，實驗過程中發(fā)現，除去當歸的陰性對照仍有干擾，并證實干擾來自川芎，這是因為方中川芎和當歸都含有藁本內酯類成分，我們試圖利用川芎中另含生物堿成分的不同與當歸加以區(qū)分，但試驗沒有成功。故陰性對照除去了當歸、川芎兩味藥材，本實驗以當歸、川芎對照藥材分別作對照，以含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G為薄層板，展開劑為正己烷-醋酸乙酯〔3:1〕，置紫外光燈〔365nm〕下檢視。通過陰性對照實驗及三批樣品的實驗觀察，說明本法成立。見圖5。.3鑒別〔3〕系方中白芍的薄層鑒別白芍的主要成分為芍藥苷，但處方中牡丹皮也含有芍藥苷，原劑型質量標準中的該項鑒別僅以芍藥苷為對照品，專屬性不強，為鑒別白芍而防止牡丹皮的干擾，本鑒別采用了芍藥苷對照品與白芍對照藥材同時作對照，使信息量增加，提高了其專屬性。因處方中藥味多，干擾大，采用了三氧化鋁柱進行別離，排除局部干擾，經濃縮后，將樣品溶液、對照品溶液以及白芍對照藥材溶液分別點在同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸〔40:5:10:0.2〕為展開劑，以5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，供試品色譜中在與對照品芍藥甙色譜相對應的位置上顯相同的蘭紫色斑點，在與白芍對照藥材色譜相對應的位置上顯相同的斑點。通過陰性對照實驗及三批樣品的實驗觀察，說明本法成立。見圖6。檢查.1崩解時限參照?中國藥典?一部附錄ID片劑項下的崩解時限檢查法檢查，取本品三批檢查，結果均符合規(guī)定。見表3-1。表3-1崩解時限檢查試驗結果批號崩解時限〔應在60分鐘內全部崩解〕結果2021050130合格2021050231合格2021050330合格.2重量差異照?中國藥典?一部附錄ID片劑項下重量差異檢查法檢查，取本品三批檢查，結果均符合規(guī)定〔應在±5%范圍以內〕。見表3-2。表3-2樣品重量差異檢查結果批號范圍〔～之間〕結果20210501～合格20210502～合格20210503～合格3.3重金屬按?中國藥典?一部附錄ⅪE重金屬檢查法第二法檢查了三批樣品，結果均未超過百萬分之十，故此項檢查暫不納入質量標準。結果見表3-3。表3-3樣品重金屬檢查結果批號結果20210501＜百萬分之十20210502＜百萬分之十20210503＜百萬分之十.4砷鹽按?中國藥典?一部附錄ⅨF砷鹽檢查法第一法檢查了三批樣品，結果均未超過百萬分之一，故此項檢查暫不納入質量標準，結果見表3-4。表3-4樣品砷鹽檢查結果批號結果20210501＜百萬分之一20210502＜百萬分之一20210503＜百萬分之一3含量測定3.1總氮量的測定烏雞為方中君藥，其蛋白質經水解成為氨基酸和多肽，因此在正文中仍保存了原劑型總氮量的測定。3.1.1方法取本品，精密稱定，照氮測定法〔中國藥典2005年版一部附錄ⅨL第二法〕測定。3.1.2樣品測定依法測定了十批樣品，結果見表3-5。表3-5樣品總氮量測定結果批號含氮量〔mg/片〕平均含氮量〔mg/片〕〔1〕〔2〕20210301202103022021030320210501202105022021050320210601202106022021060320210901根據上述測定結果，并參照原標準，擬定本品每片含氮量〔N〕不得少于5.5mg。3.2芍藥苷含量測定此項測定為新增工程，白芍系方中臣藥，芍藥苷為其主要成分，佐藥牡丹皮也含有芍藥苷，測定芍藥苷這一有效成分的含量對控制產品質量是有效的。正文采用了十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，建立了一種靈敏、專屬、可靠的高效液相色譜法測定芍藥苷含量。3.2.1儀器與試藥Waters2487紫外檢測器、Waters515pump、島津CTO-10ASCVP柱溫箱、浙大智達N2000色譜工作站，大連依利特高效液相色譜系統(tǒng)〔包括UV200紫外可變波長檢測器，PⅡ200高壓恒流泵，HW2000色譜工作站〕。PERKINELMERLambda12紫外分光光度計、KQ-250DE型超聲波清洗器〔昆山市超聲儀器〕METTLERPB203-N〔d=〕METTLERAE100電子天平〔d=〕METTLERM3〕電熱恒溫水浴鍋〔琴臺醫(yī)療器械廠〕甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。芍藥苷對照品，購于中國藥品生物制品檢定所〔供含量測定用，批號：110736-200423〕。復方烏雞片：自制。3.2.2檢測波長確實定取芍藥苷對照品的水溶液，經紫外200～400nm波長范圍掃描，結果芍藥苷最大吸收波長為231nm，與文獻報道根本一致，參照藥典標準，選擇檢測波長為230nm。見圖1。3.2.3色譜條件色譜柱〔AlltimaC18250mm×，5μ〕，流動相：乙腈-0.1mol/L磷酸〔15：85〕，流速：1ml/min，檢測波長：230nm，柱溫：室溫。在該條件下其它成分對芍藥苷無干擾，能到達基線別離，理論塔板數按芍藥苷峰計算均為5000以上〔見圖2-1、2-2〕。3.2.4陰性樣品試驗按處方及生產工藝制備不含白芍的樣品，按正文含量測定方法試驗，結果在芍藥苷峰處未見干擾〔見圖2-3〕。3.2.5線性關系的考察精密稱取芍藥苷對照品5mg置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，從中分別精密吸取1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml和10.0ml至10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再分別從中精密吸取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=1188801X－21765，r～與峰面積積分值呈良好的線性關系，測定數據見表3-6，芍藥苷標準曲線見圖3。表3-6芍藥苷標準曲線測定結果序號123456進樣量(μg)峰面積11179422976748795674432310178373.2.6精密度試驗分別精密吸取同一對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，測定，記錄峰面積，結果見表3-7，RSD為1.05%。表3-7精密度試驗結果進樣次數對照品溶液峰面積值RSD〔%〕1506746249960335007534502990549485064924723.2.7樣品溶液穩(wěn)定性考察取供試品溶液于0、1、2、4、8、12小時內分別測定，結果RSD為%，說明樣品溶液在12小時內穩(wěn)定，見表3-8。表3-8樣品溶液穩(wěn)定性考察試驗結果放置時間〔小時〕峰面積RSD〔%〕06141361605711261117246045868613159126117353.2.8重復性試驗取同一批號樣品〔批號：20210501〕共6份，照正文中含量測定方法測定，結果見表3-9。表3-9重復性試驗結果序號含量〔mg/g〕平均含量〔mg/g〕RSD〔%〕1234563.2.9回收率試驗取含量的本品〔批號：20210501〕適量，研細，精密稱取適量，共6份，分別精密參加一定量的芍藥苷對照品，照正文中含量測定方法測定，計算回收率及RSD，結果見表3-10。表3-10加樣回收試驗結果稱樣量(g)樣品中含量(mg)參加對照品量(mg)實測值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.2909100.950.30883.2.10樣品測定按正文含量測定方法分別測定了10批樣品，結果見表3-11。表3-11樣品測定結果樣品批號含量〔mg/片〕平均含量〔mg/片〕〔1〕〔2〕202103012021030292021030320210501202105022021050320210601202106022021060320210901根據以上測定結果，擬定本品每片含白芍以芍藥苷〔C23H28O11〕計，不得少于mg。3功能主治補氣血，益肝腎。主治婦女?。簹庋獌商摶蚋文I兩虛的月經不調，脾虛或腎虛帶下。癥見：面色咣白、五心煩熱、腰酸膝軟、舌紅苔白或淡有齒痕，脈細緩或數者。3用法用量口服，一次3片，一日2次。月經不調者于月經干凈后服用，12天為一療程，可連用3個療程；帶下病，10天為一療程，可連用一個月。3規(guī)格每片重1.03貯藏密封。3有效期24個月。4藥物穩(wěn)定性研究實驗穩(wěn)定性試驗的目的是考察原料藥或藥物制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時間變化的規(guī)律，為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件提供科學依據，同時通過試驗建立藥品的有效期。穩(wěn)定性試驗的根本內容及方法有如下:穩(wěn)定性試驗包括加速穩(wěn)定性試驗與長期穩(wěn)定性試驗。加速試驗與長期試驗適用于原料藥與藥物制劑，要求用3批供試品進行。根據?藥物穩(wěn)定性指導原那么?的要求，對本品的性狀、鑒別、崩解時限、含量測定及微生物限度等工程進行檢測。將本品在市售包裝條件下進行加速穩(wěn)定性試驗和長期穩(wěn)定性試驗。樣品來源批號為20210501、20210502、20210503的3批中試產品。WD-B型藥物穩(wěn)定性試驗箱(天津藥典標準儀器廠)。性狀鑒別崩解時限含量微生物限度加速穩(wěn)定性考察取上述3批產品，在模擬上市用包裝條件下，置40±2?C，相對濕度75±5%的恒溫恒