酵母雙雜交系統(tǒng)課件

酵母雙雜交系統(tǒng)課件contents目錄酵母雙雜交系統(tǒng)簡介酵母雙雜交系統(tǒng)的實驗流程酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用實例酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點酵母雙雜交系統(tǒng)的前景展望01酵母雙雜交系統(tǒng)簡介定義酵母雙雜交系統(tǒng)是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用的強(qiáng)大工具，通過將兩個蛋白質(zhì)分別與酵母轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和激活域融合，來檢測蛋白質(zhì)之間的相互作用。原理基于酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4的激活域和DNA結(jié)合域的相互作用，當(dāng)兩個蛋白質(zhì)相互作用時，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子的激活域和DNA結(jié)合域重新組合，從而激活報告基因的表達(dá)。定義與原理歷史與發(fā)展Fields和Song首次提出酵母雙雜交系統(tǒng)的概念。首次報道了成功的酵母雙雜交實驗。酵母雙雜交系統(tǒng)被用于大規(guī)模蛋白質(zhì)相互作用篩選?；诮湍鸽p雜交系統(tǒng)的全蛋白質(zhì)相互作用圖譜計劃啟動。1989年1991年1993年2002年通過酵母雙雜交系統(tǒng)可以檢測蛋白質(zhì)之間的相互作用，為研究蛋白質(zhì)的功能和調(diào)控機(jī)制提供有力支持。蛋白質(zhì)相互作用研究利用酵母雙雜交系統(tǒng)可以篩選小分子或肽類化合物，尋找能夠干擾特定蛋白質(zhì)相互作用的候選藥物。藥物發(fā)現(xiàn)通過大規(guī)模的酵母雙雜交篩選，可以發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，為基因組學(xué)和功能基因組學(xué)研究提供重要信息。基因組學(xué)與功能基因組學(xué)比較不同物種之間的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，有助于理解生物進(jìn)化的機(jī)制和物種差異的起源。生物進(jìn)化與物種比較應(yīng)用領(lǐng)域02酵母雙雜交系統(tǒng)的實驗流程

誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞準(zhǔn)備酵母感受態(tài)細(xì)胞將酵母菌株進(jìn)行營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)，使其處于饑餓狀態(tài)，以便更好地吸收質(zhì)粒。誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化將誘餌質(zhì)粒通過電轉(zhuǎn)法或化學(xué)轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入酵母感受態(tài)細(xì)胞中，使其穩(wěn)定表達(dá)誘餌蛋白。篩選轉(zhuǎn)化子將轉(zhuǎn)化后的酵母細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母轉(zhuǎn)化子。根據(jù)研究目的選擇適當(dāng)?shù)恼T餌質(zhì)粒，確保誘餌蛋白能夠與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用。通過PCR和DNA測序等方法對誘餌質(zhì)粒進(jìn)行鑒定，確保其正確插入和表達(dá)。誘餌質(zhì)粒的選擇與鑒定鑒定誘餌質(zhì)粒選擇適當(dāng)?shù)恼T餌質(zhì)粒將含有目標(biāo)蛋白質(zhì)基因的篩選質(zhì)粒與誘餌質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)化入同一批酵母細(xì)胞中。準(zhǔn)備篩選質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化過程篩選共轉(zhuǎn)化子通過電轉(zhuǎn)法或化學(xué)轉(zhuǎn)化法將篩選質(zhì)粒與誘餌質(zhì)粒共同導(dǎo)入酵母細(xì)胞中。將共轉(zhuǎn)化的酵母細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出同時含有誘餌質(zhì)粒和篩選質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)化子。030201誘餌質(zhì)粒與篩選質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)化通過抗生素抗性篩選和藍(lán)白斑篩選等方法初步篩選出陽性克隆。初步篩選通過Westernblot和Co-IP等方法對陽性克隆進(jìn)行進(jìn)一步鑒定，確認(rèn)目標(biāo)蛋白質(zhì)與誘餌蛋白之間的相互作用。鑒定陽性克隆篩選與陽性克隆的鑒定03酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用實例酵母雙雜交系統(tǒng)能夠檢測蛋白質(zhì)之間的相互作用，幫助科學(xué)家了解蛋白質(zhì)之間的相互關(guān)系和作用機(jī)制。通過酵母雙雜交系統(tǒng)，可以篩選出與特定蛋白質(zhì)相互作用的候選蛋白，進(jìn)一步揭示蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)。酵母雙雜交系統(tǒng)還可以用于驗證已知的蛋白質(zhì)相互作用，為研究提供可靠的實驗依據(jù)。蛋白質(zhì)相互作用研究酵母雙雜交系統(tǒng)可以用于研究蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位，幫助科學(xué)家了解蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布和定位。通過將目標(biāo)蛋白質(zhì)與已知亞細(xì)胞定位的蛋白質(zhì)進(jìn)行相互作用篩選，可以確定目標(biāo)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位，進(jìn)一步揭示其在細(xì)胞內(nèi)的功能和作用機(jī)制。酵母雙雜交系統(tǒng)還可以用于比較不同蛋白質(zhì)之間的亞細(xì)胞定位差異，為研究提供更為全面的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)分布信息。蛋白質(zhì)定位研究

蛋白質(zhì)功能研究酵母雙雜交系統(tǒng)可以用于研究蛋白質(zhì)的功能，通過檢測蛋白質(zhì)之間的相互作用，進(jìn)一步揭示其在細(xì)胞內(nèi)的生物學(xué)功能。通過酵母雙雜交系統(tǒng)，可以篩選出與特定功能相關(guān)的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，為深入研究蛋白質(zhì)的功能提供實驗依據(jù)。酵母雙雜交系統(tǒng)還可以用于比較不同物種或不同細(xì)胞類型中蛋白質(zhì)功能的差異，為研究提供更為全面的蛋白質(zhì)功能信息。04酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點優(yōu)點高靈敏度酵母雙雜交系統(tǒng)能夠檢測到低親和力的相互作用，特別適合研究那些在體內(nèi)難以檢測的蛋白質(zhì)相互作用。細(xì)胞內(nèi)環(huán)境模擬該系統(tǒng)在酵母細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，能夠模擬蛋白質(zhì)相互作用的真實環(huán)境，有助于揭示蛋白質(zhì)相互作用的機(jī)制。高通量通過自動化和規(guī)?；僮?，酵母雙雜交系統(tǒng)能夠同時研究大量蛋白質(zhì)之間的相互作用，提高研究效率?？沈炞C性通過將結(jié)果與已知的相互作用進(jìn)行比較，可以驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的可靠性。ABCD假陽性結(jié)果由于酵母雙雜交系統(tǒng)的高靈敏度，有時會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，即非特異性相互作用。這需要進(jìn)一步驗證和篩選。表達(dá)異質(zhì)性由于不同酵母細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)水平可能存在差異，導(dǎo)致實驗結(jié)果的異質(zhì)性。酵母細(xì)胞特性限制由于酵母細(xì)胞與人類細(xì)胞存在差異，因此該系統(tǒng)可能無法完全模擬人體內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用。低轉(zhuǎn)化效率在將DNA導(dǎo)入酵母細(xì)胞時，可能會遇到低轉(zhuǎn)化效率的問題，影響實驗結(jié)果的可靠性。缺點05酵母雙雜交系統(tǒng)的前景展望基因表達(dá)調(diào)控研究通過研究轉(zhuǎn)錄因子與DNA的相互作用，揭示基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制，有助于深入了解生命活動的規(guī)律。細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究利用酵母雙