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二次諧波成像操作說明開啟硬件，包括計算機、顯微鏡、掃描裝置、雙光子激光器（圖1、圖2）、光電調(diào)節(jié)器EOM（圖3）。圖2圖2圖1圖圖3開啟LASAF軟件，Configuration選擇machine_MP-Laser-on選項，點擊OK進入軟件界面（圖4）。圖圖4進入Acquire面板，進行參數(shù)設(shè)置。scan1（二次諧波通道）參數(shù)設(shè)置如下（圖5、圖6）。圖5AcquisitionMode：xyz；圖5Format：1024x1024；Speed：400Hz；LineAverage：4；FrameAverage：1；Objective：63x1.40oil；Pinhole：600μm圖圖6點擊MP，紅色指示燈亮起（圖7）。圖圖7點擊MPlaser，進入MPLaserConfiguration，設(shè)置Laser為880nm，長按MP-Shutter，紅色指示燈亮起，雙光子激光即刻輸出，待OutputPower上升到2390mw（圖8）。MFP選擇SP715（圖9），發(fā)射波長為570-700nm（圖10）。圖8圖8圖10圖10圖9scan2（綠色熒光通道）參數(shù)設(shè)置如下（圖11、圖12）。AcquisitionMode：xyzFormat：1024x1024Speed：400HzLineAverage：4FrameAverage：1Objective：63x1.40oilPinhole：95.54μm圖12圖12圖11在LeicaSettings中選擇FITC通道（圖13），Laser為488nm（圖14），發(fā)射波長設(shè)為500

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