獸醫(yī)微生物學課件

緒論

空氣中的霉菌畫家筆下歐洲鼠疫的景象禽流感病雞天花患兒愛滋病艾博拉病毒及患兒一、微生物及微生物學1、微生物：是個體微小、結構簡單、分布廣泛、繁殖快的一大類生物的總稱。包括細菌、真菌、放線菌、螺旋體、支原體（霉形體）、立克次氏體、衣原體、病毒、類病毒等九大類。2、微生物學：是研究微生物形態(tài)、結構、生理、遺傳變異、生態(tài)分布、分類及與人類的關系的一門科學。廣義的微生物學還包括免疫學、甚至包括寄生蟲學，特別是原蟲學。NeisseriagonorrhoeaeGramstainofpurecultureNeisseriagonorrhoeaeGramstainofapustularexudateNeisseriagonorrhoeae

淋病奈瑟氏菌愛滋病病毒流感病毒乙肝病毒Rod-ShapedBacterium,E.coli(SEMx1,815)

Yeast,Sacchromycessp.(SEMx17,250)

FungalMyceliumwithSpores,Penicilliumsp.(SEMx3,220)

BacillusanthracisGramstain炭疽桿菌RobertKoch'soriginalmicrographsoftheanthraxbacillusBacillusanthracis梅毒螺旋體Treponemapallidum立克次氏體二、微生物的發(fā)展史形態(tài)學生理學免疫學近代及現(xiàn)代微生物學萌芽期——經(jīng)驗1、第一階段——形態(tài)學時期

由于航海的需要，有了望遠鏡，到了16世紀由望遠鏡就發(fā)展到顯微鏡。最早的顯微鏡只能放大32倍，以后逐漸改進。1683年荷蘭人呂文虎克(AntonyvanLeeuwenhoek1632～1723)用自制的放大200倍以上的顯微鏡，首次觀察到微生物。1695年，他將過去所觀察到的微生物，繪圖并敘述公諸于世。從此以后，人們對微生物的形態(tài)、排列、大小等有了初步的認識，但僅限于形態(tài)學方面，進展不大。其主要原因之一是自然發(fā)生論(即無生源論)起著阻礙的作用。AnthnoyvanLeeuwenhoek1684年寄給皇家協(xié)會信的部分內(nèi)容Anthnoyvan

Leeuwenhoek與他的顯微鏡AnthnoyvanLeeuwenhoek的單筒復式顯微鏡巴斯德時期的顯微鏡

EdwardJenner(1749-1822年)出生于英國西部，1792年榮獲醫(yī)學博士學位。1796年5月14日他成功地完成了一次舉世聞名的實驗。1798年他發(fā)表了開創(chuàng)新紀元的牛痘疫苗的報告。這一創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)當時被稱為Jenner牛痘疫苗接種，是人們與天花奮斗長達200年之久的最重要的武器。1980年5月8日在日內(nèi)瓦召開的第33屆世界衛(wèi)生大會上宣布全球消滅天花。在免疫科學真正確立之前，Jenner的貢獻是巨大的，所以人們通常把免疫學的起源歸功于他。

由于有了更好的顯微鏡，能制造培養(yǎng)基并加以滅菌，無機和有機化學也在迅速地發(fā)展，加上生產(chǎn)過程中所出現(xiàn)的蠶病、釀酒敗壞以及人畜疾病等問題，使微生物學進入了生理學和免疫學時期。 生理學及免疫學的奠基時期這個時期大約是從1870年到1920年，在這約50年期間，微生物已經(jīng)發(fā)展成一間獨立的科學，在理論上、技術上、生產(chǎn)上都取得了不少成果。2、第二階段——生理學和免疫學時期（1）生理學的啟蒙（2）免疫學的開始和發(fā)展（3）疫苗的研究和應用（4）消毒技術及消毒劑的應用（5）免疫技術用于疾病診斷（6）控制了釀酒過程中的酸?。?）固體培養(yǎng)基的發(fā)明及純培養(yǎng)技術讓細菌生理學研究成為現(xiàn)實。

LouisPasteur巴斯德(1822-1895年)是一位法國化學家、微生物學家和免疫學家。他證明了乳酸和酒精發(fā)酵是微生物生命活動的結果，提出加溫滅菌的方法為工業(yè)微生物學和醫(yī)學微生物學奠定了基礎。1880年他發(fā)現(xiàn)雞霍亂桿菌的陳舊培養(yǎng)物能預防雞霍亂的感染，首先創(chuàng)造了減毒疫苗。為了紀念Jenner的功勛，他將這種方法稱之為預防接種，并將這種制劑稱之為疫苗（vaccine）,相繼他又創(chuàng)造了炭疽桿菌減毒疫苗，狂犬病的減毒疫苗，興起了主動免疫的方法。

徹底否定了自然發(fā)生說證實發(fā)酵由微生物引起巴斯德的功績免疫學—預防接種發(fā)明巴氏消毒法巴斯德發(fā)現(xiàn)免疫現(xiàn)象幾星期后42-43oC下培養(yǎng)的老齡炭疽菌獲免疫力37oC下培養(yǎng)的新鮮炭疽菌科赫的功績證實炭疽病因—炭疽桿菌發(fā)現(xiàn)結核病原菌—結核桿菌科赫法則發(fā)明培養(yǎng)基并用其純化微生物等一系列研究方法的創(chuàng)立劃線法獲得單菌落

科赫定理圖示3、第三階段——

近代及現(xiàn)代微生物學

大約從1920年起，特別是近半個世紀以來，微生物學在理論研究、技術創(chuàng)新及實際應用方面都取得了重要進展?！?：微生物遺傳理論的研究大大發(fā)展。

由于蛋白質(zhì)化學研究的進展，揭示了遺傳物質(zhì)基礎是DNA或RNA的奧秘，使微生物學進入分子水平。近年來對微生物基因組結構與功能研究的飛速進展，揭開了微生物學發(fā)展史的新篇章，對微生物基因的表達及調(diào)控的知識不斷積累，進入了真正意義的遺傳工程時代?！碚撋先〉玫某删图捌鋺脙r值№2：器官移植 組織移植、免疫耐受的研究，將人們帶到對抗原識別、控制體內(nèi)抗原抗體反應的境界，使得在20世紀60年代以后人類移植腎臟、心臟的外科手術成功?？乖贵w反應已不限于傳染病的范圍，而擴展到非傳染性疾病和整個生物學的領域。

化學治療藥劑和抗生素的研究及應用，大大減少了人畜傳染病的危害。№3：抗菌藥物的出現(xiàn)：№4：抗體的產(chǎn)生、分子結構的研究： 對抗體中的各類球蛋白的類型、形成以及細胞免疫與體液免疫產(chǎn)生了認識的飛躍，推進了免疫球蛋白(包括單克隆抗體)在診斷及防治疾病上的應用，并開創(chuàng)了免疫病的防治?！夹g上的重大創(chuàng)新及其應用價值

№1：電子顯微鏡的應用，使得人們能觀察到包括細菌、病毒等在內(nèi)的亞細胞結構與分子結構，除作為理論研究的方法外，還可用于病毒病的診斷?！?：標記抗原或標記抗體的應用，在疾病診斷及抗原抗體反應的理論研究方面，提供了有力的工具?！?：細胞培養(yǎng)、空斑技術、蛋白質(zhì)及核酸的提純，大大便利了微生物學特別是病毒學的操作及研究?！?：應用核磁共振儀，可測定溶液狀態(tài)下蛋白質(zhì)、核酸等的分子排列與原子位置。將它應用于微生物，有助于了解微生物蛋白質(zhì)、核酸等的結構與功能。№5：應用分子克隆

(Molecularcloning)、PCR及電子計算機等技術，在微生物的鑒定、檢測、致病與免疫等方面帶來了革命性變化，周期短，見效快，應用廣泛，對那些 用常規(guī)方法不能培 養(yǎng)的微生物，尤其 大顯其能。近年來微生物領域中有三大進展：微生物遺傳學免疫學病毒學

這三門科學都已發(fā)展成為獨立學科?，F(xiàn)代微生物學已成為生物科學的一個重要分支，是從群體、個體及分子水平來研究各類微生物的形態(tài)、結構、新陳代謝、分類鑒定、抗原抗體反應及有關應用的學科。由于應用的不同，產(chǎn)生了包括獸醫(yī)微生物學等在內(nèi)的許多分支學科，它們與人類的生活、環(huán)境、健康以及與人與動物的傳染病都有密切的關系。三、獸醫(yī)微生物學的作用與貢獻－－趨利避害，造福人類 獸醫(yī)微生物學是在微生物學一般理論基礎上研究微生物與動物疾病的關系，并利用微生物學與免疫學的知識和技能來診斷、防治動物的疾病和人畜共患疾病，保障人類的食品安全與衛(wèi)生、保障畜牧業(yè)生產(chǎn)，保障動物的健康及生態(tài)環(huán)境免于破壞。其研究的領域已不僅限于傳統(tǒng)的家畜、家禽的微生物，還涉及家庭動物(亦稱伴侶動物)、實驗動物、水生動物、野生動物等的微生物，研究深度已涉及致病機理及與機體的相互作用，達到基因水平。

作為微生物學一個分支的獸醫(yī)微生物學，與醫(yī)學微生物學的關系最為密切，但范圍更廣，層次更復雜?！隘偱２　?、口蹄疫、禽流感等動物疫病的流行震驚全球，對其病原的研究及控制，引起了全社會的關注。獸醫(yī)微生物學的發(fā)展，促進了整個微生物學的發(fā)展，獸醫(yī)微生物學家功不可沒。

德國獸醫(yī)微生物學家F.A.J.Loeffler和P.Frosch于1898年報道口蹄疫病毒，發(fā)現(xiàn)了動物和人類的第一個病毒，是微生物學發(fā)展史上的重要里程碑。對人和動物具有致病性的沙門氏菌是美國獸醫(yī)學家D.E.Salmon發(fā)現(xiàn)，為紀念他的貢獻，用他的姓作為該屬細菌的屬名。 美國獸醫(yī)微生物學家C.A.Mubus于1969年在腹瀉犢牛的糞中發(fā)現(xiàn)輪狀病毒，揭開了輪狀病毒研究的序幕，并為其他引致腹瀉的病毒樹立了典范。獸醫(yī)微生物學是一間意義重大、蓬勃發(fā)展的學科，隨著時間的推移，將對人類的文明和社會的發(fā)展做出愈來愈大的貢獻。微生物學的發(fā)展促進了人類的進步微生物與醫(yī)藥衛(wèi)生微生物與農(nóng)牧業(yè)微生物與工業(yè)微生物與食品微生物與環(huán)保微生物與生物工程（21世紀的微生物學）用“工程菌”生產(chǎn)藥物干擾素腦菲肽胰島素乙肝疫苗眾抗生素各種單克隆抗體免疫血清微生物與醫(yī)藥衛(wèi)生微生物與農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)微生物飼料動物保健生物農(nóng)藥生物菌肥微生物能源微生物與工業(yè)制藥工業(yè)酶工業(yè)氨基酸工業(yè)有機酸工業(yè)新材料開發(fā)生物化工食品工程細菌是個體微小，形態(tài)與結構簡單的單細胞原核生物。它們是原核生物界中的一大類單細胞微生物。廣義的細菌除細菌外，還包括立克次氏體，衣原體，霉形體，螺旋體及放線菌等，研究其形態(tài)與結構，對檢測和控制動物病原微生物有重要的理論及實際意義。第一節(jié)細菌的形態(tài)一、細菌的基本形態(tài)及變化球狀桿狀螺旋狀其他形態(tài)二、細菌的大小細菌個體微小，要經(jīng)染色后在光學顯微鏡下才能看見。測定細菌大小的單位是微米(um)；細菌電子顯微鏡照片普通光學顯微鏡下用測微尺測細菌大小球菌以直徑表示，常為0.5～2.0um。桿菌和螺旋狀菌用長和寬表示，較大的桿菌長3～8um，寬1～l.25um;中等大的桿菌長2～3um，寬0.5～1.0um;小桿菌長0.7～1.5um，寬0.2～0.4um。螺旋狀菌以其兩端的直線距離作長度，一般在2～2.0um之間，寬0.4～0.2um。細菌的大小介于動物細胞與病毒之間。細胞的大小是細菌分類特征不同細菌細胞大小不同同一細菌的不同菌齡細胞大小不同細菌細胞大小還與營養(yǎng)等因素相關細胞大小的測量結果只是近似值或平均值三、細菌的繁殖方式簡單的裂殖，不同細菌裂殖后其菌體排列方式不同。有些細菌分裂后單個存在，有些細菌分裂后彼此仍有原漿帶相連，形成一定的排列方式，在正常情況下，各種細菌的外形和排列方式是相對穩(wěn)定而有特征性的，可以作為分類與鑒定的一種依據(jù)。四、細菌的排列

（一）球菌(coccus)

多數(shù)球菌呈正球形，有的呈腎形、豆形等。按其分裂方向及分裂后的排列情況，又可分為幾種。1、雙球菌(diplococcus)沿一個平面分裂，分裂后兩兩相連，其接觸面有時呈扁平或凹入，菌體變成腎狀、扁豆狀或矛頭狀。例如肺炎鏈球菌。NeisseriagonorrhoeaeGramstainofpurecultureNeisseriagonorrhoeaeGramstainofapustularexudateNeisseriagonorrhoeae

淋病奈瑟氏菌Coccoid-shapedBacterium(causesskininfections),Enterococcusfaecium(SEMx33,370)2、鏈球菌:沿一個平面分裂，分裂后三個以上菌體連成短鏈或長鏈?；撔枣溓蚓鶶treptococcuspyogenesDividingstreptococci

Coccoid-shapedBacterium(causesrespiratoryinfections),Streptococcuspneumoniae

(SEMx35,200)

上：模式圖右：電鏡照片

四聯(lián)球菌(Micrococcuslactis)3、四聯(lián)球菌沿著兩個分裂面分裂，分裂后4個球菌連在一起，呈田字型。八疊球菌（示意圖）4、八疊球菌沿著三個分裂面分裂，分裂后8個球菌連在一起，呈八球捆扎狀。5、葡萄球菌沿著多個分裂面分裂，分裂后多個球菌不規(guī)則地堆在一起。似一串葡萄。例如金黃色葡萄球菌。（二）桿菌(bacillus，復數(shù)bacilli)桿菌一般呈正圓柱形，也有的近似卵圓形。菌體兩端多為鈍圓，少數(shù)是平截，如炭疽桿菌。有些桿菌的菌體短小，近似球狀，稱為球桿菌，如多殺性巴氏桿菌。有些桿菌會形成側支或分枝，稱為分枝桿菌。有的桿菌呈長絲狀，如壞死梭桿菌。Rod-ShapedBacterium,hemorrhagicE.coli,strain0157:H7(division)(SEMx22,810)單桿菌：多數(shù)桿菌分裂后單獨散在，稱單桿菌Rod,clubed-shapedBacterium(causesdiphtheria),Corynebacteriumdiphtheriae

(SEMx24,000)雙桿菌：有些桿菌分裂后成對存在，稱為雙桿菌(diplobacilli)，如乳桿菌;鏈桿菌：有些桿菌分裂后兩個以上連成鏈狀排列，稱為鏈桿菌，例如炭疽桿菌。（三）螺旋狀菌(spirillum) 菌體呈彎曲或螺旋狀的圓柱形，兩端圓或尖突。根據(jù)螺旋的多少又可分：弧菌(vibrio)：只有一個彎曲，呈弧形或逗點狀，菌體長2～3um，例如霍亂弧菌(Vibriocholera)。螺菌(spirillum)

有兩個以上的彎曲，捻轉(zhuǎn)呈螺旋狀，菌體較長，約3～6um，例如鼠咬熱螺菌(Spirillumminus)。Vibrio-shapedBacterium(causescholera),Vibriocholerae(SEMx15,575)

幽門螺旋菌結構示意圖顯微數(shù)碼攝像五、衰老型和多型性：細菌在適宜條件下培養(yǎng)，在對數(shù)繁殖期的菌形比較典型和一致。不良環(huán)境或老齡期，會出現(xiàn)和正常形狀不一樣的個體，稱為衰老型或退化型(involutionform)。重新處于正常的培養(yǎng)環(huán)境時，可恢復正常的形狀。但也有些細菌，縱使在適宜的環(huán)境中生長，其形狀也很不一致，這種現(xiàn)象稱為多形性（pleomorphism)，如嗜血桿菌(Hoemophilus)。

3-6%食鹽

鼠疫桿菌────→多形態(tài)性(衰殘型)。

瓊脂培基

GramstainofHaemophilusinfluenzaefromsputum

流感嗜血桿菌Coccobacillus-shapedBacterium(causesmeningitis/pneumonia),Haemophilusinfluenzae

(SEMx64,000)

細菌的結構基本結構：細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核質(zhì)特殊結構：莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞形態(tài)與結構細菌細胞均具有細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核體等基本結構。第二節(jié)細菌的基本結構一、細胞壁(cellwall) 細胞壁在細菌細胞的外圍，是一層堅韌而具有一定彈性的膜。將細菌經(jīng)高滲溶液處理后染色，或用特殊方法染色，在光學顯微鏡下觀察，可見細胞壁。或?qū)⒓毦谱鞒∏衅?，用電鏡觀察。用革蘭氏(Gram)染色法染色，可以把細菌分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類。1、G+細菌的細胞壁

G+細菌細胞壁厚，約15-35nm，無結構分化，主要由肽聚糖和磷壁酸等組成。肽聚糖(peptidoglycan) 又稱黏肽、糖肽或胞壁質(zhì)，是細菌細胞壁所特有的物質(zhì)。革蘭氏陽性菌細胞壁的肽聚糖是由聚糖鏈支架、四肽側鏈和五肽交聯(lián)橋三部分組成的復雜聚合物，占G+菌的40%—60%。

五肽交聯(lián)橋五個甘氨酸聚糖骨架G：N-乙酰葡萄胺M：N-乙酰胞壁酸形態(tài)與結構四肽側鏈L-丙、D-谷、L-賴、D-丙主要成分：肽聚糖

G+

菌肽聚糖結構G+細胞壁 磷壁酸(teichoicacid)又名垣酸，是一種由核糖醇(ribitol)或甘油(glycerol)殘基經(jīng)磷酸二酯鍵相互聯(lián)接而成的多聚物，并帶有一些氨基酸或糖。磷壁酸是革蘭氏陽性菌特有的成分，是特異的表面抗原。

特殊組分：G+菌特有成分壁磷壁酸膜磷壁酸磷壁酸膜磷壁酸壁磷壁酸形態(tài)與結構2、G--菌的細胞壁 較薄，約10～15nm，其結構和成分較復雜，由外膜和周質(zhì)間隙組成。外膜有三層結構，內(nèi)外兩層為電子稠密層，中間為電子致密層，由脂多糖、磷脂、蛋白質(zhì)和脂蛋白等復合構成，內(nèi)層是一層薄的肽聚糖，約僅占細胞壁的10%～20%。 最外面是脂多糖，即內(nèi)毒素，其中的脂類A是內(nèi)毒素的主要毒性成分，多糖具有抗原性，即O特異側鏈。

脂蛋白脂多糖脂質(zhì)雙層形態(tài)與結構G-細胞壁特殊組分外膜3、外膜蛋白(OMP) 層中鑲嵌的多種蛋白質(zhì)的統(tǒng)稱。按含量及功能的重要性可將OMP分為主要及次要兩類。主要外膜蛋白包括微孔蛋白及脂蛋白等。微孔蛋白由三個相同分子量的亞單位組成，形成跨越外膜的微小孔道，起分子篩的作用，僅允許小分子量的營養(yǎng)物質(zhì)如雙糖、氨基酸、二肽、三肽、無機鹽等通過，大分子物質(zhì)不能通過，因此溶菌酶之類的物質(zhì)不易作用到革蘭氏陰性菌的肽聚糖。 某些特異的微孔蛋白與細菌對宿主細胞的黏附或與某些特定物質(zhì)的攝取有關，發(fā)揮受體的作用。將OMP作電泳，呈現(xiàn)一定的圖譜，據(jù)此可對某些革蘭氏陰性菌及菌株進行鑒定、分型以及提供分子流行病學的信息。

4、細胞壁的功能

1、主要是維持細菌外形，保護細菌耐受低滲環(huán)境。細菌細胞質(zhì)內(nèi)含有大分子營養(yǎng)物質(zhì)和高濃度的無機鹽，滲透壓約為50萬～250萬Pa，因有細胞壁菌體不會破裂。2、阻擋對細菌有害的物質(zhì)進入菌體，維持菌體內(nèi)外離子平衡。3、參與細菌的正常分裂。4、與細菌的致病性、抗原性、對噬菌體的敏感性及革蘭氏染色特性等密切相關。5、與細菌對某些藥物的敏感性也有關。5、細胞壁缺陷細菌形成條件生物學特性與醫(yī)學關系形態(tài)與結構細菌L型細胞壁中肽聚糖結構受理化或生物因素的直接破壞或合成抑制而形成。形態(tài)多形性染色革蘭陰性培養(yǎng)高滲培養(yǎng)基菌落油煎蛋樣仍有一定致病性，常發(fā)生在使用作用細胞壁的抗菌素治療過程中，臨床上遇有癥狀明顯而常規(guī)細菌培養(yǎng)陰性者應考慮此菌感染。項目革蘭陽性菌革蘭陰性菌細胞壁的關系染色性紫色紅色細胞壁對酒精的通透性抗原性主要為磷壁酸主要為外膜細胞壁的化學組成不同毒性無內(nèi)毒素有內(nèi)毒素內(nèi)毒素為陰性菌細胞壁成分

脂多糖對青霉素的作用有效無效青霉素作用部位為肽聚糖

五肽交聯(lián)橋?qū)θ芫傅淖饔糜行o效溶菌酶作用部位為肽聚糖

聚糖骨架細胞壁G+菌與G-菌的差別及與細胞壁的關系原生質(zhì)球(spheroplast)用溶菌酶等作用革蘭氏陰性菌，僅能去除細胞內(nèi)的肽聚糖，形成仍有外膜層包裹的菌體，稱為原生質(zhì)球。細菌L型1935年李斯特預防醫(yī)學研究所最先從念珠鏈桿菌的陳舊培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)細胞壁缺陷的念珠鏈桿菌，于是以該研究所的第一個字母"L"命名此種細菌。細菌L型的形態(tài)呈多形性，有球形、桿形和絲狀等。其大小不一，革蘭氏染色多呈陰性。原生質(zhì)體(protoplast)在一定條件下，可除去或缺損細菌的細胞壁并不損害細菌的生命。革蘭氏陽性菌經(jīng)溶菌酶或青霉素處理后，可完全除去細胞壁，形成僅由細胞膜包住細胞質(zhì)的菌體，稱為原生質(zhì)體

。

臨床分離葡萄球菌L型葡萄球菌L型回復后細菌L型菌落類型電鏡照片形態(tài)與結構二、細胞膜為于細胞壁內(nèi)緊包細胞質(zhì)，結構與真核細胞基本相同。功能形態(tài)與結構細胞膜電鏡照片分泌呼吸載體蛋白脂質(zhì)雙層細胞膜模式結構圖物質(zhì)轉(zhuǎn)運生物合成流動鑲嵌鑲嵌模型細菌染色體DNA的復制模式StructureofCytoplasmicMembrane間體(mesosome)

是細胞膜凹入細胞質(zhì)內(nèi)形成的一種囊狀、管狀或?qū)訝畹慕Y構。革蘭氏陽性菌較為常見。其功能與真核細胞的線粒體相似，與呼吸有關，并有促進細胞分裂的作用。白喉桿菌細胞膜與間體三、核區(qū)（nuclearregionorarea）又稱核質(zhì)體、原核、擬核、核基因組(genome）是一個大型環(huán)狀DNA分子；長度為0.25-3.00mm每個細胞所含的核區(qū)數(shù)一般1—4個細菌除在染色體復制時間內(nèi)呈雙倍體外，一般均為單倍體四、細胞質(zhì)

形態(tài)與結構細胞膜包裹的溶膠狀物質(zhì)由水、蛋白質(zhì)、脂類、核酸及少量糖和無機鹽組成細胞質(zhì)內(nèi)含有許多重要結構，常見有核糖體質(zhì)粒胞質(zhì)顆粒與真核細胞不同，抗菌素作用部位染色體外遺傳物質(zhì)，與遺傳變異有關異染顆粒等，可鑒別細菌Cytoplasm1、核糖體(ribosome)核糖體又名核蛋白體，是散布在細胞質(zhì)中的一種核糖核酸蛋白質(zhì)小顆粒。其呈小球形或不對稱形，約由2/3的核糖核酸rRNA和1/3蛋白質(zhì)所組成。是合成蛋白質(zhì)的地方。2、質(zhì)粒(plasmied)是在核體DNA以外，游離的小型雙股DNA分子。多為共價閉合環(huán)狀，也發(fā)現(xiàn)有線狀，分子量在106～108之間。質(zhì)?；蚪M約為核體的1%，含細菌生命非必需的基因，其功能是控制產(chǎn)生菌毛、毒素、耐藥性和細菌素等遺傳性狀。 質(zhì)粒能獨立復制，隨宿主分裂傳給子代菌體。有些質(zhì)粒能與核體DNA整合或脫離，這類質(zhì)粒又稱為附加體(episom)。質(zhì)粒具有與外來DNA重組的功能，所以在基因工程中被廣泛應用作載體。質(zhì)粒染色體(Chromosomes)質(zhì)粒(circularcovalentlyclosedDNA

)質(zhì)粒功能R因子：與抗藥性有關F因子：與有性接合有關其他質(zhì)粒：與抗生素，色素合成有關基因工程中作為目的基因載體3、脂肪滴 細菌最常見的包含物為聚B羥基丁酸,為脂質(zhì)成份，是一些原核生物特有的碳源和能源的貯存形式。4、異染顆粒 是某些細菌細胞質(zhì)中一種特有的酸性小顆粒，對堿性染料的親和性特別強，特別是用陳舊美藍染色時，呈紅紫色，而菌體其他部分則呈藍色。異染顆粒的主要成分是RNA和無機聚偏磷酸鹽，其功能主要是貯存磷酸鹽和能量。某些細菌[如棒狀桿菌等]的異染顆粒非常明顯，有助于細菌鑒定。紅色螺菌的電子顯微鏡圖片Poly-?-hydroxybutyrate,PHB5、糖原(glycogen)和淀粉粒(starch)

有些細菌能在細胞漿內(nèi)積累多聚葡萄糖，一般以糖原或淀粉粒的形式存在，直徑約為50～l00nm,用碘染成紅棕色的是糖原粒，染成藍色的是淀粉粒。它們是貯存的碳素營養(yǎng)。6、氣泡(gasvacuoles)

某些水生性的細菌如藍細菌、鹽桿菌等，在其細胞質(zhì)中能形成氣泡，具有吸收空氣，供氧的代謝，調(diào)節(jié)比重幫助浮起等作用。第三節(jié)細菌的特殊結構細菌細胞除上節(jié)所述的細胞壁等基本結構外，有的還有莢膜、S層、鞭毛、菌毛、芽孢等具特殊功能的結構，有些與細菌的致病力有關，也有助于細菌鑒定，也有助于細菌鑒定。

一、莢膜 1、幾個相關概念： （1）莢膜(capsule)

某些細菌在其生活過程中可在細胞壁的外周產(chǎn)生一種黏液樣的物質(zhì)，包圍整個菌體。 （2）菌膠團多個細菌的莢膜融合形成一大的膠狀物，內(nèi)含多個細菌細胞。 （3）微莢膜莢膜的厚度如在200nm以下，用光學顯微鏡不能看見，但可在電子顯微鏡下看到，稱為微莢膜。 （4）黏液層：有些細菌分泌一層很疏松、與周圍邊界不明顯，易與菌體脫離的黏液樣物質(zhì)，則稱為黏液層(slimelayer)。 （5）糖被：有些細菌具有介于莢膜和黏液層二者之間的結構，稱為糖被。2、莢膜成份多糖純多糖雜多糖多肽和多糖蛋白質(zhì)葡聚糖纖維素果聚糖……多肽海藻酸透明質(zhì)酸……聚-D-谷氨酸…… 3、莢膜的作用

（1）莢膜具有保護細菌的功能?？傻挚箘游锿淌杉毎耐淌珊涂贵w的作用，從而對宿主具有侵襲力。 （2）腐生性細菌的莢膜，有保護細菌免受干燥和其他有害環(huán)境因素的影響。 （3）莢膜也常是營養(yǎng)物質(zhì)的貯藏所和廢物的排出之處。 （4）治理污染產(chǎn)生菌膠團的細菌，可利用其吸附和分解有害物質(zhì)的能力處理污水。 （5）從一些細菌莢膜中可獲得有用的制品：例如從腸膜明串珠菌的莢膜中，可提取葡萄糖，制備代血漿或葡聚糖凝膠等;從甘藍黑腐病黃單胞菌的莢膜中，可提取多糖，制備黃原膠，供食品、印染和石油開采業(yè)中使用。細菌糖被實用意義鑒定菌種提取葡聚糖—“代血漿”胞外多糖：黃原膠用于石油開采菌膠團用于處理污水 4、S層

S為surface之意，是某些細菌的一種特殊的表層結構，它完整地包裹菌體，由單一的蛋白質(zhì)亞單位組成，規(guī)則排列，呈類晶格結構。 作用： 作為分子篩和離子通道。 具有類似莢膜的保護屏障作用。 S層是一種黏附素，可介導細菌對宿主細胞的黏附以及內(nèi)化進入巨噬細胞等。 許多致病菌或致病菌株具有S層結構，如氣單胞菌、彎曲菌、擬桿菌、芽孢桿菌、立克次體等。

二、鞭毛（flagelllum)

1、定義：多數(shù)弧菌、螺菌、許多桿菌、個別球菌的菌體表面長有一至數(shù)十根彎曲的絲狀物，稱為鞭毛。 鞭毛的直徑約5～20nm，長度比菌體長幾倍，約50～200um。電鏡能直接觀察到細菌的鞭毛。細菌經(jīng)特殊的鞭毛染色法，使染料沉積在鞭毛表面，增大其直徑，在光學顯微鏡下也可看到。 2、作用：鞭毛是運動器官，能運動，將細菌穿刺接種含0.3%～0.4%瓊脂的半固體營養(yǎng)瓊脂柱中，培養(yǎng)后觀察，若在穿刺線周圍混濁擴散，表明該菌有鞭毛，具有運動力;若穿刺線周圍仍透明，不混濁，則表明該菌無鞭毛。 鞭毛與細菌的致病性也有關系?；魜y弧菌等通過鞭毛運動可穿過小腸黏膜表面的黏液層，黏附于腸黏膜上皮細胞，進而產(chǎn)生毒素而致病。 3、性質(zhì)：鞭毛的成分是蛋白質(zhì)，具有收縮性。鞭毛具有抗原性，稱為鞭毛抗原或H抗原，不同細菌的H抗原具有型特異性，常作為血清學鑒定的依據(jù)之一。 4、分類：根據(jù)鞭毛的數(shù)量和在菌體上的排列可將細菌分為一端單毛菌、兩端單毛菌、叢毛菌和周毛菌四類。不少常見的細菌為周毛菌。細菌是否產(chǎn)生鞭毛，以及鞭毛的數(shù)目和排列方式，都具有種的特征，可作為鑒定細菌的依據(jù)之一。

三、菌毛大多數(shù)革蘭氏陰性菌和少數(shù)革蘭氏陽性菌的菌體上生長有一種較短的毛發(fā)狀細絲，稱為菌毛，又稱纖毛或傘毛。比鞭毛數(shù)量多。菌毛的直徑約5～10nm，長度約0.2～1.5um，少數(shù)達4um，只能在電子顯微鏡下才能看見。 菌毛分為普通菌毛和性菌兩類。 ※普通菌毛較纖細和較短，數(shù)量較多，每個細菌有50～400條，周身排列;后者較粗、長，每個細菌一般不超過4條，主要起吸附作用。

※性菌毛(sexpilus)是由質(zhì)粒攜帶的致育因子(F因子)編碼產(chǎn)生的，故又稱F菌毛。與細菌的接合有關。另外，性菌毛也是噬菌體吸附在細菌表面的受體。E.colistrainsundergoingconjugation(TEMx27,700)

四、芽孢(Spore)

某些革蘭氏陽性菌在一定的環(huán)境條件下，可在菌體內(nèi)形成一個圓形或卵圓形的休眠體，稱為芽孢，又稱內(nèi)芽孢。 末形成芽孢的菌體稱為繁殖體或營養(yǎng)體，老齡芽孢將脫離原菌體獨立存在，稱為游離芽孢，芽孢不能分裂繁殖，是細菌抵抗外界不良環(huán)境，保存生命的一種休眠結構。 當恢復適宜的環(huán)境條件時，芽孢開始萌發(fā)成新的營養(yǎng)體。 炭疽桿菌的芽孢在污染的土壤中數(shù)十年仍能萌發(fā)。細菌芽孢在光學顯微鏡下的形態(tài)及其在胞內(nèi)的位置 芽孢的形狀、大小、位置隨不同細菌而異，具有鑒別的意義。 例如炭疽桿菌和肉毒梭菌的芽孢均為卵圓形，前者比菌體橫徑小，位于菌體中央，稱為中央芽孢;后者橫徑比菌體大，位于菌體末端，稱偏端芽孢，整個菌體呈梭狀;破傷風梭菌的芽孢為圓形，比菌體大，位于菌體末端，稱為末端芽孢，呈鼓錘狀。 一般的細菌繁殖體經(jīng)100℃煮沸30min可殺死，但形成芽孢后，可耐受100℃數(shù)小時。殺滅芽孢的可靠方法是干熱滅菌或高壓蒸氣滅菌。由于芽孢的抵抗力很強，評價消毒劑的作用一般以能否殺滅芽孢為標準。細菌芽孢構造的模式圖

孢外壁芽孢衣

皮層

芽孢質(zhì)芽孢核區(qū)芽孢膜芽孢壁核心芽孢的形成過程質(zhì)膜內(nèi)陷前芽孢雙層膜形成合成DPA皮層合成芽孢裂解DNA濃縮形成束狀孢衣合成細胞芽孢的表面結構研究芽孢的意義細菌分類、鑒定中的重要形態(tài)學指標指導菌種保藏制定滅菌參數(shù)蘇云金芽孢桿菌和伴孢晶體少數(shù)芽孢桿菌在形成芽孢的同時，會在芽孢旁形成一顆菱形或雙錐形的堿溶性蛋白晶體—δ內(nèi)毒素，稱為伴孢晶體。實用意義：細菌殺蟲劑—生物農(nóng)藥六、細菌的群體形態(tài) 某個細菌在適合生長的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部，在適宜的條件中，經(jīng)過一定時間培養(yǎng)，多數(shù)為18～24h，生長繁殖出巨大數(shù)量的菌體，形成一個肉眼可見的、有一定形態(tài)的獨立群體，稱為菌落(colony)，又稱克隆(clone)。若長出的菌落，聯(lián)成一片，稱為菌苔(lawn)。在細菌培養(yǎng)中，常將細菌作固體平板培養(yǎng)基表面劃線接種，以獲得單個菌落。細菌的理化性質(zhì)化學組成：占細胞總重量75%-90%碳、氫、氮、氧、磷、硫等鉀、鈉、鐵、鎂、鈣等肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸等水：有機物：無機離子：特有成分：物理性狀光學性質(zhì)半透明體表面積體積小、表面積大帶電現(xiàn)象革蘭陽性菌pI2~3革蘭陰性菌pI4~5半透性細胞壁、膜有半透性滲透壓中性環(huán)境帶負電荷革蘭陽性菌20~25大氣壓革蘭陰性菌5~6大氣壓細菌生理活動包括：攝取和合成營養(yǎng)物質(zhì)細菌的新陳代謝細菌的生長繁殖細菌生理第一節(jié)細菌的代謝

細菌與其他生物一樣，有獨立的生命活動，涉及復雜的新陳代謝。細菌的生理涉及細菌的組分、營養(yǎng)要求、能量代謝、生物生長合成繁殖及基因調(diào)控等。細菌與動物真核生物新陳代謝的主要區(qū)別有如下幾點:

1、細菌生長和繁殖速度極快，超過動物細胞10～100倍。2、細菌利用各種化合物作為能源的能力遠遠強于動物細胞。3、細菌對營養(yǎng)的需求比動物細胞更為多種多樣，因為它們有多種代謝旁路。4、細菌可利用非常流水線式生產(chǎn)的方式合成大分子物質(zhì)。5、細菌能產(chǎn)生諸如肽聚糖、脂多糖、磷壁酸等特殊物質(zhì)。一、物質(zhì)的攝取方式

物質(zhì)的跨膜運輸有2種方式：1、被動擴散：是一種不耗能的自由擴散單純擴散、易化擴散。易化擴散二、主動運輸消耗能量，逆濃度差運輸基團轉(zhuǎn)移（協(xié)同擴散）和主動運輸：如鈉鉀泵等。二、生物合成同其他生物三、聚合作用

1、細菌DNA的聚合稱復制。其復制是從基因組的特定起始部位開始，然后沿染色體DNA的復制叉雙相進行，方式是半保留復制。 2、轉(zhuǎn)錄具有兩個顯著特點

（1）細菌由同一個RNA聚合酶催化合成細菌的mRNA、tRNA、rRNA。 （2）細菌mRNA不需要通過核膜轉(zhuǎn)運到胞漿，因此不需要聚A帽狀結構。

3、翻譯即蛋白質(zhì)合成，同真核細胞。四、組裝

細菌細胞結構的組裝有兩種方式：自我組裝又名自我凝聚，及指導組裝又名特異機制。自我組裝可在體外試管內(nèi)完成，鞭毛及核糖體即采用此種方式。細菌表面膜結構則只能依賴指導組裝來完成，過程尚不完全清楚，涉及蛋白質(zhì)的分泌，跨膜運輸及載體分子如細菌萜醇等。 桿菌肽或萬古霉素可干擾細菌細胞成分組裝所需的載體的功能，多黏菌素可影響細胞膜的組裝。1、細菌分解代謝根據(jù)細菌具有不完全相同的酶，分解不同營養(yǎng)物質(zhì)的特點，用生化方法來鑒定細菌稱：細菌的生化反應五、細菌的代謝產(chǎn)物六、常見的生化反應對糖的發(fā)酵對蛋白質(zhì)的發(fā)酵枸櫞酸鹽利用試驗尿素酶試驗甲基紅試驗吲哚試驗硫化氫試驗單糖發(fā)酵試驗VP試驗其他試驗2、細菌合成代謝利用分解代謝的產(chǎn)物和能量，合成新的物質(zhì)合成產(chǎn)物熱原質(zhì)毒素和侵襲性酶色素

抗生素

細菌素

維生素第二節(jié)細菌的生長繁殖

細胞新個體的形成導致細菌的生長繁殖，分別體現(xiàn)在個體和群體兩方面。 一、細菌個體的生長繁殖 細菌以二等分分裂法進行無性繁殖。已知大腸桿菌菌體的分裂過程涉及30多個基因的調(diào)控。

一個菌體分裂為兩個菌體所需的時間稱為世代時間。大腸桿菌及許多其他病原菌在適宜的條件下，分裂一次僅需20min，而細菌染色體DNA的復制約需40min。之所以能如此，是因為在上一輪的復制還未完成時，下一輪的細胞分裂已經(jīng)啟動。此外，染色體DNA存在多個復制叉，可使子代的染色體DNA同時開始部分復制。分支桿菌等繁殖較慢，需18～24h才分裂一次。二、細菌群體的生長繁殖

如將細菌接種在液體培養(yǎng)基并置于適宜的溫度中，定時取樣檢查活菌數(shù)，可發(fā)現(xiàn)其生長過程具有規(guī)律性。

生長曲線:以時間為橫坐標，以活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標，可得出一條生長曲線。曲線顯示了細菌生長繁殖的4個期。對數(shù)期遲緩期

分為四期：遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰退期細菌生長曲線0515202530105.56.08.58.07.57.06.59.0衰退期總菌數(shù)活菌數(shù)細菌數(shù)的對數(shù)次小時穩(wěn)定期 1、遲緩期是細菌來到新環(huán)境的一個適應過程。此時菌體增大，代謝活躍。

2、對數(shù)期細菌此時生長迅速，以恒定速度進行分裂繁殖，活菌數(shù)以幾何級數(shù)增長，達到頂峰，生長曲線接近一條斜的直線。一般而言，該期的病原菌致病力最強，其形態(tài)、染色特性及生理活性均較典型，對抗菌藥物等的作用較為敏感。大腸桿菌的對數(shù)期可持續(xù)6～10h。 3、穩(wěn)定期此時因營養(yǎng)的消耗、代謝產(chǎn)物的蓄積等，細菌繁殖速度下降，死亡數(shù)逐步上升，新繁殖的活菌數(shù)與死菌數(shù)大致平衡。該朔細菌的形態(tài)及生理性狀常有改變，革蘭氏陽性菌此時可染成陰性。毒素等代謝產(chǎn)物大多此時產(chǎn)生。大腸桿菌的穩(wěn)定期持續(xù)約8h。

4、衰亡期細菌開始大量死亡，死菌數(shù)超過活菌數(shù)。如不移植到新的培養(yǎng)基，最終可全部死亡。此期細菌的菌體變形或自溶，染色不典型，難以進行鑒定。

細菌的生長曲線是在體外人工培養(yǎng)條件下觀察到的，在動物體內(nèi)因受諸多因素的制約，未必能出現(xiàn)此種典型的曲線，但對細菌的生長規(guī)律的研究及實踐有重要的參考價值。第三節(jié)細菌的人工培養(yǎng)

用人工方法，提供細菌在動物體內(nèi)生長繁殖需要的基本條件，達到培養(yǎng)細菌，進行鑒定及進一步利用的目的。因此細菌的人工培養(yǎng)技術是微生物學研究和實踐的十分重要的手段。①對氧氣要求：專性需氧菌微需氧菌兼性厭氧菌專性厭氧菌②對CO2要求：5%CO2①水②碳源③氮源④無機鹽⑤生長因子有些細菌需要細菌生長條件3、pH2、溫度1、營養(yǎng)物質(zhì)4、對氣體要求

一、營養(yǎng)物質(zhì)：

培養(yǎng)基:用人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品常用培養(yǎng)基種類厭氧培養(yǎng)基基礎培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基

（1）按營養(yǎng)組成的差異，可將培養(yǎng)基分為基礎培養(yǎng)基及營養(yǎng)培養(yǎng)基。前者含多數(shù)細菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)成分，常用新鮮牛肉浸膏，加入適量的蛋白胨、NaCl、磷酸鹽，調(diào)節(jié)PH至7.2～7.6即成。在基礎培養(yǎng)基中，添加葡萄糖、血液或血清等，即為營養(yǎng)培養(yǎng)基，最常用的是血瓊脂平板。

（2）按物理狀態(tài)的差異，可將培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)三基類。

№1液體培養(yǎng)：

№2半固體培養(yǎng)基：

№3固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中沉淀生長混濁生長表面生長半固體體培養(yǎng)基中混濁生長沿穿刺線生長無菌毛細菌無菌毛細菌細菌的生長情況固體培養(yǎng)基中菌落（S型）菌苔菌落（R型）

（3）按功能的差異，可將培養(yǎng)基分為鑒別培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基及厭氧培養(yǎng)基。

№1鑒別培養(yǎng)基： №2選擇培養(yǎng)基： №3增菌培養(yǎng)基：

二、氧氣：

1、需氧菌

行需氧呼吸，必須在有一定濃度的游離氧的條件下才能生長繁殖。

2、厭氧菌行厭氧呼吸，必須在無游離氧或其濃度極低的條件下才能存活。其原因是，細菌在代謝過程中產(chǎn)生對菌體有毒性的過氧化氫、超氧陰離子和羥自由基等，厭氧菌部分或全部缺乏降解這些產(chǎn)物的酶，如過氧化氫酶、過氧化物酶、超氧化物歧化酶等，因O2或H2O2的毒性作用死亡。

3、兼性厭氧菌既可行需氧呼吸，又可行厭氧呼吸，通常在有氧條件比無氧環(huán)境生長更好。

三、溫度

不同細菌對溫度有不同適應范圍，各種細菌又有各自的可生長溫度范圍及最適溫度。

1、嗜冷菌：生長范圍-5～30℃，最適生長10～20℃;某些嗜冷菌對魚類等變溫動物有致病性。

2、嗜溫菌：生長范圍10～45℃，最適20～40℃;病原菌已適應動物的體溫，因此均為嗜溫菌。

3、嗜熱菌：生長范圍25～95℃，最適50～60℃。如嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌等。

四、酸堿度

pH影響微生物的生長，每種細菌均有一個可適應的pH范圍及最適生長pH。雖然大多數(shù)細菌在pH6～8之間可以生長，但多數(shù)病原菌的最適pH為7.2～7.6，個別偏酸，如鼻疽假單胞菌為pH6.4～6.6；或偏堿如腸球菌為pH9.6。

五、滲透壓

不同細菌有不同滲透壓范圍，多數(shù)病原菌只有在等滲的環(huán)境中才能良好生長。

概念

1、殺菌作用(bacteriocidicaction)指某些物質(zhì)或因素所具有的在一定條件下殺死微生物的作用。

2、抑菌作用(bacteriostaticaction)指某些物質(zhì)或因素所具有的抑制微生物生長與繁殖的作用。

3、抗菌作用(antibioticaction)指某些藥物所具有的抑制或殺滅微生物的作用。

4、滅菌(sterlization)指殺滅物體中所有病原微生物和非病原微生物及其芽孢、霉菌孢子的方法。

5、消毒(disinfection)指殺滅物體中的病原微生物的方法。消毒只要求達到消除傳染性的目的，而對非病原微生物及其芽孢、孢子并不嚴格要求全部殺死。用于消毒的化學物質(zhì)稱消毒劑。

6、防腐(antisepsis)指阻止或抑制微生物生長繁殖的方法。用于防腐的化學物質(zhì)稱防腐劑。

7、無菌(asepsis)指沒有活的微生物的狀態(tài)。采取防止或杜絕任何微生物進入動物機體或其他物體的方法，稱為無菌法。以無菌法進行的操作稱為無菌技術或無菌操作。以無菌技術剖腹產(chǎn)取出分娩胎兒，并在無菌條件下飼喂的動物，稱無菌動物。

8、SPF動物：以無菌方法取出，飼養(yǎng)在相對封閉的環(huán)境中，動物明顯健康，無規(guī)定疫病病原。第一節(jié)物理因素對微生物的影響

一、溫度 不同溫度對微生物生命活動呈現(xiàn)不同的作用。適當?shù)臏囟扔欣谖⑸锏纳L發(fā)育，但溫度過高或過低都會影響微生物的新陳代謝，生長發(fā)育受到抑制，甚至使之死亡。

1、低溫

大多數(shù)微生物對低溫具有很強的抵抗力，當微生物處于最低生長溫度以下時，其代謝活動降低到最低水平，生長繁殖停止，但仍可長時間保持活力。所以，常用來保存細菌。溫度愈低病毒存活的時間也愈長。也有些細菌如腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對低溫特別敏感，在冰箱內(nèi)保存比在室溫下保存死亡更快。

冷凍真空干燥(凍干)法是保存菌種、毒種、疫苗、補體、血清等的良好方法，可保存微生物及生物制劑數(shù)月至數(shù)年而不喪失其活力。其采用迅速冷凍和抽真空除水的原理，將保存物置于玻璃容器內(nèi)，迅速冷凍使溶液中和菌體內(nèi)的水分不形成冰晶，然后抽去容器內(nèi)的空氣，便冷凍物中的水分在真空下因升華作用而逐漸干燥，最后在真空狀態(tài)下對玻璃容器嚴密封口。

在低溫狀態(tài)下真空抽去水分用途：保存菌種冷凍真空干燥法：2、高溫

高溫對微生物具有明顯的致死作用，因此最常用于消毒和滅菌。用高溫處理微生物時，可對菌體蛋白質(zhì)、核酸、酶系統(tǒng)等產(chǎn)生直接破壞作用，熱力可使蛋白質(zhì)中的氫鍵破壞使之變性或凝固，使雙股DNA分開為單股，受熱而活化的核酸酶使單股的DNA斷裂，導致菌體死亡。

熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩類。

在同一溫度下，后者效力比前者為大，這是因為濕熱中菌體蛋白較易凝固。蛋白質(zhì)含水量愈高，凝固所需的溫度愈低;其次濕熱的穿透力比干熱強;而且蒸汽可以釋放大量潛熱，可迅速提高被滅菌物體的溫度。

熱力滅菌法

高溫殺滅細菌焚燒最徹底的滅菌方法燒灼直接用火焰滅菌方法干烤加熱160-180℃2小時干熱滅菌法濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法121℃20~30分鐘煮沸消毒法水煮100℃5分鐘(繁殖體)~2小時(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15~30分鐘(繁殖體)反復多次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（61℃30分鐘）殺滅致病菌濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好原因1、濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱

超高溫巴氏消毒法:

在132℃保持1～2s，加熱消毒后應迅速冷卻至l0℃以下，稱為冷擊法，這樣可進一步促使細菌死亡，也有利于鮮乳等食品馬上轉(zhuǎn)入冷藏保存。超高溫巴氏消毒的鮮乳在常溫下，保存期可長達半年。殺菌機理：應用范圍：3、電離輻射包括高速電子、X射線和γ射線產(chǎn)生游離基，破壞DNA。一次性醫(yī)用塑料制品的消毒食品的消毒不破壞其營養(yǎng)成分

4、光線（1）可見光線可見光線對微生物一般無多大影響，但長時間作用也能妨礙微生物的新陳代謝與繁殖，故培養(yǎng)細菌和保存菌種，均應置于陰暗之處。

（2）陽光直射日光有強烈的殺菌作用，是天然的殺菌因素。許多微生物在直射日光的照射下，半小時到數(shù)小時即可死亡。芽孢對日光照射的抵抗力比繁殖體大得多，往往需經(jīng)20h才死亡。

（3）紫外線紫外線中波長200～300nm部分具有殺菌作用，其中以265～266nm段的殺菌力最強，這與DNA的吸收光譜范圍一致。實驗室通常使用的紫外線殺菌燈，其紫外線波長為253.7nm，殺菌力強而穩(wěn)定。紫外線的穿透力不強，即使是很薄的玻璃也不能透過，所以只能用紫外線殺菌燈消毒物體表面，常用于微生物實驗室、無菌室、手術室、傳染病房、種蛋室等的空氣消毒，或用于不能用高溫或化學藥品消毒物品的表面消毒。5、干燥

微生物在干燥的環(huán)境中失去大量水分，新陳代謝便會發(fā)生障礙，甚至引起菌體蛋白質(zhì)變性和由于鹽類濃度的增高而逐漸導致死亡。不同種類的微生物對干燥的抵抗力差異很大。巴氏桿菌、嗜血桿菌、鼻疽桿菌在干燥的環(huán)境中僅能存活幾天，而結核桿菌能耐受干燥90d。細菌的芽孢對干燥有強大的抵抗力，如炭疽桿菌和破傷風梭菌的芽孢在干燥條件下可存活幾年甚至數(shù)十年以上。霉菌的孢子對干燥也有強大的抵抗力。

由于微生物不能在干燥環(huán)境中生長繁殖，因此常用干燥法來保存食品、飼料、谷類、皮張、藥材等。利用高濃度的鹽溶液或糖溶液保存食品，是由于高濃度的溶液吸取菌體內(nèi)的水分，造成微生物細胞的生理性干燥而達到抑菌的目的。6、超聲波

頻率在20000～200000Hz聲波稱為超聲波。超聲波處理雖可使菌體裂解死亡，但往往有殘存者，又因超聲波費用頗大，故末應用于消毒滅菌。目前主要用于裂解細胞，提取細胞組分，研究其抗原、酶類、細胞壁的化學性質(zhì)以及從組織內(nèi)提取病毒等。7、微波

微波滅菌，主要是利用微波的加熱作用完成。當把滅菌的物品放在微波照射的交變電場中時，物品內(nèi)部的分子隨著電場的變化而相應的旋轉(zhuǎn)振動起來，電場變化快，分子振動也就跟著快;但是，由于分子間的相互作用力即產(chǎn)生摩擦力，因此分子克服其摩擦力而產(chǎn)生熱量，使整個物品則熱起來，起到了摩擦加熱滅菌的作用。這種滅菌法，所需時間短、加熱均勻是其顯著的優(yōu)點。8、濾過除菌法

用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去,以達到除菌目的：濾菌器含有微細小孔<0.22微米,只允許液體或氣體通過，而大于孔徑的細菌等顆粒不能通過適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌濾菌過程第二節(jié)化學因素對微生物的影響

防腐消毒劑：許多化學藥物能夠抑制或殺死微生物，已廣泛用于消毒、防腐,統(tǒng)稱為防腐消毒劑。消毒劑它在殺滅病原微生物的同時，對動物體的組織細胞也有損害作用。

化學治療劑：用于消除宿主體內(nèi)病原微生物或其他寄生蟲的化學藥物稱為化學治療劑?；瘜W治療劑對于宿主和病原微生物的作用具有選擇性，它們使其生命活動受到抑制或使其死亡，而對宿主細胞毒副作用甚小。一、消毒劑的種類及其應用

1、消毒劑的條件

種類很多，其殺菌作用亦不相同，一般可根據(jù)用途與消毒劑特點選擇使用。最理想的消毒劑應是殺菌力強、價格低、無腐蝕性、能長期保存、對動物無毒性或毒性較小、無殘留或?qū)Νh(huán)境無污染的化學藥物。

2、消毒劑的殺菌機制

復雜而多樣，根據(jù)對菌體的作用大致可分為:(1)使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固，例如酚類(高濃度)、醇類、重金屬鹽類(高濃度)、酸堿類、醛類；(2)損傷胞漿膜，例如酚類(低濃度)、表面活性劑、醇類等脂溶劑；(3)干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝，例如某些氧化劑、重金屬鹽類(低濃度)；(4)改變核酸的功能，例如染料、烷化劑等。二、影響消毒劑作用的因素消毒劑細菌

環(huán)境種類濃度作用時間菌齡種類有機物溫度酸堿度1、消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時間

絕大多數(shù)消毒劑在高濃度時殺菌作用大，例外的有70%乙醇或50%～70%異丙醇的消毒效果最好。 消毒劑在一定濃度下，對細菌的作用時間愈長，消毒效果也愈強。2、微生物的種類與數(shù)量

同一消毒劑對不同種類和處于不同生長期的微生物的殺菌效果不同；微生物的數(shù)量越大，所需消毒的時間就越長。

3、溫度

一般溫度升高，可增強消毒劑的殺菌效果。溫度每增高l0℃，重金屬鹽類的殺菌作用約增加2～5倍，石炭酸的殺菌作用約增加5～8倍。4、酸堿度

消毒劑的殺菌作用受pH的影響。例如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，當加入碳酸氫鈉后才發(fā)揮殺菌作用。新潔爾滅的殺菌作用是pH愈低所需殺菌濃度愈高，如在pH3時，其所需殺菌濃度較pH9時要高10倍左右。同時pH也影響消毒劑的電離度，一般說，未電離的分子，較易通過細胞壁，殺菌效果好。5、有機物

環(huán)境中有機物的存在，特別是蛋白質(zhì)能和許多消毒劑結合，嚴重降低消毒劑的效果。6、藥物的相互頡抗

消毒劑由于理化性質(zhì)的不同，兩種藥物合用時，可能產(chǎn)生相互頡抗，使藥效降低。如陰離子清潔劑肥皂與陽離子清潔劑苯扎溴銨共用時，可發(fā)生化學反應而使消毒效果減弱，甚至完全消失。7、影響消毒效果的其他因素

還有濕度、穿透力、表面張力及頡抗物質(zhì)等。選擇適當?shù)南緞┑投緝r廉低破壞易貯藏方便有效第三節(jié)生物因素對微生物的影響

自然界中能影響微生物生命活動的生物因素很多，在各種微生物之間，或是在微生物與高等動植物之間，經(jīng)常呈現(xiàn)相互影響的作用，如寄生、共生和頡抗現(xiàn)象等。導致頡抗的物質(zhì)基礎是抗生素、細菌素等細菌的代謝產(chǎn)物。此外植物中也存在殺菌物質(zhì)如黃連素(小蘗堿)，噬菌體則是可殺滅細菌的活的微生物。一、抗生素、植物殺菌素和細菌素

1、抗生素

(mlibiotics)

某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類能抑制或殺死另一些微生物的物質(zhì)稱為抗生素。它們主要來源于放線菌(如鏈霉菌)，少數(shù)來源于某些霉菌(如青霉菌等)和細菌(如多黏菌素)，有些亦能用化學方法合成或半合成。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的抗生素達2500多種，但其大多數(shù)對人和動物有毒性，臨床上最常用的抗生素只有幾十種。藥敏試驗結果及觀察2、植物殺菌素 某些植物中存在有殺菌物質(zhì)，這種殺菌物質(zhì)一般稱為植物殺菌素。中草藥如黃連、黃柏、黃芹、大蒜、金銀花、連翹、魚腥草、穿心蓮、馬齒覓、板藍根等都含有殺菌物質(zhì)，其中有的已制成注射液或其他制劑的藥品。3、細菌素 是某種細菌產(chǎn)生的一種具有殺菌作用的蛋白質(zhì)。只能對同種細菌不同菌株產(chǎn)生作用。二、噬菌體

噬菌體是寄生于細菌、霉形體、螺旋體、放線菌以及藍細菌等的一類病毒，亦稱細菌病毒。在自然界分布極廣，凡是有上述各類微生物的地方，都有相應種類噬菌體的存在，其數(shù)目與寄主的數(shù)量成正比。有人將真菌病毒列屬此類。1、形態(tài)和結構

噬菌體有四種外形，即蝌蚪形、微球形、細桿形和檸檬形。典型的蝌蚪形噬菌體由頭部和尾部兩部分組成，頭部呈二十面體，等軸對稱或延長，是由蛋白質(zhì)衣殼內(nèi)含一分子的線狀雙股DNA構成;尾部主要含蛋白質(zhì)，呈螺旋型并能收縮(80～455nm)、或細長而不能收縮(64～570m)、或短而不能收縮三種類型。2、噬菌體的應用

（1）細菌的鑒定和分型噬菌體的噬菌作用具有種和型的特異性，即一種噬菌體只能裂解一種和它相應的細菌或僅能作用于該種細菌的某一型，故可用于細菌的鑒定與分型。例如，用傷寒沙門氏菌Vi噬菌體可將有Vi抗原的傷寒沙門氏菌分為96個噬菌體型;用34株分型噬菌體，可將鼠傷寒沙門氏菌分為207個噬菌體型;應用噬菌體裂解試驗還可鑒定末知的炭疽桿菌等。（2）檢測未知細菌應用噬菌體效價增長試驗可檢測標本中的相應細菌。即在疑有某些細菌存在的標本中，加入一定數(shù)量的已知相應噬菌體，37℃培養(yǎng)6～8h，再進行該噬菌體的效價測定。若其效價有明顯增長，則表明標本中有某種細菌的存在。（3）分子生物學研究的工具噬菌體的結構簡單，易操作，曾作為研究病毒增殖的模式。其基因數(shù)較少，已成為研究核酸復制、轉(zhuǎn)錄、重組以及基因表達的調(diào)節(jié)、控制等的重要對象，促進了分子生物學等學科的發(fā)展。還可作為基因的載體，應用于遺傳工程的研究。近年來應用絲狀噬菌體表達特異抗原的基因，所謂噬菌體表面展示技術，已成為制備基因工程抗體的重要手段。

生態(tài)學是一門研究生物系統(tǒng)與環(huán)境系統(tǒng)之間的相互作用及其機理的科學。即研究生物與生物、生物與環(huán)境的相互依賴和相互制約的科學。微生態(tài)學就是研究微生物群、微生物區(qū)系或正常菌群對周圍生物和非生物環(huán)境條件相互作用關系的科學。一、土壤、水、空氣中微生物

的種類和分布一、土壤中微生物的種類和分布二、空氣中微生物的種類和數(shù)量三、土壤、水、空氣中的病原微生物及其傳播

1、土壤土壤中的病原微生物是隨動植物殘體、人畜排泄物和分泌物、污水、垃圾等廢棄物一起進入土壤的。一些人和動物的病原菌與其他病原微生物，在條件適宜時以土壤為媒介，引起人和動物傳染病的發(fā)生，即為土壤傳播。

大多數(shù)病原微生物只能在土壤中存活較短時間，只有少數(shù)抵抗力強的能形成芽孢的病原菌，如炭疽桿菌、氣腫疽梭菌、等形成芽孢后能在土壤中生存數(shù)年甚至幾十年。此外，還有一些抵抗力較強的無芽孢病原菌也能生存較長時間。土壤一旦污染了這些病原菌，則可成為疫源地，隨時都有可能使人和動物感染相應的傳染病。 2、水病原微生物可隨人和動物的排泄物、分泌物、血液、內(nèi)臟、尸體以及醫(yī)院、獸醫(yī)院、屠宰場、皮毛加工廠等排出的污水和垃圾直接或間接污染水源，可通過大小河流廣泛傳播，或透過 土壤侵入地下水，可由污 染的飲水引起人和動物傳 播病發(fā)生，許多傳染病特 別是腸道傳染病往往順著 河流或供水系統(tǒng)迅速蔓 延，即為水傳染。

借水傳播的傳染病常見的有傷寒、副傷寒、痢疾、霍亂、結核、布魯氏菌病、巴氏桿菌病、炭疽、馬鼻疽、馬腺疫、豬丹毒、口蹄疫、豬瘟及其他傳染病等。鉤體

3、空氣空氣中一般沒有病原微生物存在，但在醫(yī)院、獸醫(yī)院以及畜禽廄舍附近的空氣中，常懸浮帶有病原微生物的氣溶膠，健康人或動物往往因吸人而感染，分別稱為飛沫傳播和塵埃傳播，總稱為空氣傳播。

入空氣中的病原微生物一般很易死亡，如某些病毒和霉形體等在空氣中僅生存數(shù)小時，只有一些抵抗力較強的病原微生物可在空氣中生存一個時期，如化膿性葡萄球菌、肺炎球菌、鏈球菌、結核桿菌、炭疽桿菌、破傷風梭菌、氣腫疽梭菌、綠膿桿菌等。帶有病原微生物的氣溶膠常引起呼吸道傳染病，如結核、肺炎、肺炭疽、流行性感冒;有時可 使新鮮創(chuàng)面發(fā)生化膿性感染。四、土壤、水、空氣的細菌學檢驗

被病原微生物污染的土壤、水和空氣，?？沙蔀閭魅镜膩碓椿蛎浇椋饌魅静×餍?。因此，進行土壤、水和空氣的細菌學檢查，測定細菌對土壤、水和空氣污染的性質(zhì)和程度，對于傳染病預防與控制以及環(huán)境的衛(wèi)生學監(jiān)督與保護，均具有重要的意義。污染于土壤、水和空氣中的病原菌和其他病原微生物種類多但數(shù)量小，逐一檢查難以進行或不易檢出，某些病原微生物檢查需要復雜的設備和條件，故常以測定細菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)等作為細菌學指標。

1、細菌總數(shù)：是指于固體培養(yǎng)基上，在一定條件下培養(yǎng)后單位重量(g)、容積(ml)、表面積(m2)或體積(m3)的被檢樣品所生成的細菌菌落總數(shù)。它只反映一群在普通營養(yǎng)瓊脂中生長的、嗜溫的、需氧和兼性厭氧的細菌菌落總數(shù)，常作為被檢樣品受污染程度的標志，用作土壤、水、空氣和食品等衛(wèi)生學評價的依據(jù)。

大腸菌群：是指一群在37℃培養(yǎng)24h能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。這一群細菌包括大腸桿菌屬、拘椽酸菌屬、腸桿菌屬、克雷伯菌屬中的一部分和沙門氏菌屬腸道亞種的細菌，它們主要來自人和溫血動物的糞便，故以此作為土壤、水和食品等受糞便污染的標志，以其含量多少來判定衛(wèi)生質(zhì)量。伊紅美藍上的大腸桿菌大腸菌群可能數(shù)

指100g(或100ml)檢樣內(nèi)所含大腸菌群的最可能數(shù)(mostprobable，MPN)。有時為了更確切地反映糞便污染，用糞大腸菌群作指標。是指在44土0.5℃培養(yǎng)24h能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、在蛋白陳水中生長產(chǎn)生靛基質(zhì)的、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，主要是指大腸桿菌。

項目級別細菌總數(shù)萬個/克大腸菌值產(chǎn)氣莢膜梭菌值清潔1>1.0>0.1輕度污染缺1.0～0.010.1～0.001中度污染缺0.1～0.0010.001～0.0001嚴重污染數(shù)百>0·001>0.0001

1、土壤土壤的細菌學檢查，主要是測定細菌總數(shù)、大腸菌值和產(chǎn)氣莢膜梭菌值(也作為糞便污染的指標)三項指標。大腸菌值(產(chǎn)氣莢膜梭菌值)是指能檢出大腸桿菌(產(chǎn)氣莢膜梭菌)的最小土壤量(g)。

2、水水的細菌學檢查，主要是測定細菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)。我國曾規(guī)定，生活飲用水(自來水)的衛(wèi)生指標為細菌總數(shù)不得超過100個/ml，總大腸菌群數(shù)不得超過3個。

3、空氣空氣的細菌學檢查，主要是測定每1m3空氣中的細菌總數(shù)、鏈球菌數(shù)。我國1988年頒布的公共場所室內(nèi)空氣衛(wèi)生指標中，規(guī)定細菌總數(shù)不得超過4000個/m3，三級以上的旅館不得超過2000個/m3，商店、火車站、航運站、汽車站、火車車箱(冬季)不得超過6000個/m3，客機(冬季)不得超過3000個/m3。畜舍的氣溶膠中病原微生物的檢測指標正在研究之中。二、正常動物體的細菌

動物的皮膚、黏膜以及一切與外界環(huán)境相通的腔道，如口腔、鼻咽腔、氣管、消化道和泌尿生殖道等，都有細菌和其他微生物的存在。但機體的內(nèi)部組織器官，正常情況下是無菌的。幾個概念

1、自身菌：在這些微生物中，有的是長期生活在動物體表或體內(nèi)的共生的或寄生的微生物，稱為自身菌，系常住菌系；

2、外來菌：從土壤、水、空氣和動物所接觸的環(huán)境中污染的細菌，稱為外來菌系或過路菌系。

3、原籍菌：是微生物與其宿主在共同的長期進化過程中形成的，各自在動物體內(nèi)特定的部位定居繁殖，定殖區(qū)域內(nèi)的菌類及其數(shù)量 基本上保持穩(wěn)定，正常 情況下對宿主健康有益 或無害，具有免疫、營 養(yǎng)及生物拮抗的作用。腸黏膜上的腸球菌 4、外籍菌：一般不能定殖在皮膚和黏膜表面，如果發(fā)生了定殖往往對宿主產(chǎn)生不利影響。

ColonizationoftrachealepithelialcellsbyBordetellapertussis一、機體微生物1、皮膚

皮膚表面溫度適中(33一37oC)，pH稍偏酸(4一8)，可利用水一般不足，汗液中有無機離子和其他有機物，是微生物生長的合適生境。表面的脂類物質(zhì)和鹽度對微生物組成有重要影響。優(yōu)勢的細菌種群是革蘭氏陽性菌，它們包括葡萄球菌屬、微球菌屬、棒桿菌屬等。人和動物體微生物及病原微生物的傳播

革蘭氏陰性菌較少見于皮膚。真菌有瓶形酵母屬。皮膚表面正常棲居的微生物對外來微生物具有排斥作用，可以防止外來微生物和病原微生物的侵染，對皮膚有保護作用。2、口腔 口腔是一個有利于微生物生長的生境:(1)溫度穩(wěn)定;(2)水分充足;(3)口腔內(nèi)高低不平的表面為微生物提供多樣的微生境;(4)營養(yǎng)豐富;(5)唾液提供微生物生長因子，也含有抗微生物物質(zhì);(6)好氧的大環(huán)境和厭氧的微生境并存。其中齲齒的發(fā)生就與微生物有關，已有人研究齲齒疫苗。3、胃腸道微生物：胃腸道微生物對機體有利也有害正常菌群與條件致病菌正常菌群

正常存在于人體外表和同外界相通的腸道、呼吸道等腔道中，人體免疫功能正常時，對宿主無害，有些還有利的微生物。正常菌群的生理學意義生物拮抗作用營養(yǎng)作用免疫作用抗衰老作用腸道的正常菌群健康青年糞便涂片健康壯年糞便涂片健康中年糞便涂片有關概念1、感染

(infection)是指病原微生物在宿主體內(nèi)持續(xù)存在或增殖。2、發(fā)病

(disease)表示病原微生物感染之后，對宿主造成明顯的損害。3、病原菌(pathogenicbacteria)是指那些導致機體發(fā)病的細菌。是一群高度特化了的微生物，為了自身的生存，已適應而且必須在宿主生物體內(nèi)持續(xù)存在或增殖。非致病菌：不能造成宿主感染的為非致病菌；條件致病菌：在正常情況下不致病，在某些條件改變的特殊情況下可以致?。坏谝还?jié)細菌的致病性和毒力一、概念

1.致病性(Pathogenicity)：一定種類的病原菌在一定的條件下，能在宿主體內(nèi)引起感染的能力。細菌的致病性是針對宿主而言；不同的病原菌對宿主可引起不同的疾病，表現(xiàn)為不同的臨床癥狀和病理變化，如炭疽桿菌引起炭疽，而霍亂弧菌則引起霍亂。因此，致病性是細菌種的特征之一。 2.毒力(virulent)：病原菌致病力的強弱程度稱為毒力，同一細菌的不同菌株，其毒力不一樣，因此，毒力是菌株的特征。二、細菌致病性的確定

著名的柯赫法則是確定某種細菌是否具有致病性的主要依據(jù)，其要點是：

1.特殊的病原菌應在同一疾病中查見，在健康者不存在;2.此病原菌能被分離培養(yǎng)而得到純種;

3.此純培養(yǎng)物接種易感動物，能導致同樣病癥;4.自實驗感染的動物體內(nèi)能重新獲得該病原菌的純培養(yǎng)。

近年來隨著分子生物學的發(fā)展，“基因水平的柯赫法則”應運而生。

取得共識的有以下幾點:

第一，應在致病菌株中檢出某些基因或其產(chǎn)物，而無毒力菌株中無。 第二，如有毒力菌株的某個基因被損壞，則菌株的毒力應減弱或消除。或者將此基因克隆到無毒菌株內(nèi)，后者成為有毒力菌株。 第三，將細菌接種動物時，這個基因應在感染的過程中表達。 第四，在接種動物檢測到這個基因產(chǎn)物的抗體，或產(chǎn)生免疫保護。

該法則也適用于細菌以外的微生物，如病毒。三、細菌毒力的測定 1、半數(shù)致死量

(medianlethaldose，LD50)是指能使接種的實驗動物在感染后一定時限內(nèi)死亡一半所需的微生物量或毒素量。

2、半數(shù)感染量

(medianinfectiousdose，ID50)某些病原微生物只能感染實驗動物、雞胚或細胞，但不引致死亡，可用ID50來表示其毒力。測定的方法與測定LD50類似，只不過在統(tǒng)計結果時以感染者代替死亡者。第二節(jié)細菌的毒力因子及分泌系統(tǒng)一、概念

1、毒力因子(virulentfactor)：構成細菌毒力的物質(zhì)稱為毒力因子，主要有侵襲力和毒素，此外有些毒力因子尚不明確。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，細菌的許多重要毒力因子的分泌與細菌的分泌系統(tǒng)有關。

2、侵襲力(invasiveness)：病原菌在機體內(nèi)定殖，突破機體的防御屏障，內(nèi)化作用，繁殖和擴散，這種能力稱為侵襲力。

3、定殖(Colonization)：細菌感染的第一步就是在體內(nèi)定殖(或稱定居)，實現(xiàn)定