家蠶種質(zhì)資源活體保護(hù)技術(shù)規(guī)程

1家蠶種質(zhì)資源活體保護(hù)技術(shù)規(guī)程本文件確立了家蠶種質(zhì)資源活體保護(hù)技術(shù)的程序，界定了家蠶種質(zhì)資源活體保護(hù)技術(shù)涉及的術(shù)語(yǔ)和定義，規(guī)定了設(shè)施設(shè)備及人員、活體保護(hù)原則的要求，以及出庫(kù)浸酸、蠶種催青、選卵、包種、收蟻、飼育、選蠶、上蔟采繭、種繭保護(hù)、種繭調(diào)查選擇、交配產(chǎn)卵、蠶種保護(hù)與冷藏和檔案記錄等階段的操作指示。本文件適用于家蠶種質(zhì)資源活體的保護(hù)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB45/T83種繭育養(yǎng)蠶技術(shù)規(guī)程DB45/T84桑蠶種保護(hù)、冷藏、浸酸技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1家蠶種質(zhì)資源silkwormgermplasmresources經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期自然演化或人工選育而形成的，可遺傳給子代進(jìn)行繁衍的家蠶遺傳材料。注：包括地方品種、育成品種、國(guó)外引進(jìn)品種、野生資源種及其他遺傳材料。3.2家蠶種質(zhì)資源活體保護(hù)livingbodyprotectionofsilkwormgermplasmresources在一定的環(huán)境條件下，通過(guò)活體蠶卵處理、幼蟲(chóng)飼養(yǎng)、交配產(chǎn)卵等過(guò)程進(jìn)行控制與保護(hù)，使家蠶種質(zhì)資源遺傳信息從親代安全傳遞到子代的過(guò)程。4設(shè)施設(shè)備及人員要求4.1設(shè)施設(shè)備4.1.1蠶種催青室內(nèi)配置蠶架、蠶匾、蠶種箱、溫濕度調(diào)控、解剖鏡、光線調(diào)節(jié)等設(shè)備。4.1.2養(yǎng)蠶室設(shè)前走廊、后走廊、養(yǎng)蠶間、桑葉貯存室。前走廊為養(yǎng)蠶人員通行及桑葉運(yùn)輸通道；后走廊為處理蠶沙通道；養(yǎng)蠶間配置蠶架、蠶匾等附屬蠶具；桑葉貯存室配備切桑設(shè)備、裝葉框。4.1.3無(wú)害化設(shè)施應(yīng)遠(yuǎn)離桑園、蠶室、制種室，封閉性能良好。4.1.4上蔟室配備蠶架、蠶匾、塑料折蔟、覆蔟網(wǎng)等。4.1.5種繭保護(hù)室配備蠶架、蠶匾、標(biāo)識(shí)牌等。2選卵蠶種催青飼育收蟻包種選蠶種繭保護(hù)選繭上蔟采繭種繭調(diào)查稱繭選卵蠶種催青飼育收蟻包種選蠶種繭保護(hù)選繭上蔟采繭種繭調(diào)查稱繭4.1.6種繭評(píng)價(jià)室配備電子天平、電腦、蠶繭隔粒器、種繭盒等。4.1.7制種室配備蠶架、蠶匾、產(chǎn)卵板、蠶種紙、蛾圈、蛾盒、蓋蛾板、單蛾三角蛾袋等。4.1.8母蛾調(diào)節(jié)冷庫(kù)配備蠶架，具有0℃至室溫調(diào)節(jié)范圍，配備溫度監(jiān)測(cè)設(shè)備等。4.1.9蠶種保護(hù)、冷藏、浸酸設(shè)施設(shè)備符合DB45/T84的要求。4.2人員要求配備相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員負(fù)責(zé)催青、養(yǎng)蠶、制種、蠶種冷藏浸酸、蠶種檢疫等工作。5活體保護(hù)原則妥善保存種質(zhì)資源，不致丟失滅絕；保持種質(zhì)資源固有性狀，不致混雜或退化。種質(zhì)資源保護(hù)全程由專人操作，繼代過(guò)程中淘汰的卵、蠶、繭、蛹、蛾作無(wú)害化處理，嚴(yán)防種質(zhì)資源外泄。6活體保護(hù)流程見(jiàn)圖1。出庫(kù)浸酸選蛹蠶種保護(hù)與冷藏 交配產(chǎn)卵蠶種保護(hù)與冷藏圖1家蠶種質(zhì)資源活體保護(hù)技術(shù)流程7活體保護(hù)要求7.1出庫(kù)浸酸按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。7.2蠶種催青蠶種解除滯育后，附上寫(xiě)有種質(zhì)資源名稱、出庫(kù)日期、計(jì)劃收蟻日期等信息的標(biāo)識(shí)牌。蠶卵發(fā)育至戊3胚子前，溫度24℃~25℃,相對(duì)濕度7580蠶卵發(fā)育至戊3胚子，溫度28℃~30℃,相對(duì)濕度80％～85％。光線的調(diào)節(jié)按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。7.3選卵點(diǎn)青前對(duì)蠶種進(jìn)行初選，選留符合種質(zhì)資源固有的卵色、卵形、化性，淘汰不良卵多的卵圈；轉(zhuǎn)青后復(fù)選，淘汰點(diǎn)青、轉(zhuǎn)青不整齊的卵圈。37.4包種現(xiàn)行育成品種親本資源采取單蛾包種，各品種每批包種不少于20個(gè)卵圈，每個(gè)卵圈作為一個(gè)飼育區(qū)，用白紙包好，遮光處理；其他種質(zhì)資源按每5～10個(gè)卵圈作為一個(gè)飼育區(qū)，用白紙包好，分3個(gè)飼育區(qū)，遮光處理。7.5收蟻7.5.1收蟻前準(zhǔn)備收蟻前，蠶室調(diào)整至目的溫濕度；準(zhǔn)備好飼育區(qū)片、蠶座紙、薄膜、稱量?jī)x器、蠶筷、鵝毛等收蟻用具；收蟻用葉、切葉按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行。7.5.2收蟻方法單蛾飼育區(qū)收蟻可采用直接桑引法。混養(yǎng)飼育區(qū)收蟻采用桑引法或打落法，分區(qū)并放入對(duì)應(yīng)區(qū)片。收蟻當(dāng)天早上6:00對(duì)蠶種進(jìn)行感光處理。春季收蟻在上午9:00進(jìn)行，夏、秋季收蟻在上午8:00進(jìn)行，收蟻結(jié)束后保留卵殼作卵質(zhì)調(diào)查、微粒子病補(bǔ)正檢查。7.6飼育7.6.1小蠶飼育春用種質(zhì)資源1～3齡小蠶適宜溫度27℃~29℃,相對(duì)濕度8590夏秋用種質(zhì)資源1～3齡小蠶適宜溫度29℃~30℃,相對(duì)濕度85％～90％。用葉、切葉按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行，每日三回育。眠前、起蠶各除沙一次。7.6.2大蠶飼育春用種質(zhì)資源4～5齡大蠶適宜溫度25℃~26℃,相對(duì)濕度7075夏秋用種質(zhì)資源4～5齡大蠶適宜溫度27℃~28℃,相對(duì)濕度70％～75％。一化性、二化性及特殊種質(zhì)資源依其生態(tài)適應(yīng)性設(shè)置飼養(yǎng)溫濕度。片葉飼喂，每日三回育，眠前、起蠶各除沙一次，每日除沙一次。7.6.3蠶期處理擴(kuò)座、勻座、眠起處理、除沙按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行。飼育期詳細(xì)記錄每個(gè)種質(zhì)資源的齡期經(jīng)過(guò)、性狀、特性及弱小蠶、病蠶發(fā)生情況。7.7選蠶幼蟲(chóng)期淘汰體色、斑紋、體形、眠性等不符合種質(zhì)資源固有特性的個(gè)體。對(duì)于基因突變系統(tǒng)資源，根據(jù)其生物學(xué)性狀及其遺傳規(guī)律確定留種個(gè)體。對(duì)于特殊性狀種質(zhì)資源，根據(jù)其目標(biāo)性狀確定留種個(gè)體?；祓B(yǎng)飼育區(qū)4齡起蠶后24h～36h，每區(qū)定蠶300～350頭。7.8上蔟采繭7.8.1上蔟上蔟前用具、環(huán)境保持干燥潔凈；上蔟時(shí)以飼育區(qū)為單位分區(qū)上蔟，每區(qū)加蓋覆蔟網(wǎng)以防種質(zhì)資源逃逸混雜；上蔟后每日早晚巡查，及時(shí)撿出淘汰游山蠶并記錄。47.8.2蔟中保護(hù)春用種質(zhì)資源蔟中適宜溫度25℃~26℃,相對(duì)濕度7075夏秋用種質(zhì)資源蔟中適宜溫度26℃~28℃,相對(duì)濕度7075通風(fēng)透氣，光線均勻，避免陽(yáng)光直射及劇烈震動(dòng)。7.8.3適時(shí)采繭實(shí)行早采繭，即未化蛹時(shí)采繭。上蔟后32h～48h采繭，輕采、輕放，采下的蠶繭平鋪在蠶匾上，及時(shí)放到種繭保護(hù)室。采繭時(shí)嚴(yán)格分區(qū)放置，嚴(yán)防混雜，并記錄每區(qū)的蔟中病死蠶頭數(shù)。7.9種繭保護(hù)種繭保護(hù)室加強(qiáng)通風(fēng)，嚴(yán)防悶熱，晝夜光線分明，防止鼠蟻為害。春用種質(zhì)資源適宜溫度25℃~26℃,相對(duì)濕度70％～75％；夏秋用種質(zhì)資源適宜溫度26℃~28℃,相對(duì)濕度70％～75％。蛹體觸角著色后至羽化時(shí)環(huán)境相對(duì)濕度提高至75％～80％。7.10種繭調(diào)查7.10.1調(diào)查方法蛹體復(fù)眼著色時(shí)（改為上蔟后第6d）開(kāi)始調(diào)查，調(diào)查種繭主要外觀性狀指標(biāo)和生產(chǎn)性能指標(biāo)。7.10.2計(jì)算方式7.10.2.1結(jié)繭率計(jì)算見(jiàn)公式（1）：式中：a——結(jié)繭率,單位為百分比(%);b——結(jié)繭粒數(shù)，單位為粒（粒）；c——蠶期病斃蠶數(shù),單位為只（只）；d——蔟中病斃蠶數(shù),單位為只（只）。7.10.2.2死籠率計(jì)算見(jiàn)公式（2）：式中：e——死籠率,單位為百分比(%);f——死籠總頭數(shù)，單位為只（只）；g——結(jié)繭頭數(shù),單位為只（只）。蟲(chóng)蛹統(tǒng)一生命力計(jì)算見(jiàn)公式（3）： 式中：h——蟲(chóng)蛹統(tǒng)一生命力,單位為百分比(%);a——結(jié)繭率,單位為百分比(%);e——死籠率,單位為百分比（％）。57.11選繭7.11.1依據(jù)種質(zhì)資源固有繭色、繭形特征，以蟲(chóng)蛹統(tǒng)一生命率高的蛾區(qū)為選擇重點(diǎn)，結(jié)合蠶期發(fā)育、眠起、上簇整齊程度，初步篩選留種蛾區(qū)。7.11.2春季批次的種質(zhì)資源選留300粒上繭，烘干處理后，送絲質(zhì)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)調(diào)查絲質(zhì)成績(jī)。7.12稱繭單蛾飼育區(qū)在入選蛾區(qū)中取雌雄繭各20～25粒，分別編號(hào)，對(duì)應(yīng)稱量單繭全繭量、繭層量，計(jì)算繭層率?；祓B(yǎng)飼育區(qū)取雌雄各25～50粒，分別稱量全繭量、繭層量，計(jì)算繭層率。繭層率可按公式（4）計(jì)算。式中：i——繭層率,單位為百分比(%);j——繭層量,單位為克（克）；k——全繭量,單位為克（克）。7.13選蛹7.13.1依據(jù)種質(zhì)資源固有蛹體色、蛹體形特征，從稱量的雌雄繭中擇優(yōu)選留繼代，分別放入蛾盒，做好標(biāo)識(shí)。7.13.2單蛾飼育區(qū)以調(diào)查雌雄相應(yīng)的平均值為篩選基值，入選個(gè)體的全繭量控制在平均值±0.1g，繭層量、繭層率控制在平均值以上。7.14交配產(chǎn)卵7.14.1交配環(huán)境制種室宜弱光、安靜，春用種質(zhì)資源交配適宜溫度為25℃~26℃,濕度7580夏秋用種質(zhì)資源交配適宜溫度為26℃~28℃,濕度75％～80％。7.14.2交配早上5:00感光羽化，8:00～9:00投蛾交配，交配時(shí)間4h～6h。投蛾后15min～30min，提出單蛾，另行交配。7.14.3雄蛾處理拆對(duì)后需重交的雄蛾及當(dāng)天不用的新鮮雄蛾，盡快放入5℃~8℃低溫室保護(hù)，保護(hù)時(shí)間不應(yīng)超過(guò)7.14.4拆對(duì)、排尿按各種質(zhì)資源所需交配時(shí)長(zhǎng)拆對(duì)，將雌蛾放在蛾盒中輕輕振動(dòng)，使雌蛾充分排尿，同時(shí)選除不良蛾及雄蛾。67.14.5產(chǎn)卵7.14.5.1鋪放蠶種紙蠶種紙上標(biāo)明種質(zhì)資源系統(tǒng)、名稱、產(chǎn)卵日期、編號(hào)、用種日期、保種單位名稱，將蠶種紙鋪于產(chǎn)卵板上，并放置制種蛾圈備用。7.14.5.2投蛾將充分排尿的雌蛾單蛾投入對(duì)應(yīng)的蛾圈制種，放置蓋蛾板以防混雜。7.14.5.3產(chǎn)卵環(huán)境暗室產(chǎn)卵，注意換氣。春用種質(zhì)資源適宜溫度為25℃~27℃,濕度8085夏秋用種質(zhì)資源適宜溫度為28℃~29℃,濕度80％～85％。7.14.5.4檢疫、收種投蛾后次日上午袋蛾收種，蛾袋上標(biāo)明對(duì)應(yīng)蠶種紙蛾圈編號(hào)、蠶種編號(hào)、產(chǎn)卵日期、母蛾總數(shù)，送至檢疫中心檢驗(yàn)檢疫。將當(dāng)日所收蠶種按用種需求分類裝入蠶種箱。7.15蠶種保護(hù)與冷藏按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。8資料歸檔各批次結(jié)束，應(yīng)及時(shí)整理資料，填寫(xiě)“家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表”（參見(jiàn)附錄A）和“家蠶種質(zhì)資源飼育成績(jī)調(diào)查表”（參見(jiàn)附錄B）。及時(shí)將資料裝訂成冊(cè)，并妥善保存。7（資料性）家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表見(jiàn)下表A.1。表A.1家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表