家蠶種質(zhì)資源活體保護技術(shù)規(guī)程

1家蠶種質(zhì)資源活體保護技術(shù)規(guī)程本文件確立了家蠶種質(zhì)資源活體保護技術(shù)的程序，界定了家蠶種質(zhì)資源活體保護技術(shù)涉及的術(shù)語和定義，規(guī)定了設(shè)施設(shè)備及人員、活體保護原則的要求，以及出庫浸酸、蠶種催青、選卵、包種、收蟻、飼育、選蠶、上蔟采繭、種繭保護、種繭調(diào)查選擇、交配產(chǎn)卵、蠶種保護與冷藏和檔案記錄等階段的操作指示。本文件適用于家蠶種質(zhì)資源活體的保護。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB45/T83種繭育養(yǎng)蠶技術(shù)規(guī)程DB45/T84桑蠶種保護、冷藏、浸酸技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1家蠶種質(zhì)資源silkwormgermplasmresources經(jīng)過長期自然演化或人工選育而形成的，可遺傳給子代進行繁衍的家蠶遺傳材料。注：包括地方品種、育成品種、國外引進品種、野生資源種及其他遺傳材料。3.2家蠶種質(zhì)資源活體保護livingbodyprotectionofsilkwormgermplasmresources在一定的環(huán)境條件下，通過活體蠶卵處理、幼蟲飼養(yǎng)、交配產(chǎn)卵等過程進行控制與保護，使家蠶種質(zhì)資源遺傳信息從親代安全傳遞到子代的過程。4設(shè)施設(shè)備及人員要求4.1設(shè)施設(shè)備4.1.1蠶種催青室內(nèi)配置蠶架、蠶匾、蠶種箱、溫濕度調(diào)控、解剖鏡、光線調(diào)節(jié)等設(shè)備。4.1.2養(yǎng)蠶室設(shè)前走廊、后走廊、養(yǎng)蠶間、桑葉貯存室。前走廊為養(yǎng)蠶人員通行及桑葉運輸通道；后走廊為處理蠶沙通道；養(yǎng)蠶間配置蠶架、蠶匾等附屬蠶具；桑葉貯存室配備切桑設(shè)備、裝葉框。4.1.3無害化設(shè)施應(yīng)遠離桑園、蠶室、制種室，封閉性能良好。4.1.4上蔟室配備蠶架、蠶匾、塑料折蔟、覆蔟網(wǎng)等。4.1.5種繭保護室配備蠶架、蠶匾、標識牌等。2選卵蠶種催青飼育收蟻包種選蠶種繭保護選繭上蔟采繭種繭調(diào)查稱繭選卵蠶種催青飼育收蟻包種選蠶種繭保護選繭上蔟采繭種繭調(diào)查稱繭4.1.6種繭評價室配備電子天平、電腦、蠶繭隔粒器、種繭盒等。4.1.7制種室配備蠶架、蠶匾、產(chǎn)卵板、蠶種紙、蛾圈、蛾盒、蓋蛾板、單蛾三角蛾袋等。4.1.8母蛾調(diào)節(jié)冷庫配備蠶架，具有0℃至室溫調(diào)節(jié)范圍，配備溫度監(jiān)測設(shè)備等。4.1.9蠶種保護、冷藏、浸酸設(shè)施設(shè)備符合DB45/T84的要求。4.2人員要求配備相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員負責(zé)催青、養(yǎng)蠶、制種、蠶種冷藏浸酸、蠶種檢疫等工作。5活體保護原則妥善保存種質(zhì)資源，不致丟失滅絕；保持種質(zhì)資源固有性狀，不致混雜或退化。種質(zhì)資源保護全程由專人操作，繼代過程中淘汰的卵、蠶、繭、蛹、蛾作無害化處理，嚴防種質(zhì)資源外泄。6活體保護流程見圖1。出庫浸酸選蛹蠶種保護與冷藏 交配產(chǎn)卵蠶種保護與冷藏圖1家蠶種質(zhì)資源活體保護技術(shù)流程7活體保護要求7.1出庫浸酸按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。7.2蠶種催青蠶種解除滯育后，附上寫有種質(zhì)資源名稱、出庫日期、計劃收蟻日期等信息的標識牌。蠶卵發(fā)育至戊3胚子前，溫度24℃~25℃,相對濕度7580蠶卵發(fā)育至戊3胚子，溫度28℃~30℃,相對濕度80％～85％。光線的調(diào)節(jié)按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。7.3選卵點青前對蠶種進行初選，選留符合種質(zhì)資源固有的卵色、卵形、化性，淘汰不良卵多的卵圈；轉(zhuǎn)青后復(fù)選，淘汰點青、轉(zhuǎn)青不整齊的卵圈。37.4包種現(xiàn)行育成品種親本資源采取單蛾包種，各品種每批包種不少于20個卵圈，每個卵圈作為一個飼育區(qū)，用白紙包好，遮光處理；其他種質(zhì)資源按每5～10個卵圈作為一個飼育區(qū)，用白紙包好，分3個飼育區(qū)，遮光處理。7.5收蟻7.5.1收蟻前準備收蟻前，蠶室調(diào)整至目的溫濕度；準備好飼育區(qū)片、蠶座紙、薄膜、稱量儀器、蠶筷、鵝毛等收蟻用具；收蟻用葉、切葉按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行。7.5.2收蟻方法單蛾飼育區(qū)收蟻可采用直接桑引法?；祓B(yǎng)飼育區(qū)收蟻采用桑引法或打落法，分區(qū)并放入對應(yīng)區(qū)片。收蟻當(dāng)天早上6:00對蠶種進行感光處理。春季收蟻在上午9:00進行，夏、秋季收蟻在上午8:00進行，收蟻結(jié)束后保留卵殼作卵質(zhì)調(diào)查、微粒子病補正檢查。7.6飼育7.6.1小蠶飼育春用種質(zhì)資源1～3齡小蠶適宜溫度27℃~29℃,相對濕度8590夏秋用種質(zhì)資源1～3齡小蠶適宜溫度29℃~30℃,相對濕度85％～90％。用葉、切葉按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行，每日三回育。眠前、起蠶各除沙一次。7.6.2大蠶飼育春用種質(zhì)資源4～5齡大蠶適宜溫度25℃~26℃,相對濕度7075夏秋用種質(zhì)資源4～5齡大蠶適宜溫度27℃~28℃,相對濕度70％～75％。一化性、二化性及特殊種質(zhì)資源依其生態(tài)適應(yīng)性設(shè)置飼養(yǎng)溫濕度。片葉飼喂，每日三回育，眠前、起蠶各除沙一次，每日除沙一次。7.6.3蠶期處理擴座、勻座、眠起處理、除沙按照DB45/T83的規(guī)定執(zhí)行。飼育期詳細記錄每個種質(zhì)資源的齡期經(jīng)過、性狀、特性及弱小蠶、病蠶發(fā)生情況。7.7選蠶幼蟲期淘汰體色、斑紋、體形、眠性等不符合種質(zhì)資源固有特性的個體。對于基因突變系統(tǒng)資源，根據(jù)其生物學(xué)性狀及其遺傳規(guī)律確定留種個體。對于特殊性狀種質(zhì)資源，根據(jù)其目標性狀確定留種個體。混養(yǎng)飼育區(qū)4齡起蠶后24h～36h，每區(qū)定蠶300～350頭。7.8上蔟采繭7.8.1上蔟上蔟前用具、環(huán)境保持干燥潔凈；上蔟時以飼育區(qū)為單位分區(qū)上蔟，每區(qū)加蓋覆蔟網(wǎng)以防種質(zhì)資源逃逸混雜；上蔟后每日早晚巡查，及時撿出淘汰游山蠶并記錄。47.8.2蔟中保護春用種質(zhì)資源蔟中適宜溫度25℃~26℃,相對濕度7075夏秋用種質(zhì)資源蔟中適宜溫度26℃~28℃,相對濕度7075通風(fēng)透氣，光線均勻，避免陽光直射及劇烈震動。7.8.3適時采繭實行早采繭，即未化蛹時采繭。上蔟后32h～48h采繭，輕采、輕放，采下的蠶繭平鋪在蠶匾上，及時放到種繭保護室。采繭時嚴格分區(qū)放置，嚴防混雜，并記錄每區(qū)的蔟中病死蠶頭數(shù)。7.9種繭保護種繭保護室加強通風(fēng)，嚴防悶熱，晝夜光線分明，防止鼠蟻為害。春用種質(zhì)資源適宜溫度25℃~26℃,相對濕度70％～75％；夏秋用種質(zhì)資源適宜溫度26℃~28℃,相對濕度70％～75％。蛹體觸角著色后至羽化時環(huán)境相對濕度提高至75％～80％。7.10種繭調(diào)查7.10.1調(diào)查方法蛹體復(fù)眼著色時（改為上蔟后第6d）開始調(diào)查，調(diào)查種繭主要外觀性狀指標和生產(chǎn)性能指標。7.10.2計算方式7.10.2.1結(jié)繭率計算見公式（1）：式中：a——結(jié)繭率,單位為百分比(%);b——結(jié)繭粒數(shù)，單位為粒（粒）；c——蠶期病斃蠶數(shù),單位為只（只）；d——蔟中病斃蠶數(shù),單位為只（只）。7.10.2.2死籠率計算見公式（2）：式中：e——死籠率,單位為百分比(%);f——死籠總頭數(shù)，單位為只（只）；g——結(jié)繭頭數(shù),單位為只（只）。蟲蛹統(tǒng)一生命力計算見公式（3）： 式中：h——蟲蛹統(tǒng)一生命力,單位為百分比(%);a——結(jié)繭率,單位為百分比(%);e——死籠率,單位為百分比（％）。57.11選繭7.11.1依據(jù)種質(zhì)資源固有繭色、繭形特征，以蟲蛹統(tǒng)一生命率高的蛾區(qū)為選擇重點，結(jié)合蠶期發(fā)育、眠起、上簇整齊程度，初步篩選留種蛾區(qū)。7.11.2春季批次的種質(zhì)資源選留300粒上繭，烘干處理后，送絲質(zhì)檢驗機構(gòu)調(diào)查絲質(zhì)成績。7.12稱繭單蛾飼育區(qū)在入選蛾區(qū)中取雌雄繭各20～25粒，分別編號，對應(yīng)稱量單繭全繭量、繭層量，計算繭層率?；祓B(yǎng)飼育區(qū)取雌雄各25～50粒，分別稱量全繭量、繭層量，計算繭層率。繭層率可按公式（4）計算。式中：i——繭層率,單位為百分比(%);j——繭層量,單位為克（克）；k——全繭量,單位為克（克）。7.13選蛹7.13.1依據(jù)種質(zhì)資源固有蛹體色、蛹體形特征，從稱量的雌雄繭中擇優(yōu)選留繼代，分別放入蛾盒，做好標識。7.13.2單蛾飼育區(qū)以調(diào)查雌雄相應(yīng)的平均值為篩選基值，入選個體的全繭量控制在平均值±0.1g，繭層量、繭層率控制在平均值以上。7.14交配產(chǎn)卵7.14.1交配環(huán)境制種室宜弱光、安靜，春用種質(zhì)資源交配適宜溫度為25℃~26℃,濕度7580夏秋用種質(zhì)資源交配適宜溫度為26℃~28℃,濕度75％～80％。7.14.2交配早上5:00感光羽化，8:00～9:00投蛾交配，交配時間4h～6h。投蛾后15min～30min，提出單蛾，另行交配。7.14.3雄蛾處理拆對后需重交的雄蛾及當(dāng)天不用的新鮮雄蛾，盡快放入5℃~8℃低溫室保護，保護時間不應(yīng)超過7.14.4拆對、排尿按各種質(zhì)資源所需交配時長拆對，將雌蛾放在蛾盒中輕輕振動，使雌蛾充分排尿，同時選除不良蛾及雄蛾。67.14.5產(chǎn)卵7.14.5.1鋪放蠶種紙蠶種紙上標明種質(zhì)資源系統(tǒng)、名稱、產(chǎn)卵日期、編號、用種日期、保種單位名稱，將蠶種紙鋪于產(chǎn)卵板上，并放置制種蛾圈備用。7.14.5.2投蛾將充分排尿的雌蛾單蛾投入對應(yīng)的蛾圈制種，放置蓋蛾板以防混雜。7.14.5.3產(chǎn)卵環(huán)境暗室產(chǎn)卵，注意換氣。春用種質(zhì)資源適宜溫度為25℃~27℃,濕度8085夏秋用種質(zhì)資源適宜溫度為28℃~29℃,濕度80％～85％。7.14.5.4檢疫、收種投蛾后次日上午袋蛾收種，蛾袋上標明對應(yīng)蠶種紙蛾圈編號、蠶種編號、產(chǎn)卵日期、母蛾總數(shù)，送至檢疫中心檢驗檢疫。將當(dāng)日所收蠶種按用種需求分類裝入蠶種箱。7.15蠶種保護與冷藏按照DB45/T84的規(guī)定執(zhí)行。8資料歸檔各批次結(jié)束，應(yīng)及時整理資料，填寫“家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表”（參見附錄A）和“家蠶種質(zhì)資源飼育成績調(diào)查表”（參見附錄B）。及時將資料裝訂成冊，并妥善保存。7（資料性）家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表見下表A.1。表A.1家蠶種質(zhì)資源主要性狀調(diào)查表