辣椒抗疫病田間鑒定技術(shù)規(guī)程

1DB14/T1353—2017辣椒抗疫病田間鑒定技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了辣椒抗疫病田間鑒定的術(shù)語和定義、病原菌接種體制備、抗病性鑒定圃設(shè)置、接種、病情調(diào)查、抗病性評(píng)價(jià)和鑒定記載表。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種辣椒資源對(duì)疫病抗性的田間鑒定及評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2060.1辣椒抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程第1部分：辣椒抗疫病鑒定技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1辣椒疫病由辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）所引起的一種卵菌病害，主要危害葉片、莖桿及果實(shí)，莖基部、莖節(jié)分叉處最容易發(fā)病。受危害植株根部呈褐色，后期整個(gè)辣椒植株枯死；在近地面以及莖節(jié)分叉處最容易受危害。病斑初期呈水漬狀、暗綠色，擴(kuò)展一周后，病莖部縊縮、黑褐色，病部以上莖葉枯萎，最后整株死亡。3.2抗病性田間鑒定將病原菌孢子或者菌絲直接接種到田間植株的葉片、果實(shí)、莖桿及根等部位，依據(jù)植株的發(fā)病情況進(jìn)行抗病性鑒定。3.3菌餅從菌落邊緣用打孔器打取的帶有菌絲的菌塊。4病原菌接種體的制備4.1病原物分離2DB14/T1353—20174.1.1培養(yǎng)基V8培養(yǎng)基：V8蔬菜汁100mL，碳酸鈣0.2g，瓊脂粉15g，用蒸餾水定容至1000mL，121℃高壓濕熱滅菌20min。燕麥培養(yǎng)基：將燕麥片30g用蒸餾水煮沸60min，加瓊脂粉15g，雙層紗布過濾，用蒸餾水定容至1000mL，121℃高壓濕熱滅菌20min。4.1.2主要儀器及設(shè)備光學(xué)顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)。4.1.3分離病原物采集發(fā)病植株葉片、莖基部及病果的典型病斑。從病斑邊緣病健交界處剪取約0.5cm×0.5cm大小的病組織，用75%乙醇消毒90s，然后用無菌水沖洗3次，用滅菌濾紙將水吸干，置于V8培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.2病原菌純化和鑒定將辣椒疫霉菌（P.capsici）培養(yǎng)2d，從菌落邊緣挑取挑取單菌絲接種至V8培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)5d。辣椒疫霉菌（P.capsici）形態(tài)學(xué)特征鑒定方法參見附錄A。4.3病原菌的擴(kuò)繁和保存4.3.1擴(kuò)繁病原物在接種前10d繁殖辣椒疫霉菌，選取已保存的菌種接于90mm含燕麥培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿（直徑9cm25℃黑暗培養(yǎng)7d。在菌落離培養(yǎng)皿邊緣10cm處用5mm滅菌打孔器打菌餅備用。4.3.2保存病原菌制作1.5mLEppendorf離心管燕麥培養(yǎng)基小斜面，將待保存菌株接種至斜面，25℃培養(yǎng)待菌絲長(zhǎng)滿斜面后，將Eppendorf離心管放置4℃~8℃保存。5抗病性鑒定圃設(shè)置5.1鑒定圃鑒定圃選擇在辣椒疫病常發(fā)田塊，具備良好的自然發(fā)病環(huán)境。5.2鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料采用隨機(jī)排列。每50~100份鑒定材料設(shè)1組已知抗病、感病和高感的對(duì)照材料，對(duì)照品種依據(jù)NY/T2060.1執(zhí)行。5.3種植要求鑒定材料的育苗時(shí)間和移栽時(shí)間應(yīng)與大田生產(chǎn)時(shí)間相同或做適當(dāng)調(diào)整，以使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候條件相遇。鑒定小區(qū)長(zhǎng)5m~8m份、行距0.4m,每行留苗20~25株，株距略小于大田生產(chǎn)。每份鑒定材料重復(fù)3次。土壤肥力水平和耕作管理與大田生產(chǎn)相同。3DB14/T1353—20176接種6.1接種時(shí)期接種時(shí)期為第6片真葉展平期。6.2接種方法在辣椒植株的分枝處，用滅菌刀片將其頂部切掉，取4.1.6中制備的辣椒疫霉菌（Phytophthoracapsici）餅貼在切口面處，用無菌水棉球保濕，普通塑料薄膜包扎保濕。6.3接種后的管理24h后除去接種口處的塑料保濕薄膜并澆1次水。7病情調(diào)查7.1調(diào)查時(shí)間在辣椒進(jìn)入開花坐果期后進(jìn)行調(diào)查。7.2調(diào)查方法調(diào)查每份鑒定材料接種后發(fā)病情況，用直尺測(cè)量每份鑒定材料接種后病斑長(zhǎng)度并記錄。依據(jù)辣椒疫病嚴(yán)重度分級(jí)，記載每份鑒定材料的嚴(yán)重度級(jí)別、參見附錄B，并計(jì)算每份鑒定材料的病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按式（1）計(jì)算：根100.........................................................................(1)式中：DI——病情指數(shù)；NI——各級(jí)發(fā)病株數(shù)；I——相對(duì)應(yīng)的嚴(yán)重度級(jí)數(shù)值；M——調(diào)查總株數(shù)。7.3病情分級(jí)辣椒疫病嚴(yán)重度分級(jí)及其相對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。表1辣椒疫病嚴(yán)重度分級(jí)01接菌部位變褐，1cm＜病斑長(zhǎng)度≤3c35接部位變褐或變黑，5cm＜病斑長(zhǎng)度≤7cm，葉片74DB14/T1353—201798抗性評(píng)價(jià)8.1鑒定有效性判別當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI>50），該批次抗疫病鑒定視為有效。8.2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料3次重復(fù)的病情指數(shù)（DI）平均值確定其抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2辣椒對(duì)疫病的抗病性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)8.3重復(fù)鑒定鑒定材料若初次鑒定表現(xiàn)為高抗、抗病、中抗，次年進(jìn)行重復(fù)鑒定。8.4抗性評(píng)價(jià)依據(jù)重復(fù)抗性鑒定結(jié)果對(duì)鑒定材料進(jìn)行抗病性評(píng)價(jià)，抗性以記載的最高病情指數(shù)為準(zhǔn)。9鑒定記載表辣椒抗疫病田間鑒定結(jié)果記載表見表3。表3辣椒抗疫病田間鑒定結(jié)果記載表013579ⅠⅡⅢⅠⅡⅢ5DB14/T1353—2017表3（續(xù)）辣椒抗疫病田間鑒定結(jié)果記載表ⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢⅠⅡⅢ6DB14/T1353—2017A（資料性附錄）辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）在V8培養(yǎng)基上，典型菌株呈放射狀生長(zhǎng)，菌絲絲狀、無隔膜，寬3.75μm~6.25μm；孢囊梗無色，絲狀；孢子囊頂生，近球形，單孢，卵圓形，大小28.01μm~59.00μm×24.80μm~43.50μm，有1~3個(gè)乳突，可脫落，每個(gè)孢子囊可以釋放7~40個(gè)游動(dòng)孢子；游動(dòng)孢子腎形或近梨形，大小15μm~20μm×9μm~16μm，鞭毛長(zhǎng)17μ