DB2310-T 118-2024 靈芝液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

65.020.20CCS

B

392310 DB

2310/T

—2024靈芝液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程牡丹江市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)

布DB

2310/T

118—2024本文件按照GB/T

—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院和牡丹江鏡心湖菌業(yè)有限公司提出。丹江醫(yī)科大學(xué)。董雪梅、王遠(yuǎn)杭、潘春磊、閆水華、侯延國(guó)、王菲。DB

2310/T

118—20241 范圍本文件規(guī)范了靈芝（Ganoderma

lucidum）液體菌種生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生要求、生產(chǎn)設(shè)施與設(shè)備、菌種選擇、生產(chǎn)工藝、發(fā)酵罐液體種質(zhì)量要求、生產(chǎn)檔案。本文件適用于靈芝液體菌種制備。2 規(guī)范性引用文件文件。GB

5749

生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T

12728

食用菌術(shù)語(yǔ)GB

50073

潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范NY/T

食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1靈芝液體菌種種、用于代料栽培的發(fā)酵罐菌種。3.2液體菌種發(fā)酵罐進(jìn)行食用菌液體菌種培養(yǎng)的專(zhuān)用設(shè)備。3.3起始

液體培養(yǎng)基配置后的初始

pH。3.4發(fā)酵罐空消對(duì)投料前的發(fā)酵罐進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。3.5DB

2310/T

118—2024發(fā)酵罐實(shí)消對(duì)投料后的發(fā)酵罐進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。3.6接種量接入種子液的體積和接種后培養(yǎng)基體積的比例。3.7放罐發(fā)酵液從發(fā)酵罐釋放出來(lái)，進(jìn)行后續(xù)處理的操作。3.8終止

液體菌種達(dá)到放罐指標(biāo)時(shí)的培養(yǎng)基

。4 環(huán)境衛(wèi)生要求4.1 生產(chǎn)環(huán)境生產(chǎn)環(huán)境應(yīng)符合

NY/T

的規(guī)定。4.2 生產(chǎn)車(chē)間應(yīng)符合

GB

50073

的規(guī)定。5 生產(chǎn)設(shè)施與設(shè)備5.1 設(shè)施驗(yàn)室等。5.2 設(shè)備5.2.1 生產(chǎn)設(shè)備5.2.2 檢驗(yàn)設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、顯微鏡、天平、

計(jì)等。5.2.3生產(chǎn)用具玻璃三角瓶、接種火環(huán)圈、試管、量筒、玻璃漏斗、定量定性濾紙等生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)用品。DB

2310/T

118—20245.2.4 培養(yǎng)原料應(yīng)符合

NY/T528

要求，不溶水的固體物料粉碎后過(guò)

40

目篩。6 菌種選擇絲生長(zhǎng)健壯、產(chǎn)量高的靈芝菌種。7生產(chǎn)工藝7.1 工藝流程母種→搖瓶菌種→液體發(fā)酵罐菌種→放罐。7.2 生產(chǎn)要求7.2.1 母種制作按照

NY/T

528

要求制作母種。7.2.2 搖瓶菌種制備7.2.2.1 培養(yǎng)基制備按照附錄

配方配制培養(yǎng)基，用水符合

GB

5749

要求，搖瓶使用

500

mL～1000

mL

溫?zé)o色三角瓶，裝液量為容器容量三分之一，分裝后封口，121

℃滅菌

30

，放入超凈工作臺(tái)中自然冷卻至

28

7.2.2.2 接種培養(yǎng)

15

r/min～180

r/min，培養(yǎng)

8

d～10

d，培養(yǎng)溫度控制在

28

7.2.2.3 檢查定期檢查，及時(shí)去除污染或異常菌種，留樣用于檢驗(yàn)。7.2.3 液體菌種制備7.2.3.1 投料前準(zhǔn)備罐中加入三分之二水，關(guān)閉入料口閥門(mén)，打開(kāi)排氣閥，通電、通氣，壓力維持

0.11

～0.13

保壓

1

h。7.2.3.2培養(yǎng)基制備按照附錄

HCL

或

1

mol/L

NaOH

調(diào)節(jié)起始

為

5.5~6.8。7.2.3.3發(fā)酵罐實(shí)消項(xiàng)

目指

標(biāo)檢驗(yàn)方法pH5.5～酸堿測(cè)試儀菌絲干重（）≥0.4稱(chēng)重法顯微鏡下菌絲形態(tài)菌絲粗壯、細(xì)長(zhǎng)、有分枝顯微鏡（低倍鏡、高倍鏡、油鏡）檢測(cè)樣品無(wú)菌檢查落生長(zhǎng)平板培養(yǎng)法菌絲活力菌絲在固體培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)，無(wú)雜菌試管培養(yǎng)法項(xiàng)

目指

標(biāo)檢驗(yàn)方法菌液色澤菌絲球呈乳白色，濾液呈棕黃色肉眼觀察菌液形態(tài)不迅速分層、菌球間液體不渾濁肉眼觀察菌液氣味有靈芝菌株特有的香味，無(wú)酸、臭等特殊氣味鼻嗅DB

2310/T

118—2024發(fā)酵罐內(nèi)蒸汽壓力維持在

0.11

Mpa～0.13

Mpa

保壓

1

h

26

℃以下。7.2.3.4 接種火焰保護(hù)下接種，接種前調(diào)節(jié)罐體壓力至

0.02

；接種后調(diào)節(jié)罐體內(nèi)壓力至

0.05

。7.2.3.5 培養(yǎng)培養(yǎng)溫度保持在

25

℃～

℃，壓力維持在

0.04

～0.06

6

d～8

d，隔天檢測(cè)，放罐前

24

h

再次檢測(cè)，達(dá)到放罐指標(biāo)，終止發(fā)酵。7.2.3.6 留樣與檢測(cè)母種每個(gè)批號(hào)保留

3～5

4

℃下貯存；搖瓶菌種、放罐前菌種分別無(wú)菌取樣

30

mL～40

角瓶?jī)?nèi)

4

℃留存；檢測(cè)項(xiàng)目、指標(biāo)、方法見(jiàn)

8。8 發(fā)酵罐液體種質(zhì)量要求8.1 感官指標(biāo)應(yīng)符合表

1

的要求。表1 感官指標(biāo)表1 感官指標(biāo)應(yīng)符合表

2

的要求。表

表

2

理化指標(biāo)DB

2310/T

118—20249

生產(chǎn)檔案

12728

標(biāo)準(zhǔn)，具體操作人員現(xiàn)場(chǎng)記錄填寫(xiě)，定期由主管領(lǐng)導(dǎo)審核，簽字后歸檔，檔案保存至少

2

年。附錄

A（資料性附錄）靈芝液體菌種培養(yǎng)基建議配方DB

2310/T

118—2024A.1：搖瓶液體培養(yǎng)基配方：土豆

200

g，葡萄糖

g，酵母粉

5

g，蛋白胨

3

g，磷酸二氫鉀

g酸鎂

g，水

1000

。A.2：發(fā)酵