農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程 播種質(zhì)量 生活力測定 編制說明

1《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程播種質(zhì)量生活力測標(biāo)準(zhǔn)編制說明（一）任務(wù)來源根據(jù)《國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會關(guān)于下達(dá)2021年第一批推薦性國家標(biāo)準(zhǔn)計劃及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)外文版的通知》（國標(biāo)委發(fā)[2021]12號文件）要求，由全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心主持承擔(dān)《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程品種質(zhì)量生活力測定》（項目編號20211130-T-326）的修訂工作。（一）種子生活力是種子發(fā)芽的潛在能力或種胚具有的生命力。種子生活力的測定能提供給種子使用者和生產(chǎn)者重要的質(zhì)量信息，反映的實(shí)種子批的最大發(fā)芽潛力。實(shí)際工作中如種子貿(mào)易時常需要在短時間內(nèi)掌握種子批的生活力狀況，如果種子批處于休眠狀態(tài)則難以通過發(fā)芽測定得到結(jié)果，種子生活力測定可以滿足這一需要。種子生活力四唑測定方法被世界各國廣泛應(yīng)用?，F(xiàn)行GB/T3543.7-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程其他項目檢驗第一篇生活力的生化（四唑）測定》標(biāo)準(zhǔn)已使用25年，有許多與GB/T1.1-2009《標(biāo)2GB/T2000.1-2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則和新修訂《國際種子檢驗規(guī)程》等規(guī)范性技術(shù)要素、有關(guān)術(shù)語和標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容不相適應(yīng)的地方，需要加以修訂完善。比如：合理地將標(biāo)準(zhǔn)單獨(dú)列出、增加或者修訂標(biāo)準(zhǔn)要素名稱，編排標(biāo)準(zhǔn)框架，增加儀器設(shè)備有關(guān)性能規(guī)定，增加組織暴露處理方法規(guī)定，增加包衣種子生活力測定的規(guī)定等等。通過完善修訂，使《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程生活力測定》標(biāo)準(zhǔn)更加合理規(guī)范，更具實(shí)用性，并達(dá)到與國際接軌的目的。（三）主要起草單位及起草人……（四）起草過程科研教學(xué)單位資深專家組成的標(biāo)準(zhǔn)起草小組，研究確定了系列標(biāo)準(zhǔn)體例，確立了以引用標(biāo)準(zhǔn)為主，結(jié)合我國行業(yè)實(shí)際進(jìn)行起草的工作主線，并對起草工作進(jìn)行了詳細(xì)分工。2021年-2022年，起草小組查閱了國內(nèi)外同類標(biāo)準(zhǔn)及資料，并進(jìn)行了整理、收集、分析，最終結(jié)合有關(guān)專家意見的基礎(chǔ)上形成初稿。2023年3-6月，召開了第二次標(biāo)準(zhǔn)討論會。標(biāo)準(zhǔn)起草小組對初稿進(jìn)行了大討論。參考國際種子檢驗規(guī)程2022版相關(guān)的技術(shù)內(nèi)容，進(jìn)行再次修改完善。同時在多家單位進(jìn)行比3較分析，驗證了方法的可行性。2023年7-12月，全國農(nóng)技中心召開了標(biāo)準(zhǔn)制修訂研討會，對初稿里的格式、內(nèi)容、術(shù)語表達(dá)方式、修改內(nèi)容方面進(jìn)行了修改。會后又征求有關(guān)專家意見，根據(jù)專家意見進(jìn)一步完善了標(biāo)準(zhǔn)文本，形成了標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。二、國家標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定國家標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容說明1.規(guī)范性原則：本標(biāo)準(zhǔn)的制定符合法律法規(guī)，符合有標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則等。2.適用性原則：本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)作物領(lǐng)域的種子檢驗，為農(nóng)作物種子生產(chǎn)、經(jīng)營、管理提供檢驗方法，是評價農(nóng)作物種子質(zhì)量是否符合標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)簽標(biāo)注或合同約定要求的依據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)以GB/T3543.7-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程其他檢驗項目》第一篇（生活力的生化四唑測定）為基礎(chǔ)，增加、細(xì)化了具體技術(shù)要求。全部內(nèi)容具有可操作性。3.統(tǒng)一性原則：本標(biāo)準(zhǔn)是農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程系列標(biāo)準(zhǔn)播種質(zhì)量的部分，在制定本標(biāo)準(zhǔn)過程中，充分考慮與其他部分的規(guī)范一致，彼此間協(xié)調(diào)統(tǒng)一，不存在相互矛盾現(xiàn)象，有利于形成完整、協(xié)調(diào)的種子質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)體系。44.先進(jìn)性原則：在研究總結(jié)國內(nèi)外農(nóng)作物種子檢驗技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，一方面考慮我國現(xiàn)階段種子檢驗的實(shí)際需求，另一方面盡可能考慮種業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展與行業(yè)管理變化趨勢，能夠充分代表我國農(nóng)作物種子檢驗成熟技術(shù)的先（二）主要內(nèi)容及論據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)為修訂標(biāo)準(zhǔn)，主要的修訂內(nèi)容及其依據(jù)如下：1.結(jié)構(gòu)調(diào)整。將GB/T3543.7-1995《農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程其他項目檢驗》的生活力測定部分調(diào)整為獨(dú)立的標(biāo)準(zhǔn)部分。即《農(nóng)作包括范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、總則、原理、器具和試劑、測定程序、結(jié)果計算與表示、結(jié)果報告。2.測定程序（1）關(guān)于試驗樣品數(shù)量。采用《國際種子檢驗規(guī)程》規(guī)定4個重復(fù)每個重復(fù)100粒，保證樣品代表性和結(jié)果準(zhǔn)確（2）關(guān)于種子預(yù)濕處理。大部分種子在測定前都需要經(jīng)過預(yù)處理（預(yù)措預(yù)濕其主要目的是使種子加快和充分吸濕，軟化種皮，方便樣品準(zhǔn)備和促進(jìn)活組織酶系統(tǒng)的活化，以提高染色的均勻度、鑒定的可靠性和正確性。因為種子吸5濕后，使得切開、針挑種皮或扯開營養(yǎng)組織變得容易，而干種子則操作困難，切開時容易切破且切面存在破碎粉塊，并且由于活細(xì)胞內(nèi)的酶尚未活化，染色效果不良。尤其是健康的活組織與衰弱的活組織之間的染色差異不夠明顯。因此，預(yù)措預(yù)濕對正確測定是很重要的，一般情況下是必不可少的。預(yù)濕是四唑染色測定的必要步驟。預(yù)濕方法目前常用的有以下兩種方法：一是緩慢潤濕，適用于那些直接浸在水中容易破裂和損傷的種子，以及已經(jīng)劣變的種子或過分干燥的種子。二是水中浸漬，水中浸漬是將種子完全浸入水中，種子吸水快、均勻，并可縮短預(yù)濕時間。不同種類種子的預(yù)濕方式和時間的技術(shù)規(guī)定采用《國際種子檢驗規(guī)程》，為方便使用在規(guī)范性附錄中全部列出。（3）關(guān)于染色前準(zhǔn)備。為了使四唑溶液快速和充分滲入種子的全部活組織，加快染色反應(yīng)和正確鑒定胚的主要構(gòu)造，大多數(shù)種子在染色前必須采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ古叩闹饕獦?gòu)造和(或)活的營養(yǎng)組織暴露出來。樣品準(zhǔn)備方法主要取決于種子構(gòu)造和胚的位置，常用的準(zhǔn)備方法有：刺穿、縱切、橫切、橫剖、分離胚、剝?nèi)シN皮等處理方式。規(guī)范性附錄列出不同作物不同種子的染色前的處理方法。（4）關(guān)于染色技術(shù)規(guī)定。通過染色反應(yīng)，能將胚和活的營養(yǎng)組織里健壯、衰弱和死亡部分組織的差異正確顯現(xiàn)出來，以便進(jìn)行鑒別，判斷種子的生活力。染色時，四唑溶液6必須完全淹沒種子，溶液不能直接露光，因為光線可能使四唑鹽類還原而降低其濃度，影響染色效果。不同類型的種子，采用規(guī)范性附錄規(guī)定的四唑溶液濃度、染色溫度和時間。如果已到規(guī)定染色時間，但樣品的染色仍不夠充分，這時可適當(dāng)延長染色時間，以便證實(shí)染色不夠充分是由于四唑溶液滲入緩慢所引起，還是由于種子本身的缺陷所引起的。但必須注意，染色溫度過高或染色時間過長，也會引起種子組織的劣變，從而掩蓋了由于遭受凍害、熱傷和本身衰弱而呈現(xiàn)不同顏色或異常的情況。（5）關(guān)于鑒定前準(zhǔn)備。為了確保鑒定結(jié)果的正確性，應(yīng)將已染色的種子樣品，加以適當(dāng)?shù)奶幚恚龠M(jìn)一步使胚的主要構(gòu)造和活的營養(yǎng)組織明顯地暴露出來，以便觀察鑒定。不同種類種子的處理方法不同，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范性附錄規(guī)定種皮不透水和預(yù)濕后仍保持堅硬狀態(tài)的硬實(shí)種子處理方法。具體處理方法及適用范圍：1）不須處理，直接觀察。適用于染色前已進(jìn)行樣品準(zhǔn)備的整個胚、摘出的胚中軸、縱切或橫切的胚等樣品。因為這些種子胚的主要構(gòu)造已暴露在外面，所以不須附加處理，就可直接觀察鑒定。2）輕壓出胚，觀察鑒定。適用于樣品準(zhǔn)備時僅切去種子的一部分，胚的大部分仍留在營養(yǎng)組織內(nèi)的樣品。在鑒定前須用解剖針在種子上稍加壓力，使胚向切口滑出，以便觀察。3）扯開營養(yǎng)組織，暴露出胚。適用于染色前樣品準(zhǔn)備時僅撕去種皮或7僅切去部分營養(yǎng)組織的樣品。其方法是扯去遮蓋住胚的營養(yǎng)組織或弄掉切口表面的營養(yǎng)組織，使胚的主要構(gòu)造完全暴露出來，以便鑒定。4）切去一層營養(yǎng)組織，暴露出胚和活營養(yǎng)組織。適用于樣品準(zhǔn)備時僅切去或切開種子上半?；蚧康姆N子樣品。因為這些種子的胚仍被營養(yǎng)組織所包圍，所以需在適當(dāng)?shù)奈恢们腥ヒ粚舆m宜厚度的營養(yǎng)組織，才能看清胚和活營養(yǎng)染色情況。5）沿胚中軸縱切，暴露胚的構(gòu)造。適用于樣品未準(zhǔn)備的種子，如有些豆類種子。6）沿種子中線縱切，暴露出胚和活營養(yǎng)組織。適用于樣品準(zhǔn)備時，僅除去種子外面構(gòu)造，或僅切去基部的種子，如五加科等種子。7）剝?nèi)グ胪该鞯姆N皮或種子組織，暴露出胚。適用于四唑染色前樣品未加準(zhǔn)備或僅切去基部的種子，如大豆、豌豆等種子。8）切去切面碎片或掰開子葉，暴露出胚。適用于切得不好或有些豆科雙子葉種子。如鑒定前發(fā)現(xiàn)胚中軸被若干切面碎片所遮蓋，以致難以正確鑒定，則需切去一層子葉，或者為了可靠觀察子葉之間胚中軸的染色情況，則需掰開子葉。9）剝?nèi)シN皮和殘余營養(yǎng)組織，暴露出胚。適用于樣品準(zhǔn)備時僅切去種子一部分的樣品。如紅花種子在樣品準(zhǔn)備時，僅切去種子的上部，仍有種皮和殘余營養(yǎng)組織包著胚，只有除去這些部分，才能暴露出胚的主要構(gòu)造。實(shí)際操作中可按染色前準(zhǔn)備處理圖示進(jìn)行。（6）關(guān)于鑒定。經(jīng)染色和處理后，進(jìn)行正確的觀察鑒8定是十分重要的。測定結(jié)果的可靠性取決于鑒定人員對染色組織和部位的正確識別、工作經(jīng)驗和判斷能力等綜合運(yùn)用能力。為了避免判斷的錯誤，應(yīng)按鑒定標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)真觀察，確保鑒定結(jié)果的正確性。依據(jù)種類的不同，判定種子有無生活力，主要取決于那些能發(fā)育成為正常幼苗的功能組織和組織完整度的染色狀況。大多數(shù)種子具有主要構(gòu)造和營養(yǎng)組織，主要構(gòu)造為分生組織和對發(fā)育成為正常幼苗所必需的結(jié)構(gòu)。對于發(fā)育良好和分化良好的種子或種胚，即使主要構(gòu)造的表面有小范圍的組織壞死，但仍具有修復(fù)能力的，可視為有生活力種子。具體判別規(guī)則要參照附錄給定的小范圍組織壞死允許的面積范圍。對于種子或種胚完全染色的，或者種子或種胚部分染色而其允許的無生活力組織未超過附錄規(guī)定的，視為具有生活力種子。對于不符合認(rèn)定為具有生活力種子要求的，而且種子沒有呈現(xiàn)非特征性著色和/或主要構(gòu)造軟弱的，視為無生活力種子。對于胚或主要構(gòu)造明顯不正常的種子，無論染色與否，均應(yīng)歸于無生活力種子。依據(jù)所顯示的染色模式和組織穩(wěn)定性，檢查并評估每粒種子是否具有生活力。適當(dāng)?shù)墓饩€和放大倍數(shù)對于適當(dāng)?shù)臋z查識別是必不可少的。（7）關(guān)于結(jié)果計算與表示。按照（6）的鑒定方法，記9錄各個重復(fù)中有生活力的種子，統(tǒng)計每一重復(fù)有生活力種子的數(shù)目，計算求出生活力平均百分率。生活力平均百分率要修約至最近似的整數(shù)，依此平均值查找標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)范性附錄B表B.1同一四唑測定四個重復(fù)間最大容許誤差，再與重復(fù)間最高與最低百分率的實(shí)際差距進(jìn)行比較。重復(fù)間的最大容許誤差不應(yīng)超過表B.1的規(guī)定。同一實(shí)驗室內(nèi)相同或不同送驗樣品四唑測定結(jié)果最大容許誤差采用表B.2的容許差距；不同實(shí)驗室不同送驗樣品間四唑測定結(jié)果最大容許誤差采用表B.3的容許差距。先計算兩次測定的平均值，若兩次測定結(jié)果的差距未超過兩次測定平均值所對應(yīng)的最大容許誤差，則兩次測定結(jié)果視為可靠。如果超過應(yīng)重做。（8）關(guān)于結(jié)果報告。為方便結(jié)果報告，根據(jù)實(shí)際需要分別給出了4類結(jié)果報告模式：包括絕大部分常規(guī)種子、發(fā)芽試驗?zāi)┢诎l(fā)芽種子，豆科種子、包衣種子。另外，可以填報空殼、帶有幼蟲、破損或腐爛種子的百分率的結(jié)果。（三）新舊國家標(biāo)準(zhǔn)對比本文件與GB/T3543.7-1995相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：1、標(biāo)準(zhǔn)文本由原來的標(biāo)準(zhǔn)一篇內(nèi)容調(diào)整為獨(dú)立的標(biāo)準(zhǔn)2、增加總則和原理的內(nèi)容?？倓t中概述了四唑測定的意義、特點(diǎn)、必要性，以及生活力四唑測定的使用情形。在原理一章概括了四唑測定的工作原理，增強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)的理論性。3、與舊標(biāo)準(zhǔn)相比，新標(biāo)準(zhǔn)細(xì)化了有關(guān)種子預(yù)濕處理（見7.2.1)、染色前處理（見7.2.2)、染色要求(見7.3)和鑒定前處理（見7.4）等相關(guān)程序要求，細(xì)化四唑測定生活力結(jié)果的具體表述（見第9章增加附錄A，給出染色前處理和鑒定結(jié)果評價的圖示指南；增加附錄B，細(xì)化不同情形下的容許誤差，進(jìn)一步增強(qiáng)了標(biāo)準(zhǔn)的可操作性。預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效果標(biāo)準(zhǔn)修訂以來，在標(biāo)準(zhǔn)各參加單位的共同努力下，標(biāo)準(zhǔn)修訂小組進(jìn)行了廣泛的調(diào)研和試驗驗證，收集了各類作物種子的大量檢測數(shù)據(jù)。由于調(diào)查和檢測數(shù)據(jù)來源樣本量大，代表性強(qiáng)，涉及面廣，可以說較為全面地反映了生活力測定方法上存在的問題，解決了檢測程序及判定上的困惑。預(yù)計本標(biāo)準(zhǔn)的頒布實(shí)施，必將提升生活力檢測的重視程度，提高生活力測定的技術(shù)操作和工作程序，增強(qiáng)種子生活力測定的準(zhǔn)確性，為政府、種子企業(yè)、用種農(nóng)民等社會各方提供準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果，對推動種業(yè)高質(zhì)量發(fā)展、保護(hù)農(nóng)民利益、維護(hù)社會穩(wěn)定等方面發(fā)揮重要的作用，產(chǎn)生巨大的社會經(jīng)濟(jì)效益。國外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對比情況本標(biāo)準(zhǔn)修訂符合現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)五、以國際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況，以及是否合規(guī)引用或者采用國際國外標(biāo)準(zhǔn)，并說明未采用國際標(biāo)準(zhǔn)的原因；本標(biāo)準(zhǔn)參考國際種子檢驗協(xié)會（InternationalSeedTestingAssociation，ISTA）發(fā)布的《國際種子檢驗規(guī)程ISTA規(guī)程》（2022年編輯）起草，一致性程度為非等效。六、與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)修訂符合現(xiàn)行《種子法》等法律法規(guī)規(guī)范，并嚴(yán)格遵循國家有關(guān)現(xiàn)行法律、法