構(gòu)建非整合型慢病毒載體的初步探索的開題報告

構(gòu)建非整合型慢病毒載體的初步探索的開題報告一、研究背景隨著人們生活水平的提高和科技的發(fā)展，慢性疾病的發(fā)病率逐年增長。傳統(tǒng)的治療方法并不能完全解決慢性病患者的痛苦，因此新型的治療策略備受研究人員的關(guān)注?；蛑委熥鳛橐环N在分子層面調(diào)控疾病基因的方法，已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。而非整合型慢病毒是基因治療領(lǐng)域中常用的載體之一，它具有生物安全性高、轉(zhuǎn)染效率高等特點，并且可以長時間穩(wěn)定地表達(dá)外源基因。因此，構(gòu)建非整合型慢病毒載體成為基因治療領(lǐng)域中的重要研究方向。二、研究內(nèi)容本課題旨在探索構(gòu)建非整合型慢病毒載體的方法。具體內(nèi)容如下：1.確定RNA沉默技術(shù)下的適合的miRNA。2.設(shè)計靶向慢病毒病毒感染的miRNA。3.驗證設(shè)計的miRNA的效果。4.將miRNA融合入載體中構(gòu)建非整合型慢病毒載體。5.對構(gòu)建的非整合型慢病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染以及體內(nèi)外基因表達(dá)的驗證。三、研究意義本課題的研究成果將為基因治療領(lǐng)域提供一個快速、有效、生物安全的基因治療的方案。同時，研究將從RNA沉默技術(shù)出發(fā)，為該方向的研究與應(yīng)用提供參考。四、研究方法1.RNA沉默技術(shù)構(gòu)建適合的miRNA：蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)分析、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等。2.設(shè)計靶向慢病毒病毒感染的miRNA：生物信息學(xué)方法。3.驗證設(shè)計的miRNA的效果：分子生物學(xué)方法。4.將miRNA融合入載體中構(gòu)建非整合型慢病毒載體：分子生物學(xué)方法。5.對構(gòu)建的非整合型慢病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染以及體內(nèi)外基因表達(dá)的驗證：細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動物實驗等方法。五、研究難點1.RNA沉默技術(shù)的選取。2.miRNA的設(shè)計。3.載體的構(gòu)建。4.轉(zhuǎn)染效率的提高。六、研究預(yù)期成果成功構(gòu)建非整合型慢病毒載體，并驗證轉(zhuǎn)染效率高、體內(nèi)外表達(dá)可行的效果，提供一種基因治療的有效方法。七、研究進(jìn)度安排該研究預(yù)計分為1年完成，主要進(jìn)度安排如下：第一季度：確定RNA沉默技術(shù)下的適合的miRNA。第二季度：設(shè)計靶向慢病毒病毒感染的miRNA并進(jìn)行效果驗證。第三季度：將miRNA融合入載體中構(gòu)建非整合型慢病毒載體。第四季度：對構(gòu)建的非整合型慢病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染以及體內(nèi)外基因表達(dá)的驗證。八、參考文獻(xiàn)1.JinZ,FeiX.Non-integratinglentivirusvector-mediatedtransductionofbonemarrow-derivedmesenchymalstemcells:optimaltimeandconcentrationofvector[J].NeuralRegenRes,2013,8(13):1183-1189.2.GinnSL,AlexanderIE,EdelsteinML,etal.Genetherapyclinicaltrialsworldwideto2017:anupdate[J].JGeneMed,2018,20(5):1-16.3.Jaskula-SztulR,ChenG,PisarnturakitP,etal.Identificationofanovelpathwayofhumaninsulinreceptordegradatio