番茄抗根結(jié)線蟲基因SlMi導(dǎo)入萵苣的研究的開題報(bào)告

番茄抗根結(jié)線蟲基因SlMi導(dǎo)入萵苣的研究的開題報(bào)告一、選題背景及意義根結(jié)線蟲是一類廣泛分布于全球范圍內(nèi)的土傳病原體，它們會寄生在植物的根部，腐蝕其根系，從而導(dǎo)致植株生長不良、減產(chǎn)甚至死亡。萵苣作為一種廣泛種植的蔬菜，也受到了根結(jié)線蟲侵害的威脅。因此，研究如何提高萵苣的抗根結(jié)線蟲性，對于保障萵苣產(chǎn)量、提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效益具有重要意義。番茄是一種已經(jīng)被證明具有高度抗根結(jié)線蟲性的植物，其抗根結(jié)線蟲基因研究已經(jīng)有了一定的進(jìn)展。因此，將番茄中與抗根結(jié)線蟲有關(guān)的基因?qū)肴n苣中，可以為萵苣提供新的抗蟲基因資源，豐富萵苣的遺傳改良手段。二、研究目的及內(nèi)容本研究的目的是將番茄中的抗根結(jié)線蟲基因SlMi導(dǎo)入萵苣中，以提高萵苣的抗蟲性。具體研究內(nèi)容包括：1.克隆番茄中的抗根結(jié)線蟲基因SlMi基因序列。2.構(gòu)建含有SlMi基因的植物轉(zhuǎn)化載體。3.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，將含有SlMi基因的轉(zhuǎn)化載體導(dǎo)入萵苣中。4.對轉(zhuǎn)基因萵苣進(jìn)行抗根結(jié)線蟲性狀鑒定。5.對SlMi基因在轉(zhuǎn)基因萵苣中的表達(dá)情況進(jìn)行研究和分析。6.對轉(zhuǎn)基因萵苣的生長和發(fā)育情況進(jìn)行觀察和評估。三、研究計(jì)劃及預(yù)期結(jié)果本研究計(jì)劃用兩年的時間完成，具體計(jì)劃安排如下：第一年：1.克隆番茄中的抗根結(jié)線蟲基因SlMi基因序列。2.構(gòu)建含有SlMi基因的植物轉(zhuǎn)化載體。第二年：1.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，將含有SlMi基因的轉(zhuǎn)化載體導(dǎo)入萵苣中。2.對轉(zhuǎn)基因萵苣進(jìn)行抗根結(jié)線蟲性狀鑒定。3.對SlMi基因在轉(zhuǎn)基因萵苣中的表達(dá)情況進(jìn)行研究和分析。4.對轉(zhuǎn)基因萵苣的生長和發(fā)育情況進(jìn)行觀察和評估。預(yù)期結(jié)果為：1.成功克隆出番茄中的抗根結(jié)線蟲基因SlMi。2.構(gòu)建出含有SlMi基因的植物轉(zhuǎn)化載體。3.成功將含有SlMi基因的轉(zhuǎn)化載體導(dǎo)入萵苣中，得到轉(zhuǎn)基因萵苣。4.轉(zhuǎn)基因萵苣表現(xiàn)出較高的抗根結(jié)線蟲性狀。5.在轉(zhuǎn)基因萵苣中檢測到SlMi基因的表達(dá)，并對其表達(dá)情況進(jìn)行研究和分析。6.轉(zhuǎn)基因萵苣的生長和發(fā)育情況正常，并且沒有發(fā)生不良的生物學(xué)效應(yīng)。四、研究方法及技術(shù)路線1.克隆番茄中的抗根結(jié)線蟲基因SlMi基因序列。從番茄中提取總RNA，利用RT-PCR方法擴(kuò)增SlMi全長ORF；將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pGEM-T轉(zhuǎn)化載體中，得到重組質(zhì)粒；通過PCR鑒定、限制酶酶切等手段對該重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定，最終測序鑒定。2.構(gòu)建含有SlMi基因的植物轉(zhuǎn)化載體。利用重組PCR方法將SlMi基因插入到含有適當(dāng)啟動子、終止子和選擇標(biāo)記基因的植物表達(dá)載體中；通過PCR鑒定、限制酶酶切等手段對該重組載體進(jìn)行鑒定。3.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，將含有SlMi基因的轉(zhuǎn)化載體導(dǎo)入萵苣中。利用農(nóng)桿菌感染萵苣離體葉片，將含有SlMi基因的轉(zhuǎn)化載體通過Agrobacterium-mediatedtransformationmethod導(dǎo)入萵苣中；通過PCR鑒定、篩選、培育和種苗繁殖等手段，最終得到轉(zhuǎn)基因萵苣。4.對轉(zhuǎn)基因萵苣進(jìn)行抗根結(jié)線蟲性狀鑒定。通過大田試驗(yàn)及溫室試驗(yàn)等方式對轉(zhuǎn)基因萵苣進(jìn)行抗根結(jié)線蟲性狀鑒定。5.對SlMi基因在轉(zhuǎn)基因萵苣中的表達(dá)情況進(jìn)行研究和分析。利用Real-timePCR技術(shù)檢測SlMi基因在轉(zhuǎn)基因萵苣中的表達(dá)情況，并對其表達(dá)情況進(jìn)行研究和分析。6.對轉(zhuǎn)基因萵苣的生長和發(fā)育情況進(jìn)行觀察和評估。通過大田、溫室等方法觀察轉(zhuǎn)基因萵苣的生長和發(fā)育情況，并進(jìn)行評估。五、研究預(yù)算及考慮因素本研究預(yù)計(jì)需要的經(jīng)費(fèi)包括實(shí)驗(yàn)材