富硒產(chǎn)品的研究進(jìn)展樣本

富硒產(chǎn)品研究進(jìn)展摘要：硒是人和動(dòng)物生命必須微量元素之一，近年來(lái)大量研究資料表白，許多疾病與硒關(guān)于，因而之故，人們對(duì)硒關(guān)注也與日俱增。本文就硒生物學(xué)功能，富硒產(chǎn)品種類，硒測(cè)定辦法，有機(jī)硒形態(tài)以及不同形態(tài)有機(jī)硒生物活性做了綜述，同步闡述一種運(yùn)用生物技術(shù)—酵母富硒，進(jìn)行富硒辦法，僅供參照。核心詞：有機(jī)硒，富硒酵母，生物活性1硒生物學(xué)功能硒是人和動(dòng)物必要微量元素之一，國(guó)內(nèi)外大量研究資料顯示，硒具備廣泛生物學(xué)作用，在防止某些疾病，如克山病，某些癌癥以及在延緩衰老方面有著極其重要作用。1.1硒分子生物學(xué)特性硒在組織液和血液中存在形式是各種各樣，但是硒在生命體內(nèi)發(fā)揮作用重要還是通過(guò)參入到蛋白質(zhì)中發(fā)揮作用，當(dāng)前所知硒參入到蛋白中形式有兩種。其中一種是以可離解因子存在，另一種存在形式是通過(guò)與蛋白質(zhì)基本構(gòu)成單位氨基酸結(jié)合。而其中一種是重要在微生物中發(fā)現(xiàn)，第二種則是以哺乳動(dòng)物中居多。在哺乳動(dòng)物中存在硒重要是與兩種氨基酸關(guān)于，即是：硒半胱氨酸（Se—Cys）和硒蛋氨酸（Se—Met），其中硒半胱氨酸重要是存在于動(dòng)物蛋白質(zhì)特殊位點(diǎn)發(fā)揮作用，而硒蛋氨酸則是可以作為哺乳動(dòng)物體內(nèi)一種代替氨基酸，代替蛋氨酸發(fā)揮生物功能[1]。1.2硒生物學(xué)功能1.2.1硒抗氧化作用硒是機(jī)體必須微量物質(zhì),它最重要生物學(xué)功能是構(gòu)成谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)重要成分,從而催化還原型谷胱甘肽(GSH)變成氧化型谷胱甘肽(GSSG),進(jìn)而使有毒過(guò)氧化物變?yōu)闊o(wú)毒羥基化物，這樣，硒在生物體內(nèi)就發(fā)揮了它抗氧化作用。H2O2在GSH-Px催化下被分解成H2O等無(wú)害物質(zhì)，從而保護(hù)細(xì)胞及其組織不被過(guò)氧化物損傷，硒這個(gè)作用特別是在保護(hù)細(xì)胞和細(xì)胞器膜如線粒體、微粒體、溶酶體膜方面起了重要作用，生物體自身就是一種具膜大系統(tǒng)，生物體內(nèi)各種膜為生物正常生命活動(dòng)提供了基本場(chǎng)合，而細(xì)胞又是構(gòu)成生物體基本單位，因而，硒在生物體內(nèi)保護(hù)膜和細(xì)胞作用顯得極為重要。硒是以谷胱甘肽過(guò)氧化物酶方式起作用,催化H2O2分解成H2O,發(fā)揮抗氧化作用,從而保護(hù)細(xì)胞及組織免于受過(guò)氧化物損害[2]。1.2.2在非特異性免疫方面，有人研究發(fā)現(xiàn)，硒可以影響吞噬細(xì)胞殺菌活力，但是硒這一作用機(jī)理卻是仍未發(fā)現(xiàn)，有待進(jìn)一步研究。硒在特異性免疫上作用重要是通過(guò)作用于此薄毒性細(xì)胞（Tc）和自然殺傷細(xì)胞（NK），使得她們活性得到增強(qiáng)，但是其作用機(jī)理仍需進(jìn)一步研究[3]。上述闡明，硒在哺乳動(dòng)物免疫功能方面也有著一定作用，這對(duì)于咱們進(jìn)一步更好保護(hù)人體健康有著重大意義。1.2.3硒抗癌作用硒可以減少致癌脂質(zhì)過(guò)氧化物和某些激活癌原羥化酶活性，減少脂褐素沉積，延緩衰老。皮膚癌病人中，補(bǔ)硒可減少癌癥危險(xiǎn)性48%[4]。1.2.4硒抗輻射損傷能力研究證明，補(bǔ)硒可以提高小鼠抗紫外線輻射損傷能力，而對(duì)于處在放化療過(guò)程中病人，補(bǔ)硒則可以提高血液中紅細(xì)胞數(shù)量，并增進(jìn)機(jī)體恢復(fù)[5]。1.2.5硒可以防止心血管疾病低硒會(huì)導(dǎo)致末梢組織缺血，硒可以保護(hù)血管壁膠原和彈性組織完整，起到防止心血管疾病作用[6]。1.2.6硒能與重金屬離子結(jié)合形成難容復(fù)合物，進(jìn)而再排出體外，從而減輕了當(dāng)今環(huán)境污染給機(jī)體帶來(lái)傷害[7]。1.2.7硒可提高植物抗氧化能力，提高植物對(duì)對(duì)病蟲(chóng)害、干旱、寒冷等防止能力[8]。大大提高了植物生存能力。2有機(jī)硒形態(tài)及其生物活性2.1硒蛋白谷胱甘肽過(guò)氧化物酶系:第一種功能性硒蛋白是胞漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(CytosolicGlutathioneperoxidase,cGSH—Px),它是Rotruck于1973年發(fā)現(xiàn)。谷胱甘肽過(guò)氧化酶可以清除自由基，將氫和脂類過(guò)氧化物還原成水和相應(yīng)醇類；保護(hù)不同部位特別是細(xì)胞膜（具有大量不飽和脂肪）免遭氧化應(yīng)激損傷，有助于細(xì)胞分化，發(fā)送信號(hào)和炎癥前細(xì)胞因子產(chǎn)生。每一種谷胱甘肽過(guò)氧化酶分子具有4個(gè)硒原子。此酶系涉及四種不同GSH—Px,

胞漿GSH—Px(cGSH—Px)：催化谷胱甘肽(GSH)參加過(guò)氧化反映,清除在細(xì)胞呼吸代謝過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)氧化物和羥自由基,從而減輕細(xì)胞膜多不飽和脂肪酸過(guò)氧化作用.

血漿GSH—Px(eGSH—Px)：與清除細(xì)胞外過(guò)氧化氫或參加谷胱甘肽運(yùn)送關(guān)于.

磷脂過(guò)氧化氫GSH—Px(phGSH—Px)：抑制膜磷脂過(guò)氧化(重要是雙親性物質(zhì)過(guò)氧化物),而發(fā)揮保護(hù)生物膜抗氧化作用.

胃腸道專屬性GSH—Px(giGSH—Px)：在保護(hù)哺乳動(dòng)物免受攝入脂質(zhì)過(guò)氧化物毒害方面起重要作用.

（2）碘化甲狀腺氨酸脫碘酶系(lodothyoninedeiodinases?ID):這是已分離到第二大組硒蛋白，ID酶系涉及三種類型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ).它可以將無(wú)活性甲狀腺氨酸（T4）激活為有活性甲狀腺素(T3),并參加甲狀腺激素調(diào)節(jié).

甲狀腺激素參加調(diào)節(jié)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育方方面面，特別在幼齡動(dòng)物對(duì)抗冷應(yīng)激和家禽羽毛生長(zhǎng)發(fā)育有表觀作用；硒蛋白參加甲狀腺代謝觀點(diǎn)有助于解釋為什么缺硒動(dòng)物生長(zhǎng)緩慢，生產(chǎn)能力低下。

（3）精子被膜硒蛋白(spermcapsuleselenoprotein):它是硒與動(dòng)物正常繁殖力關(guān)于蛋白質(zhì).硒蛋白是精子被膜主成分并對(duì)其構(gòu)造功能起重要作用.由于精子中部具有高濃度、對(duì)氧化作用敏感長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸，因此精子中部是精子細(xì)胞中最易受損某些。當(dāng)精子尾部游動(dòng)，向未受精卵子邁進(jìn)時(shí)，這些脂類使精子中部變得有彈性、靈活。硒磷脂過(guò)氧化氫古胱甘肽過(guò)氧化酶（Ph-GSH-Px）,它保護(hù)這些脂類免遭氧化作用損傷。

（4）硒蛋白—W(SelenoproteinW):與谷胱甘肽有關(guān)抗氧化功能關(guān)于.硒蛋白—W在維護(hù)肌肉完整性起重要作用.

（5）硒蛋白—P(SelenoproteinP):具有10個(gè)分子硒半胱氨酸,是迄今為止發(fā)現(xiàn)含最多硒半胱氨酸殘基硒蛋白.具備將硒通過(guò)血循環(huán)分派到不同組織和器官轉(zhuǎn)運(yùn)功能.

（6）硫氧還蛋白還原酶(thioredoxinreductase):硫氧還蛋白還原酶是一系列包具有二硫化物酶氧化還原劑和轉(zhuǎn)移因子.

（7）其她硒蛋白功能不擬定硒蛋白多樣性就擬定了其生化代謝途徑復(fù)雜性.其生理功能則由硒狀態(tài)變化而擬定.日糧攝入一定量硒所表達(dá)硒蛋白維持著機(jī)體健康,硒局限性或缺少就引起相應(yīng)硒蛋白調(diào)節(jié)失控而導(dǎo)致?lián)p傷性反映.日糧中添加適量硒,有助于改進(jìn)畜禽生產(chǎn)性能、減少死亡率,改進(jìn)繁殖性能,提高畜禽健康水平[9]。2.2硒多糖硒多糖是生物體對(duì)無(wú)機(jī)硒進(jìn)行生物有機(jī)化形式之一。由于多糖分子構(gòu)造特點(diǎn)，有也許與硒結(jié)合，含硒多糖在自然界，特別是在植物中存在已經(jīng)得到證明[10]。硒多糖不但能始終SiO2對(duì)細(xì)胞毒害作用，并且可以抑制人胚肺巨細(xì)胞病毒[11]。除此以外，它還能有效提高血液中硒含量和GPx活性，明顯減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛含量，增強(qiáng)紅細(xì)胞抗H2O2氧化損傷能力，具備明顯免疫增強(qiáng)效應(yīng)。并且研究發(fā)現(xiàn)，硒多糖對(duì)細(xì)胞輻射遺傳損傷有防護(hù)效應(yīng)，并且硒多糖對(duì)核酸內(nèi)切酶活性影響與DNA修復(fù)合成增強(qiáng)作用關(guān)于。2.3硒代氨基酸高等植物中存在硒氨基酸有Se-甲基硒蛋氨酸，硒代半胱氨酸，硒蛋氨酸，硒胱氨酸等十余種。其中硒代半胱氨酸，硒代胱氨酸和硒蛋氨酸普通被稱為蛋白質(zhì)氨基酸，事實(shí)上她們常以結(jié)合態(tài)（蛋白質(zhì)）形式存在。并且硒代氨基酸是人尋常膳食中獲取硒重要來(lái)源。含硒氨基酸可以通過(guò)直接清除超氧陰離子自由基，進(jìn)而體現(xiàn)出抗氧化能力[12]。2.4硒核酸硒與核酸特別是轉(zhuǎn)移核糖核酸間關(guān)系，是隨著人們結(jié)識(shí)硒蛋白合成生物化學(xué)機(jī)理過(guò)程而不斷進(jìn)一步。對(duì)于含硒轉(zhuǎn)移核糖核酸生物功能只進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)它是某些氨基酸t(yī)RNA含硒同功RNA。具備結(jié)合某些特定氨基酸生物活性，并且它在調(diào)節(jié)某些密碼子mRNA翻譯成蛋白質(zhì)效率上具備重要作用，保證了這些mRNA順利翻譯成蛋白質(zhì)[13]。3富硒產(chǎn)品由于硒具備各種生物學(xué)功能，而人們攝入硒量又普遍較低。因此，富硒產(chǎn)品開(kāi)發(fā)是至關(guān)重要。當(dāng)前，市場(chǎng)上浮現(xiàn)富硒產(chǎn)品有富硒藥物，富硒保健品和富硒農(nóng)產(chǎn)品。當(dāng)前又相繼浮現(xiàn)了日用品補(bǔ)硒，例如在生產(chǎn)廚房用品和茶具過(guò)程中添加硒元素。但最重要仍為富硒保健品和富硒農(nóng)產(chǎn)品。3.1富硒酵母通過(guò)生物富硒將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒．是生產(chǎn)富硒食品一種安全有效辦法．而富硒酵母生產(chǎn)是迄今最慣用、最簡(jiǎn)便一種生物富硒途徑。富硒酵母普通含硒500～1500g／g，其中有機(jī)硒占95％左右，重要以硒代氨基酸和硒蛋白形式存在，少某些形成硒多糖和硒tRNA[16]。3.3.1富硒酵母生產(chǎn)培養(yǎng)基中硒濃度對(duì)酵母生長(zhǎng)和對(duì)硒吸取有很大影響．在酵母菌培養(yǎng)過(guò)程中．普通都會(huì)經(jīng)歷適應(yīng)期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。由于硒是在酵母生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中摻入到初級(jí)代謝產(chǎn)物中，因而對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期是富集硒元素最佳時(shí)期，而到了穩(wěn)定期后來(lái)，由于培養(yǎng)環(huán)境惡劣，酵母生長(zhǎng)繁殖在這個(gè)時(shí)候逐漸趨于停止，代謝減少，乙醇等發(fā)酵產(chǎn)物開(kāi)始積累，硒在此時(shí)很難再摻入到細(xì)胞內(nèi)。由于酵母細(xì)胞在對(duì)數(shù)期吸取硒能力明顯高于其他生長(zhǎng)階段，故在進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期前應(yīng)添加無(wú)機(jī)硒。但是，濃度過(guò)高無(wú)機(jī)硒對(duì)酵母細(xì)胞具備一定毒性，特別是在適應(yīng)期．由于酵母細(xì)胞數(shù)量少，對(duì)外界環(huán)境變化比較敏感，添加硒量不能太多，因而，硒添加要以分批添加為宜。而不同酵母菌種對(duì)硒耐性也定然是不同，但普通硒起始添加濃度不適當(dāng)高于25~μg/ml,而在發(fā)酵過(guò)程中，則需要恰當(dāng)增長(zhǎng)硒添加量以獲得較好富硒效果。此外，有條件實(shí)驗(yàn)室也可以選用流加方式添加硒，讓低濃度無(wú)機(jī)硒緩慢流加入發(fā)酵液中。有研究表白，在發(fā)酵初期控制硒濃度在10μg／ml水平，在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期來(lái)暫時(shí)．硒濃度提高至25μg／ml，不但能使硒酵母產(chǎn)量提高15．2％．并且還能有效地提高酵母細(xì)胞對(duì)硒運(yùn)用率，減少單質(zhì)紅硒沉淀形成，使成品酵母有機(jī)硒含量達(dá)90％以上[17]。此外，培養(yǎng)基成分對(duì)富硒酵母生長(zhǎng)和富硒也有很大影響。麥芽汁是酵母菌生長(zhǎng)繁殖抱負(fù)培養(yǎng)基．但麥芽汁濃度過(guò)高會(huì)明顯影響富硒酵母得率。由于在含糖量較高狀況下，雖然在有氧條件下培養(yǎng)，酵母呼吸作用也會(huì)被某些抑制，從而促使可發(fā)酵性糖發(fā)酵生成乙醇(克拉勃脫效應(yīng))[18]。因而在常規(guī)培養(yǎng)時(shí)，最佳將麥芽汁稀釋至糖濃度在4。Bx左右，并恰當(dāng)補(bǔ)充氮源以利于蛋白質(zhì)合成。若要進(jìn)行高密度酵母培養(yǎng)，則最佳用流加培養(yǎng)基辦法進(jìn)行持續(xù)發(fā)酵或補(bǔ)料分批發(fā)酵。除了麥芽汁培養(yǎng)基外，富硒酵母培養(yǎng)還可以用合成或者半合成培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)，在硒代氨基酸合成中，硒相對(duì)于硫并沒(méi)有優(yōu)勢(shì)，在配制培養(yǎng)基過(guò)程中，要在保持酵母不受抑制狀況下，要盡量增長(zhǎng)硒濃度，減少硫濃度，使硒在代謝過(guò)程中具備優(yōu)勢(shì)，合成更多硒代氨基酸。在碳源選取上，要因地制宜選取某些便宜糖類，以減少成本。美國(guó)FDA()對(duì)飼用富硒酵母是這樣定義：富硒酵母是指通過(guò)補(bǔ)料分批發(fā)酵方式培養(yǎng)無(wú)活性干酵母．在發(fā)酵過(guò)程中逐漸加入甘蔗糖蜜與亞硒酸鹽，以使亞硒酸鹽對(duì)酵母生長(zhǎng)速度不利效應(yīng)降到最低，并保證無(wú)機(jī)硒最佳地結(jié)合到酵母細(xì)胞有機(jī)質(zhì)中。殘留無(wú)機(jī)硒經(jīng)沖洗去除，使其含量不超過(guò)富硒酵母終產(chǎn)品總硒量2％。此外，在酵母培養(yǎng)上，由于酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，因而，為了獲得大量富硒酵母，必要在發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行通氣。為了獲得盡量多富硒酵母，需要擬定酵母適當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間，因而，在正式培養(yǎng)前，需要進(jìn)行酵母生長(zhǎng)曲線測(cè)定。3.3.2富硒酵母中硒重要是以硒代甲硫氨酸形式存在，而游離硒代半胱氨酸很少，這是由于生物體內(nèi)有一套復(fù)雜而精細(xì)調(diào)節(jié)機(jī)制，限制半胱氨酸過(guò)渡積累以免引起Fenton反映而產(chǎn)生大量自由基。Yoshida等()分析表白，富硒酵母中硒有74．8％以SeMet形式存在，9．9％以SeCys形式存在，亞硒酸鹽占5．1％，此外10．2％為三種未知含硒化合物[19]。純化SeMet是不穩(wěn)定，易發(fā)生氧化，而酵母細(xì)胞中SeMet相稱穩(wěn)定，室溫貯藏1O年之久富硒酵母中SeMet仍是其重要存在形式。3.3.3對(duì)于許多哺乳動(dòng)物而言，甲硫氨酸是必須氨基酸之一，也就是說(shuō)，動(dòng)物自身合成甲硫氨酸能力有限，需要從食物中得到補(bǔ)充才干正常生活。而如果直接在動(dòng)物飼料等食物中添加無(wú)機(jī)硒，其生物運(yùn)用率又往往很低。而植物和微生物能將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化成硒代甲硫氨酸和硒代半胱氨酸等有機(jī)硒形式，因而硒生物學(xué)運(yùn)用率要優(yōu)于亞硒酸鹽中硒。此外，亞硒酸鈉重要是通過(guò)細(xì)胞單純擴(kuò)散方式吸取，在高攝食狀況下具備一定毒性，增進(jìn)氧化反映發(fā)生；而硒代甲硫氨酸(SeMet)是通過(guò)甲硫氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)積極吸取，幾乎沒(méi)有毒性[20]。富硒酵母用作飼料添加劑或用于食品添加劑(在合理劑量范疇內(nèi))已有30近年歷史，至今尚未見(jiàn)有硒中毒事故報(bào)道。Clark等(1996)對(duì)人進(jìn)行補(bǔ)硒雙盲抑癌干預(yù)實(shí)驗(yàn)也表白，每天補(bǔ)充200μg富硒酵母，平均服用4．5年，沒(méi)有浮現(xiàn)任何副作用[21]。歐盟食品安全局專家小組對(duì)富硒酵母作為飼料添加劑安全性和生物效率進(jìn)行過(guò)評(píng)價(jià)。成果顯示，在最大容許使用量(0．5mg／kg飼料)下對(duì)所有喂飼動(dòng)物均無(wú)副作用，并且不會(huì)變化環(huán)境中硒濃度和分布，因而她們以為，沒(méi)有必要對(duì)富硒酵母進(jìn)行專門(mén)市場(chǎng)監(jiān)控。但考慮到富硒酵母中還存在著一定量無(wú)機(jī)硒，為了謹(jǐn)慎起，美國(guó)FDA()規(guī)定，富硒酵母作為飼料添加劑應(yīng)以預(yù)混料形式添加于雞、火雞、豬、肉牛與奶牛全價(jià)飼料中，其飼料中硒水平不超過(guò)0．3mg／kg；若添加于肉牛飼料補(bǔ)充物中．則肉牛每頭每天硒攝3mg[22]。3.1富硒食品除了藥補(bǔ)硒以外，人們大多通過(guò)飲食來(lái)攝取足夠量硒。又由于硒可以增進(jìn)作物生長(zhǎng)，并且可以防止各種疾病，增強(qiáng)作物抗逆性使其產(chǎn)量提高。在家禽方面又可以提高產(chǎn)蛋率，增進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育等。故富硒農(nóng)副產(chǎn)品發(fā)展迅速。當(dāng)前，開(kāi)發(fā)運(yùn)用比較成熟有富硒大米，富硒茶葉，富硒雞蛋，富硒禽肉，富硒食用菌，富硒蔬菜瓜果（番茄，玉米，等）[14]。并且，農(nóng)副產(chǎn)品更容易進(jìn)入大眾生活，因此較為普遍。3.2富硒保健品隨著人們健康意識(shí)逐漸提高，某些富硒保健品越來(lái)越受到人們青睞。其中，知名幾大產(chǎn)品有“黃金搭檔”，“新稀寶（鋅硒寶片）”，“富硒康”“富硒螺旋藻”，“安琪酵母片”等[15]。但相對(duì)于富硒食品來(lái)說(shuō)，市場(chǎng)上富硒保健品相對(duì)還較匱乏，并且，富硒保健品雖然種類繁多，但價(jià)格也偏高，故在生活在較低水平人們之間無(wú)法普遍。 由于富硒酵母是迄今為止國(guó)內(nèi)最高效、最安全、營(yíng)養(yǎng)最均衡補(bǔ)硒制劑，因而這些保健品大多都以富硒酵母為硒原料。4硒測(cè)定辦法硒測(cè)定辦法諸多，有分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法、分子熒光法、極譜法、質(zhì)譜法、電化學(xué)分析法、化學(xué)發(fā)光分析法、原子吸取法、電感偶合等離子光譜法等。無(wú)論哪種辦法，測(cè)得都是無(wú)機(jī)硒含量，若要測(cè)定有機(jī)硒量，可將樣品消化后測(cè)定出總硒量，然后減去無(wú)機(jī)硒量即可。在這些辦法中，以分光光度法、熒光法和原子吸取法較為慣用。4.1含硒物質(zhì)分解大多數(shù)分析都規(guī)定將待解決樣品中硒從其母體或化學(xué)結(jié)合態(tài)中釋放出來(lái),并破壞有機(jī)質(zhì),使之處在恰當(dāng)氧化態(tài)。解決辦法及比較見(jiàn)表1。表1分解辦法應(yīng)用方式應(yīng)用范疇辦法優(yōu)缺陷燃燒法燃燒樣品后收集硒測(cè)定窄封閉Schoeniger瓶中燃燒樣品,不太以便,使用受到限制熔融法碳酸鈉或過(guò)氧化鈉分解試樣巖石和土壤中硒條件要嚴(yán)格控制濕消化法硝酸和高氯酸等分解試樣并可加硫酸、過(guò)氧化氫、鉬、釩等添加劑廣泛消化時(shí)間在數(shù)小時(shí)以上,常壓敞開(kāi)反映,加熱條件要嚴(yán)格控制微波分解法微波消解廣泛消化時(shí)間數(shù)十分鐘。反映封閉，條件容易控制,制樣精度高,減少環(huán)境污染4.2含硒化合物測(cè)定辦法4.2.1熒光分光光度法最先使用試劑為DAB,當(dāng)前它已被DAN[2,3—二氨基荼(2,3—DiaminonaPhthalen,簡(jiǎn)稱DAN)]所取代。本法成功地應(yīng)用于測(cè)定含硒約0.01μg各種固體物質(zhì),或含量少于lng水樣。采用熒光分光光度法測(cè)硒辦法見(jiàn)表2。其原理是將生物樣品經(jīng)硫酸—高氯酸—鉬酸鈉消解，在酸性介質(zhì)中，四價(jià)硒與2,3-二氨基萘（DAN）反映生成有綠色熒光4,5-苯并苤硒腦，用環(huán)己烷萃取，在激發(fā)波長(zhǎng)376nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm下，進(jìn)行熒分光光度測(cè)定[23]。舉例如表2。表2熒光分光光度法測(cè)硒辦法被測(cè)試樣試樣解決定量辦法測(cè)定波長(zhǎng)數(shù)理記錄解決回收率海藻產(chǎn)品中硒[25]硝酸—高氯酸消化后鹽酸還原,控制pH加入DAN,環(huán)己烷萃取工作曲線激發(fā)波長(zhǎng)376nm,發(fā)射波長(zhǎng)520nmRSD為01175%R=019933變異系數(shù)3.16%平均97.7%各種清潔水、生活污水及某些工業(yè)廢水中硒[26]硝酸—高氯酸消化后鹽酸還原,用氨水控制pH加入ED2TA、DAN,環(huán)己烷萃取工作曲線激發(fā)波長(zhǎng)376nm,發(fā)射波長(zhǎng)520nmRSD為016%～317%。8914%～9811%4.2.2老式測(cè)定硒辦法中,對(duì)于含硒量較高樣品,可以用石墨爐原子吸取分光光度法、火焰原子吸取分光光度法等辦法，而原子吸取法對(duì)于低硒樣品尤為適合。4.2.3紫外在分光光度法測(cè)定中,使用3,3’—二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑辦法應(yīng)用最廣。其原理環(huán)節(jié)與3.2.1相似。4.2.4近年來(lái)，硒催化光度分析法由于其敏捷度高，儀器簡(jiǎn)樸，試劑易得，費(fèi)用較低等特點(diǎn)，越來(lái)越受到注重。依照硒催化作用，結(jié)合分光光度法、極譜法等辦法可用于測(cè)定生物材料等試樣中硒。其原理是硒在某種特定介質(zhì)中，四價(jià)硒對(duì)氧化（還原）有機(jī)試劑有催化作用，使有機(jī)試劑褪色反映速度迅速提高。此外，硒也有用于催化氯酸鹽，—肼—有機(jī)胺氧化耦合反映，從而應(yīng)用于痕量硒測(cè)定。表3。表3被測(cè)試樣測(cè)定原理試樣解決測(cè)定條件數(shù)據(jù)記錄解決回收率海洋生物中硒[27]在pH=3C1ark—Lubs緩沖介質(zhì)中，硒(1V)能催化溴酸鉀氧化甲基紫褪色反映進(jìn)行分光光度法測(cè)定硝酸—高氯酸消化波長(zhǎng)590nm線性范疇為0.14～8μg/LRSD<10%97%～105%牧草中硒硒(1V)催化氯酸鉀氧化苯肼后與變色酸反映,再進(jìn)行分光光度法測(cè)定硝酸—高氯酸—硫酸消化波長(zhǎng)510nmRSD216%～618%線性范疇0～012μg/ml9113%～10210%4.2.5當(dāng)前有許多色譜辦法可以用于硒測(cè)定,但這些辦法大多需要通過(guò)衍生后再間接測(cè)定，故而具備一定不以便性。在此不做論述。4.2.64.2.6.1運(yùn)用原子熒光分析儀對(duì)硒含量進(jìn)行分析測(cè)定應(yīng)用也很普遍。據(jù)報(bào)道有研究者對(duì)飲用水中硒用原子熒光分光光度法進(jìn)行測(cè)定用氫化物發(fā)生原子熒光法測(cè)定絞股藍(lán)中硒，也獲得了較為滿意成果。4.2.6.2中子活化法美國(guó)哈佛大學(xué)Mcrris等用中子活化法測(cè)定了頭發(fā)和腳趾甲中硒含量[28]。人們以為此法是精準(zhǔn)度原則,但它需要昂貴設(shè)備,應(yīng)用受到了限制。此外,火花源質(zhì)譜法、同位素稀釋技術(shù)、氣相色譜技術(shù)等已用于測(cè)定某些生物樣品中硒。這些辦法敏捷高,有辦法具備能分析各種元素長(zhǎng)處。然而儀器費(fèi)用大或耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng),使用受到了限制[29]以上測(cè)定硒辦法合用于微量、痕量硒分析。對(duì)于常量硒分析,如硒劑中亞硒酸鈉含量測(cè)定,則可用容量分析中氧化還原滴定法進(jìn)行測(cè)定,辦法為:在強(qiáng)酸介質(zhì)中,亞硒酸鈉與碘化鉀發(fā)生氧化還原反映生成游離碘,用硫代硫酸鈉滴定生成碘,以淀粉為批示劑,依照顏色變化判斷反映終點(diǎn)。5.結(jié)束語(yǔ)硒作為人類必要微量元素，有著不可忽視生理功能。雖然無(wú)機(jī)硒也可作為硒來(lái)源，但相對(duì)于有機(jī)硒來(lái)講，無(wú)機(jī)硒毒性大，也不易吸取。有機(jī)硒則不具備這些缺陷，通過(guò)富硒酵母辦法將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，不但可以提高吸取率和轉(zhuǎn)化率，還可以補(bǔ)充一定數(shù)量蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，除此以外，其還可在體內(nèi)長(zhǎng)期保存。因此，富硒酵母是一種高效且簡(jiǎn)便生物富硒辦法。由于國(guó)內(nèi)大某些地區(qū)屬于缺硒地區(qū)，人們每天攝入硒量低于規(guī)定值。因此除了直接在天然食物中獲取硒以外，富硒產(chǎn)品會(huì)是更好選取。而富硒酵母作為一種生物富硒辦法，以便有效，故在富硒產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中被廣泛應(yīng)用。當(dāng)前，雖然富硒產(chǎn)品價(jià)格偏高，并沒(méi)有很普遍，但是，毋庸置疑，它依然具備較好發(fā)展前景。參照文獻(xiàn)：[1]羅海吉，吉雁鴻.硒生物學(xué)作用及其意義.微量元素與健康研究.，17（2）.[2]羅海吉，吉雁鴻.硒生物學(xué)作用及其意義.微量元素與健康研究.，17（2）.[3]羅海吉，吉雁鴻.硒生物學(xué)作用及其意義.微量元素與健康研究.，17（2）.[4]OckSoonSohn，DhimantH．Desai，ArunangshuDas．Comparativeexcretionandtissuedistributionofseleniuminmiceandratsfollowingtreatmentwiththechemopreventiveagent1，4－phenylenebis(methylene)selenocyanate［J］．Chemico－BiologicalInteractions，，151．[5]AndreasS．Mueller，JosefPallauf．Compendiumoftheantidiabeticeffectsofsupranutritionalselenatedoses．InvivoandinvitroinvestigationswithtypeIIdiabeticdb/dbmice［J］．JournalofNutritionalBiochemistry，，17．[6]P．D．Whanger．MetabolismofSeleniuminHumans［J］．TheJournalofTraceElementsinExperimentalMedicine，1998，(11).[7]GFCombsJr．Statusofseleniuminprostatecancerprevention［J］．BritishJournalofCancer，，91．[8]仲娜，王小如，陳登云．有機(jī)硒研究進(jìn)展［J］．中華人民共和國(guó)藥事，，(4)．[9]黃志堅(jiān).富硒酵母研究與應(yīng)用.福建畜牧獸醫(yī)[J].1998（4）：60.[10]黃峙，鄭文杰，郭寶江.含硒生物大分子化合物研究進(jìn)展.海南大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版[J]，，19（2）：172.[11]徐碧輝，黃開(kāi)勛，高中洪.硒蛋白與硒多糖[J].科學(xué)，1997，49（5）：22-25.[12]白燕，秦碧殷，劉鶯，洪偉，周艷芬.含硒含硫氨基酸清除超氧陰離子自由基研究.ActaNutrimentaSinica,,31(1):26-29.[13]張永欽，黃開(kāi)勛，周井炎，徐輝碧./含硒轉(zhuǎn)移核糖核酸（Se-tRNA）研究進(jìn)展，大自然摸索，1998，17（65）：65-69.[14]蔣步云，柴振林，朱杰麗，尚素微，吳翠蓉.富硒產(chǎn)品開(kāi)發(fā)運(yùn)用與研究現(xiàn)狀.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，，40（11）：446.[15]阮文輝，李睿.市場(chǎng)上富硒產(chǎn)品調(diào)查與分析.江蘇教誨學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)）[J]，，27（6）：24.[16]DemirciA，PomettoAL，CoxDJ．Enhancedorganicallyboundseleniumyeastproductionbyfed—batchfermentationIJI．J．AgrieFoodCtiem．．1999．47：2496—2500．[17]陸建安，陸建安，李劍芳．等．飼用硒酵母制備過(guò)程中硒梯度添加辦法研究[J]．糧食與飼料J-,Jk，，1：37—38．[18]吳根福，楊志堅(jiān)．發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)指引[M]．北京：高等教誨出版社，：103.[19]YoshidaM，AbeM，F(xiàn)ukunagaK