DB35-T+897-2009食品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量的測定

DB35福 建 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB35/T897—2009食品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量的測定2009-03-112009-03-11發(fā)布2009-04-01實施福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB35/T897—2009前 言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、B為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：福建省中心檢驗所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄭小嚴(yán)、黃紅霞、林欽、戴明、黃永輝、梁敏、王征。本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布。IIDB35/T897—2009DB35/T897—2009DB35/T897—2009DB35/T897—2009食品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量的測定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜜餞、水產(chǎn)品、豆制品、食用菌、炒貨、堅果和固體調(diào)味品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜法檢出限為：堿性橙0.02mg/kg；堿性嫩黃O0.03mg/kg；堿性桃紅T0.004mg/kg；定量限為：堿性橙0.06mg/kg；堿性嫩黃O0.1mg/kg；堿性桃紅T0.02mg/kg。本標(biāo)準(zhǔn)液相色譜06μ/gO0.3gkT07μ/g；2μg/kgO1μg/kgT2μg/kg。規(guī)范性引用文件（不包括勘誤的內(nèi)容是否使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法第一法高效液相色譜法原理OT含量，外標(biāo)法定量。試劑和材料GB/T6682規(guī)定的一級水。25%。磷酸：優(yōu)級純。氯化鈉。二氯甲烷。無水硫酸鈉：650℃灼燒4h，在干燥器內(nèi)冷卻到室溫，貯于密封瓶中備用3..9 堿甲醇：500mL甲醇（3.2.2）+10mL氨（3.2.4。3.0 ：500mL（3.2.2）+10mL（3.2.3。甲醇飽和正己烷：正己烷加入少量甲醇，直至分層出現(xiàn)。2%（體積百分比L氨水（3.2.4）10L。3..3 00%磷酸（體積百分比0.5L磷酸（3..5）00L。1（ChrysoidneCas3282-，C14·l2871≥99%。（uaineCas26527-223l338≥98%。T（Safranine，Cas777-6，214Cl5084≥99%。OT20.0mgOT100mL,200μg/mL4℃冰箱放置，3個月內(nèi)使用。T（3.2.17酸化甲醇（3.2.10）0.05μg/mL～1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。4℃冰箱放置，一周內(nèi)使用。儀器與設(shè)備高效液相色譜儀：配紫外和熒光檢測器。高速萬能粉碎機(jī)。水循環(huán)真空泵。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。超聲波發(fā)生器（40KHz/600W）。冷凍高速離心機(jī)：15000r/min。3.3.9 分析天平（0.0001g0.1g）。3.3.10高速勻漿機(jī)。試樣制備和保存5002分析步驟試樣的提取凈化5g（1g）0L200L堿化甲醇（3.9，超聲提30min4℃，15000r/min55.0mL50mL10mL2%氨水（3.2.12）2g氯化鈉（3.2.6）混勻，加入二氯甲烷（3.2.7）310mL4℃，15000r/min5分鐘，吸出下層萃取液合并，過無水硫酸鈉（3.2.8）250mL濃縮瓶中，40℃，1mL10mL刻度試管中，403mL酸化甲醇（3.2.10）溶解殘渣，用甲醇飽和正己烷（3.2.11）32mL，吸出正己烷層棄去，402mL以下，用酸化甲醇（3.2.10）2.0mL0.2μm濾膜過濾后檢測。高效液相色譜條件a）色譜柱：C18，5μm，150×4.6mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者；b）柱溫：30℃；紫外檢測波長：46n（；21n52n（T；e）20μL；f）流動相0.05%磷酸（3.2.13）與甲醇（3.2.2）梯度見表1。2表1流動相及梯度表時間（min）流速（mL/min）0.05%磷酸（%）甲醇（%）曲線017525/8150506151752511201752511（本方法條件為參考條件，可根據(jù)不同儀器、色譜柱進(jìn)行調(diào)整。）定量測定AA.。結(jié)果計算試樣中堿性橙、堿性嫩黃O、堿性桃紅T的含量按式（1）計算：cVX ×k （1）式中：X式中：XT的含量，單位為毫克每千克（g/k；cTV——試樣提取液體積，單位為毫升（L；——試樣的質(zhì)量，單位為克k——稀釋因子。結(jié)果保留2位有效數(shù)值。3.6.2 重復(fù)性在重復(fù)性條件下，獲得的堿性橙、堿性嫩黃O、堿性桃紅T的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于其算術(shù)平均值的15%。原理試樣通過堿化甲醇提取，二氯甲烷萃取，正己烷凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法同時檢測食品中堿性橙、堿性嫩黃O和堿性桃紅T含量，外標(biāo)法定量。試劑和材料04甲酸（體積百分比4.0L甲酸（3..3）00L。3.2。儀器與設(shè)備3（（）4.5.3 質(zhì)譜分析條件a）b）毛細(xì)管電壓：1.00kV；c）源溫度：100℃；d）脫溶劑氣溫度：350℃；e）脫溶劑氣流量：700L/h；f）碰撞室壓力：3.110-3mbar；g）3：表3特征離子及參數(shù)*定量離子（本方法條件為參考條件，可根據(jù)不同儀器進(jìn)行調(diào)整。）4.5.4 定性測定144.3.1 高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧（ESI）離子源。4.3.2 3.3.2～3.3.10。試樣制備和保存（同3.4）分析步驟試樣的提取凈化（同3.5.1）高效液相色譜條件a）色譜柱:C18，1.7μm，1002.1mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者；b）柱溫：40℃；c）進(jìn)樣量：3μL；d）流動相0.4%甲酸（4.2.1）與甲醇（3.2.2）梯度見表2：表2流動相及梯度時間（min）流速（mL/min）0.4%甲酸（%）甲醇（%）曲線00.37525/20.35545640.375251160.3752511化合物保留時間（min）母離子（M+H）+（m/z）錐孔電壓（V）子離子（m/z）碰撞能量（eV）堿性橙2.04213.235*77.22035121.220堿性桃紅T2.69315.275*299.33575238.335堿性嫩黃O2.91268.335*147.23035252.3302.5%4定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。表4定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差%相對離子豐度>50>20>10≤10最大允許偏差±20±25±30±504.5.5 定量測定BB.1B.2。（注：堿性桃紅T有4個同分異構(gòu)體峰，計算時將4個峰面積相加。）結(jié)果計算試樣中堿性橙、堿性嫩黃O、堿性桃紅T的含量按式（2）計算：cVX ×k ………… （2）式中：X式中：XT的含量，單位為毫克每千克（g/k；cTV——試樣提取液體積，單位為毫升（L；——試樣的質(zhì)量，單位為克k——稀釋因子。結(jié)果保留2位有效數(shù)值。4.6.2 重復(fù)性在重復(fù)性條件下，獲得的堿性橙、堿性嫩黃O、堿性桃紅T的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于其算術(shù)平均值的15%。566附錄A（資料性附錄）2a2a13b圖A.0.5μg/ml堿性橙（1）、堿性桃紅T（2）、和堿性嫩黃O（3）標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖a.熒光檢測譜圖 b.436nm紫外檢測譜圖附錄B（資料性附錄）混合標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖和選擇離子監(jiān)測圖3322212B.10.2μg/ml混合標(biāo)準(zhǔn)品總離子流圖2．堿性桃紅T3．堿性嫩黃O080808-JXTH-005100%

STD4

2

2

201.201.4001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.20080808-JXTH-005100%01.20080808-JXTH-005100%01.20080808-JXTH-005100%01.20080808-JXTH-005100%01.20080808-JXTH-005100%01.20080808-JXTH-005100%01.202.673.032.443.40MRMof6ChannelsES+315>2386.04e61.401.601.802.002.202.402.602.772.803.003.202.893.40MRMof6ChannelsES+268.5>252.47.05e61.401.601.802.002.202.402.602.8032.893.003.203.40MRMof6ChannelsES+268.5>147.22.23e71.401.601.802.002.202.402.602.803.003.202.023.40MRMof6ChannelsES+213.4>120.21.60e61.401.601.802.002.202.402.602.803.003.202.013.40MRMof6ChannelsES+213.4>77.21.97e631.401.601.802.002.202.402.602.803.003.202.892.673.40MRMof6ChannelsES+TIC2.93e71.401.601.802.022.002.443.032.202.402.602