2024年高中生物新教材同步選擇性必修第三冊 第1章 第2節(jié) 第2課時 微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

第2課時微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)[學(xué)習(xí)目標]1.闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理。2.進行土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)。一、選擇培養(yǎng)基、微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定1．選擇培養(yǎng)基(1)自然界中目的菌的篩選①實例：聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)中用到的耐高溫的DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出的水生棲熱菌中提取出來的。(2)實驗室中目的菌的篩選①原理：人為提供有利于目的菌生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度和pH等)，同時抑制或阻止其他微生物的生長。②方法：利用選擇培養(yǎng)基分離。選擇培養(yǎng)基：允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。2．微生物的選擇培養(yǎng)(1)方法：對樣品進行充分稀釋，然后將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。(2)稀釋涂布平板法的操作過程①系列稀釋操作a．編號為1×102～1×107試管中分別盛有9mL無菌水。b．將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。c．取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。②涂布平板操作取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面eq\o(|,|,|,\s\do8(↓))涂布器消毒：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中eq\o(|,|,|,\s\do8(↓))涂布器滅菌：將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布eq\o(|,|,|,\s\do8(↓))涂布平板：用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻(3)培養(yǎng)：待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。3．微生物的數(shù)量測定(1)稀釋涂布平板法①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②計數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進行計數(shù)。樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)。在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值。③計算公式每克樣品中的菌株數(shù)＝eq\f(某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),涂布平板時所用的稀釋液的體積mL)×稀釋倍數(shù)(2)顯微鏡直接計數(shù)法一種常用的、快速直觀的測定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。特別提醒顯微鏡直接計數(shù)法本身不能區(qū)分細菌的死活，因此一般用來統(tǒng)計總菌數(shù)。但是，通過一定的輔助處理，可以實現(xiàn)活菌計數(shù)，如在計數(shù)前用臺盼藍染液進行染色，可以通過統(tǒng)計無色細胞的個數(shù)來對活菌進行計數(shù)。判斷正誤(1)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基()(2)脲酶能催化尿素分解產(chǎn)生N2，N2可作為細菌生長的氮源()(3)利用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的細菌數(shù)量就是活菌的數(shù)量()答案(1)√(2)×(3)×解析(2)分解尿素的細菌合成的脲酶將尿素分解成氨。(3)利用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的細菌數(shù)量無法區(qū)分死菌和活菌。任務(wù)一：微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)1．通常1g土壤中有幾億到幾百億個土壤微生物，其中，細菌的數(shù)量最多，能分解尿素的細菌是其中的一部分。如何設(shè)計培養(yǎng)基的配方，從而將土壤稀釋液中能分解尿素的細菌分離出來？提示設(shè)計一種選擇培養(yǎng)基，以尿素作為唯一氮源，可以將分解尿素的細菌分離出來。2.用平板劃線法接種培養(yǎng)結(jié)果的圖片如下圖。請結(jié)合圖片分析，平板劃線法能否達到對細菌進行計數(shù)的目的？為什么？提示不能；平板劃線法最開始的劃線很可能菌類會長成一片，導(dǎo)致無法計數(shù)，此外灼燒接種環(huán)的時候也會殺死一部分菌類。3.當菌液稀釋倍數(shù)足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落來源于一個活菌。用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)的結(jié)果如圖所示。與平板劃線法相比，為什么稀釋涂布平板法可以用于細菌的計數(shù)？提示稀釋涂布平板法會進行等比稀釋，在合適的稀釋倍數(shù)下，均勻涂布得到的菌落互不接觸，可以確定菌落的密度，再通過計算可以得知原液中的活細菌數(shù)。4．請計算：4號試管的結(jié)果表明每克土壤中的活菌數(shù)約為1.1×108個。5．通過稀釋涂布平板法統(tǒng)計的細菌的數(shù)目與它的實際數(shù)目相同嗎？為什么？提示不相同，統(tǒng)計的細菌數(shù)往往比活菌實際數(shù)目少。因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。6．請完善表格中稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)法的比較。項目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)法主要用具培養(yǎng)基等顯微鏡、血細胞計數(shù)板或細菌計數(shù)板等計數(shù)依據(jù)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)菌株本身優(yōu)點計數(shù)的都是活菌計數(shù)方便、操作簡單缺點操作復(fù)雜、有一定誤差死菌、活菌都計數(shù)在內(nèi)1．選擇培養(yǎng)基的類型類型條件分離得到的菌種改變培養(yǎng)條件70～80℃的高溫水生棲熱菌添加某種化學(xué)物質(zhì)加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌高濃度食鹽金黃色葡萄球菌特殊碳源、氮源石油是唯一碳源能消除石油污染的微生物營養(yǎng)缺陷不加碳源自養(yǎng)型微生物不加氮源固氮菌2.兩種純化方法的比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線等比稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器單菌落的獲得從最后劃線的區(qū)域挑取稀釋度合適，整個平板上都可找到單菌落用途分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落；②用于計數(shù)菌落分布共同點都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細胞菌落，達到分離純化微生物的目的，也可用于觀察菌落特征1．如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素的細菌的過程示意圖。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．在配制步驟②③的培養(yǎng)基時，應(yīng)先調(diào)pH后濕熱滅菌B．步驟③純化分解尿素的細菌的原理是將聚集的細菌分散，以獲得單菌落C．步驟③采用稀釋涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素D．步驟④挑?、壑胁煌N的菌落分別接種，比較不同種細菌分解尿素的能力答案C解析步驟③篩選分解尿素的細菌的培養(yǎng)基中，應(yīng)以尿素為唯一氮源，不能再含有其他氮源，C錯誤。2．A．圖甲三個平板中所用培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)相同B．圖甲、乙均適合分離微生物，但乙不適合對微生物進行計數(shù)C．圖甲、圖乙所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器D．圖乙每次劃線應(yīng)從同一起點開始以便使聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落答案B解析根據(jù)圖甲中三個平板的菌落密度可知，三個平板中所用培養(yǎng)液的稀釋倍數(shù)不同，A錯誤；圖甲、乙中若均為選擇培養(yǎng)基，均可用于分離微生物，圖乙是平板劃線法接種后的結(jié)果，不適合對微生物進行計數(shù)，B正確；稀釋涂布平板法接種使用涂布器，平板劃線法接種使用接種環(huán)，C錯誤；圖乙每次劃線應(yīng)從上一次劃線的末端開始，以便使聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落，D錯誤。二、探究·實踐——土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1．實驗設(shè)計(1)土壤取樣①土壤要求：酸堿度接近中性且潮濕。②取樣部位：距地表約3～8cm的土壤層。(2)樣品的稀釋測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進行平板培養(yǎng)，當?shù)谝淮巫鲞@個實驗時可以將稀釋的范圍放寬一點。(3)微生物的培養(yǎng)與觀察①培養(yǎng)：根據(jù)不同微生物的需要，控制適宜的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。②觀察a．觀察方法：每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而遺漏部分菌落。b．記錄菌落的特征：包括菌落的形狀、大小和顏色等。2．操作提示(1)無菌操作：取土樣的用具在使用前都需要滅菌。(2)做好標記：本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標記。例如，在標記培養(yǎng)皿時應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。(3)制定計劃：對于耗時較長的生物實驗，需要事先規(guī)劃時間，以便提高實驗效率，在操作時有條不紊。判斷正誤(1)測定不同微生物數(shù)量時，接種的土壤稀釋液的稀釋度相同()(2)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，統(tǒng)計的菌落數(shù)就是活菌的實際數(shù)()(3)菌落特征是鑒別菌種的重要依據(jù)()答案(1)×(2)×(3)√解析(1)土壤中各種微生物的數(shù)量不同，因此分離不同的微生物要采用不同的稀釋度。(2)當兩個或多個菌落連在一起時，只能觀察計為一個菌落，因此利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目少。任務(wù)二：土壤中分解尿素的細菌的分離、計數(shù)與鑒定1．測定土壤中細菌的總量和能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？為什么？提示不相同；因為土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量比細菌的總量要少。2．甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)。在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果。(1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果不可靠(填“可靠”或“不可靠”)。若不可靠，應(yīng)如何改進？提示為增加實驗的說服力與準確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實驗，在同一稀釋度下至少涂布3個平板，統(tǒng)計結(jié)果后計算平均值。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對實驗結(jié)果的處理不合理(填“合理”或“不合理”)。微生物計數(shù)時，如果實驗中出現(xiàn)重復(fù)實驗的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實驗過程中可能的影響因素，從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。3．嘗試完成下表中對微生物的分離與計數(shù)實驗結(jié)果的分析。目的現(xiàn)象結(jié)論是否有雜菌污染的判斷對照組的培養(yǎng)基中無菌落生長未被雜菌污染培養(yǎng)物中菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高培養(yǎng)物中混入其他雜菌選擇培養(yǎng)基是否起篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用4.提示不一定；因為有些微生物可以利用能分解尿素的細菌的代謝物進行生長繁殖。5．細菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高，因此可以通過檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷是否發(fā)生了該化學(xué)反應(yīng)，進而判斷該菌是否為尿素分解菌。依據(jù)以上原理，如何對分離得到的微生物是否是分解尿素的細菌作進一步鑒定？提示在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，接種并培養(yǎng)初步篩選的菌種，若菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶，則可說明該菌種能夠分解尿素。選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基項目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊成分加入某種化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品目的抑制或阻止其他微生物生長，促進目的微生物生長與微生物的代謝物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)用途培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同的微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細菌生長；用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)尿素分解菌可用伊紅—亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并有金屬光澤)3．下列關(guān)于“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)”實驗操作的敘述，不正確的是()A．利用稀釋涂布平板法準確估計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是有恰當?shù)南♂尪菳．若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照C．該實驗應(yīng)采用稀釋涂布平板法D．答案B解析利用稀釋涂布平板法估算菌落數(shù)目的關(guān)鍵是有恰當?shù)南♂尪?，若稀釋倍?shù)太低、菌落太多，會連在一起，稀釋倍數(shù)太高，平板上菌落數(shù)目過少，都不宜進行計數(shù)，A正確；若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種在沒有選擇作用的細菌通用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上培養(yǎng)作為對照，B錯誤；分解尿素的細菌能合成脲酶，將尿素分解產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基的堿性增強，用以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細菌，能維持pH穩(wěn)定，不會使酚紅指示劑變紅，D正確。4．(2023·湖北黃石高二期末)在做“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)”的實驗時，甲同學(xué)從對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只篩選出大約50個菌落。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．甲同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是土樣不同，也可能是操作過程出了問題B．將甲同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)作為空白對照，可以證明培養(yǎng)基是否受到污染C．讓其他同學(xué)用與甲同學(xué)一樣的土壤進行實驗，如果結(jié)果與甲同學(xué)一致，則可以證明甲同學(xué)無誤D．B、C選項的實驗思路都遵循了實驗的對照原則答案D解析B選項的實驗思路遵循了實驗的對照原則，C選項的實驗思路遵循了實驗的重復(fù)原則，D錯誤。題組一選擇培養(yǎng)基和微生物的選擇培養(yǎng)1．(2023·四川成都高二月考)某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3供植物吸收和利用。以下說法錯誤的是()A．土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成脲酶B．能分解尿素的細菌也能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源C．為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源D．篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4的作用是提供無機鹽和維持pH答案B解析能分解尿素的細菌是一種分解者，屬于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，B錯誤。2．平板劃線法和稀釋涂布平板法是接種微生物的兩種常用方法，下列敘述正確的是()A．采用稀釋涂布平板法獲得的菌落數(shù)往往多于實際的活菌數(shù)B．平板劃線法是將不同稀釋度的菌液通過接種環(huán)連續(xù)劃在固體培養(yǎng)基表面C．稀釋涂布平板法是將不同稀釋度的菌液倒入液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)D．與平板劃線法相比，稀釋涂布平板法形成單菌落的效果更好答案D解析由于兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以利用稀釋涂布平板法獲得的菌落數(shù)往往少于實際的活菌數(shù)，A錯誤；平板劃線法不需要稀釋菌液，是將菌液通過接種環(huán)連續(xù)劃在固體培養(yǎng)基表面，B錯誤；稀釋涂布平板法是將不同稀釋度的菌液涂布到固體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，C錯誤。3．油煙污染由多種有害物質(zhì)組成，不易降解。某同學(xué)從長期受到油煙污染的環(huán)境中分離出油煙降解菌，其篩選分離過程如圖所示。下列敘述正確的是()A．圖中①～③的過程為梯度稀釋B．在培養(yǎng)基中加入油煙污染物，其作用是為微生物提供碳源和能源C．④使用的是固體培養(yǎng)基，需加入瓊脂作為微生物生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)D．過程④可采用稀釋涂布平板法或平板劃線法分離菌種并進行計數(shù)答案B解析圖中①～③的過程中加入油煙污染物作為唯一碳源，能夠初步篩選出能分解油煙的微生物，故該過程稱為選擇培養(yǎng)，A錯誤；配制固體培養(yǎng)基時加入瓊脂，其作用是作為凝固劑，而不是為微生物生長提供碳源，C錯誤；分離菌種常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，但對活菌進行計數(shù)時常用稀釋涂布平板法而不能用平板劃線法，D錯誤。4．(2023·黑龍江哈爾濱高二期中)原油中含有大量有害的、致癌的多環(huán)芳烴。土壤中有些細菌可以利用原油中的多環(huán)芳烴為碳源，在培養(yǎng)基中形成分解圈。為篩選出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小組同學(xué)設(shè)計了相關(guān)實驗。下列有關(guān)實驗的敘述，不正確的是()A．應(yīng)配制來源于被原油污染土壤的土壤稀釋液備用B．配制以多環(huán)芳烴為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基C．將土壤稀釋液滅菌后接種到選擇培養(yǎng)基上D．在選擇培養(yǎng)基上能形成分解圈的即為所需菌種答案C解析若將土壤稀釋液進行滅菌，則不能篩選出能高效降解原油的菌株，C錯誤。5．如圖為選育高產(chǎn)β-胡蘿卜素的布拉霉菌的過程。隨β-胡蘿卜素含量增加，菌體顏色從黃A．過程①屬于誘變育種B．過程②可采用平板劃線法接種C．過程③應(yīng)選擇黃色菌株進行富集培養(yǎng)D．培養(yǎng)基中添加β-紫羅酮起選擇作用答案C解析過程①表示利用紫外線誘導(dǎo)基因突變，故過程①屬于誘變育種，A正確；過程②可采用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種，B正確；菌體隨β-胡蘿卜素含量增加從黃色加深至橙紅色，所以進行過程③時，應(yīng)選取橙紅色的菌落接種至液體培養(yǎng)基進行富集培養(yǎng)，C錯誤；結(jié)合題意“未突變菌不能在含有β-紫羅酮的培養(yǎng)基上生長”可知，只有突變菌株可以在添加了一定濃度的β-紫羅酮的培養(yǎng)基上生長菌落，因此該培養(yǎng)基具有選擇功能，D正確。題組二微生物的數(shù)量測定6．(2023·江蘇無錫高二質(zhì)檢)養(yǎng)殖池中存在的有毒物質(zhì)主要是氨及亞硝酸，這兩種物質(zhì)可由硝A．需要配制添加一定濃度銨鹽的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以篩選硝化細菌B．應(yīng)對采集底泥使用的工具進行滅菌，全部接種過程均需在酒精燈火焰旁進行C．采用平板劃線法進行分離和計數(shù)時，還需與未接種的空白培養(yǎng)基同時培養(yǎng)D．若空白對照組上長出了菌落，需要在實驗組數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上減去空白對照組的菌落數(shù)答案B解析要分離硝化細菌，應(yīng)該用以銨鹽為唯一氮源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中不能加入牛肉膏蛋白胨，A錯誤；平板劃線法不能用于菌落計數(shù)，C錯誤；若空白對照組上長出了菌落，則說明培養(yǎng)基被污染了，實驗數(shù)據(jù)無效，需重新實驗，D錯誤。7．下列有關(guān)稀釋涂布平板法計數(shù)和顯微鏡直接計數(shù)法的敘述，不正確的是()A．利用血細胞計數(shù)板計數(shù)屬于顯微鏡直接計數(shù)法，其缺點是不能區(qū)分死菌與活菌B．兩種計數(shù)方法，其統(tǒng)計值與實際值相比，均有差異，但產(chǎn)生差異的原因不同C．兩種計數(shù)方法均能在計數(shù)的同時觀察到所研究微生物的形態(tài)特征D．當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，一般選取菌落數(shù)在30～300的且差異不大的平板進行計數(shù)答案C解析顯微鏡直接計數(shù)法無法區(qū)分死菌和活菌，A正確；稀釋涂布平板法計數(shù)時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故而統(tǒng)計值比實際值?。伙@微鏡直接計數(shù)法計數(shù)時不能區(qū)分死菌和活菌，故測定的微生物數(shù)量往往大于實際的活菌數(shù)，因此兩種計數(shù)方法其統(tǒng)計值與實際值相比，均有差異，但產(chǎn)生差異的原因不同，B正確；稀釋涂布平板法觀察到的是菌落的形態(tài)特征，而不是微生物的形態(tài)特征，顯微鏡直接計數(shù)法觀察到的是微生物的形態(tài)特征，C錯誤。8．某研究小組為了探究覆蓋保鮮膜對西瓜表面微生物的種類和數(shù)量的影響，他們將覆蓋保鮮膜保存了三天的西瓜的瓜瓤制備成浸出液，再將浸出液接種到培養(yǎng)基平板上進行觀察。下列說法正確的是()A．應(yīng)用液體培養(yǎng)基接種浸出液進行培養(yǎng)B．應(yīng)采用平板劃線法對浸出液進行計數(shù)C．每組至少設(shè)置三個平板，確保實驗結(jié)果的準確性D．只需要設(shè)置未接種瓜瓤浸出液的空白平板作對照答案C解析要探究微生物種類和數(shù)量的變化，應(yīng)采用固體培養(yǎng)基，用稀釋涂布平板法進行接種，液體培養(yǎng)基無法觀察到菌落，不便區(qū)分微生物種類，平板劃線法不能對微生物進行計數(shù)，A、B錯誤；每組至少設(shè)置三個平板，避免偶然性，確保實驗結(jié)果的準確性，C正確；對照組還需要設(shè)置接種沒有覆蓋保鮮膜的西瓜的瓜瓤浸出液的平板，D錯誤。9．(2021·山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇A．甲菌屬于解脂菌B．實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力答案B解析根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色”，說明甲菌可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色，因此甲菌屬于解脂菌，A正確；乙菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍色，說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌落也可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯誤；可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比，更加直觀，C正確；可以利用該平板來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標可以是菌落周圍深藍色圈的大小，D正確。10．(2023·河北衡水高二期中)精氨酸依賴型菌株不能在缺少精氨酸的培養(yǎng)基上正常生長，但可作為鳥氨酸發(fā)酵的優(yōu)良菌種。如圖為野生型谷氨酸棒狀桿菌經(jīng)誘變獲得精氨酸依賴型菌并進行篩選的過程示意圖。下列相關(guān)敘述不正確的是()A．野生型菌液的培養(yǎng)皿中不會出現(xiàn)菌落B．乙培養(yǎng)基與甲相比可能缺少了精氨酸C．紫外線照射可導(dǎo)致谷氨酸棒狀桿菌發(fā)生可遺傳變異D．乙中的菌落A為鳥氨酸發(fā)酵的優(yōu)良菌種答案D解析由圖觀察可知，乙中的菌落A是野生型菌種，菌落B為精氨酸依賴型菌株，B可作為鳥氨酸發(fā)酵的優(yōu)良菌種，D錯誤。11．圖甲所示是稀釋涂布平板法中的部分操作，圖乙所示是平板劃線法的操作結(jié)果。下列相關(guān)敘述不正確的是()A．圖甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能涂布菌液B．對于濃度較高的菌液，若圖甲中的最高稀釋倍數(shù)僅為102，則所得到的菌落不一定是由單一的細胞繁殖而成的C．圖乙所示培養(yǎng)皿中每個劃線區(qū)域都可得到符合要求的菌落D．圖乙中連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的末端(除第一次劃線外)答案C解析平板劃線法中多次劃線的目的是降低菌種濃度，經(jīng)過連續(xù)劃線才有可能得到由單一的細胞繁殖而成的菌落，這種菌落才符合要求，C錯誤。12．(2022·上海長寧區(qū)高二階段練習(xí))篩選是分離和培養(yǎng)微生物新類型常用的手段，下列有關(guān)技術(shù)中不能篩選成功的是()A．在全營養(yǎng)的LB培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基)中，篩選大腸桿菌B．在尿素固體培養(yǎng)基中，篩選能夠分解尿素的微生物C．用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基，篩選能分解纖維素的微生物D．在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鈉，篩選抗鹽突變體的微生物答案A解析在全營養(yǎng)的LB培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基)中，幾乎所有細菌都能生長，不能篩選大腸桿菌，A符合題意；在尿素固體培養(yǎng)基中，只有能分解尿素的微生物才能生長，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生長，能夠篩選分解尿素的微生物，B不符合題意；在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中，只有能分解纖維素的微生物才能生長，不能分解纖維素的微生物因缺乏碳源不能生長，能夠篩選分解纖維素的微生物，C不符合題意；在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鈉，只有抗鹽的微生物才能生長，故可用于篩選抗鹽突變體的微生物，D不符合題意。13．某生物興趣小組試圖探究山羊瘤胃中的微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計了以下實驗，并成功篩選到能降解尿素的細菌(目的菌)。實驗步驟如圖所示。請回答下列問題：稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)5003672483618(1)該實驗中所用培養(yǎng)基在成分上的特殊要求是；培養(yǎng)基中的KH2PO4和Na2HPO4的作用有。(2)實驗中采用的分離純化細菌的方法是。實驗過程中，除了需將接種后的平板放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)一段時間后觀察，還需要設(shè)置在相同條件下培養(yǎng)的，作為對照實驗，其目的是_______________________________________________________________________________。(3)為了計數(shù)細菌，將取自瘤胃中的液體進行稀釋，接種在培養(yǎng)基上，放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，統(tǒng)計菌落數(shù)，結(jié)果如上表。其中倍的稀釋倍數(shù)比較適合計數(shù)。有同學(xué)認為，該計數(shù)方法統(tǒng)計的細菌數(shù)目會比實際數(shù)目，他的理由是