2018-2019學(xué)度高二生物資料：動(dòng)物細(xì)胞工程

第二節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)（一）、概念

是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。（二）、原理細(xì)胞分裂增殖動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（三）、過(guò)程幼齡動(dòng)物剪碎組織原代細(xì)胞培養(yǎng)取動(dòng)物器官和組織細(xì)胞懸浮液傳代細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞歸納過(guò)程取

的組織、器官細(xì)胞懸浮液

酶貼滿瓶壁的細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞加入

液動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胰蛋白培養(yǎng)接觸抑制原代培養(yǎng)(分裝前)1-10代細(xì)胞遺傳物質(zhì)

改變?cè)?xì)胞培養(yǎng)加

液40—50代細(xì)胞(細(xì)胞株)未遺傳物質(zhì)

改變無(wú)限傳代（細(xì)胞系）已傳代培養(yǎng)胰蛋白

酶有關(guān)概念

細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境

保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖

添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清等。（四）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件2、營(yíng)養(yǎng)3、溫度和PH

培養(yǎng)室中控制,使之達(dá)到36.5±0.5℃,7.2~7.4培養(yǎng)箱中提供O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）4、氣體環(huán)境：植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的

細(xì)胞培養(yǎng)基特有成分

、植物激素葡萄糖、培養(yǎng)結(jié)果植物體培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得全能性增殖蔗糖動(dòng)物血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞,某些蛋白質(zhì)【典型例題】某研究小組為測(cè)定某種藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列敘述正確的是（

）A.制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胃蛋白酶處理肝組織塊B.培養(yǎng)液需含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素和動(dòng)物血清等C.為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素D.甲、乙細(xì)胞在持續(xù)傳代培養(yǎng)過(guò)程中，均會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象C點(diǎn)撥：甲（腫瘤細(xì)胞）失去接觸抑制，而乙（正常肝細(xì)胞）具有接觸抑制，因此甲、乙細(xì)胞在持續(xù)的培養(yǎng)過(guò)程中，乙會(huì)出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象（一）、動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念：

動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.克隆動(dòng)物：用核移植的方法得到的動(dòng)物。動(dòng)物細(xì)胞核移植（二）、分類(lèi)：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易

細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難克隆動(dòng)物:用核移植方法得到的動(dòng)物.

克?。╟lone）是指通過(guò)無(wú)性生殖而產(chǎn)生的遺傳上均一的生物群，即具有完全相同的遺傳組成的一群細(xì)胞或者生物的個(gè)體?？寺≡谙ＥD語(yǔ)中是“小樹(shù)枝葉”的意思，用以指無(wú)性增殖物。

去核卵細(xì)胞供體細(xì)胞電刺激使兩細(xì)胞融合重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)性生殖（三）、體細(xì)胞的核移植過(guò)程高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B【典型例題】某研究小組為測(cè)定某種藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性，準(zhǔn)備對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列敘述正確的是(

)A.制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，可用胃蛋白酶處理肝組織塊B.恒溫培養(yǎng)箱中的CO2濃度維持在5%左右，以促進(jìn)細(xì)胞呼吸C.為了保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的無(wú)毒環(huán)境，需大量添加各種抗生素D.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)藥物對(duì)甲、乙細(xì)胞的毒性大小D點(diǎn)撥：在利用肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí)，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因?yàn)槲傅鞍酌感枰趶?qiáng)酸環(huán)境下才能起作用，但這樣的環(huán)境不適于細(xì)胞生存用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核

單克隆抗體制備過(guò)程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高。應(yīng)用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒用途獲得雜種植株制備單克隆抗體【典型例題】某實(shí)驗(yàn)室做了如圖所示的實(shí)驗(yàn)研究，下列與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的敘