鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析試紙條制備與應(yīng)用的中期報(bào)告

鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析試紙條制備與應(yīng)用的中期報(bào)告一、背景高血壓是全球性的慢性疾病，已經(jīng)成為影響人類健康的重要?dú)⑹种弧Ｄ壳?，全球有超過(guò)10億人患有高血壓，其中以我國(guó)為最多。高血壓病的主要特點(diǎn)是血壓持續(xù)升高，易引發(fā)心血管疾病、腎臟疾病等多種并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅人類的生命安全和身體健康。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人口老齡化加劇，高血壓病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。盡管目前國(guó)際上已經(jīng)對(duì)高血壓的病因、發(fā)病機(jī)制和診斷治療等諸多方面進(jìn)行了深入研究，但其發(fā)病機(jī)理仍然不明確，治療措施也不盡相同，往往存在一定的風(fēng)險(xiǎn)和副作用。因此，在高血壓的快速診斷和治療方面，研究新型的分析技術(shù)和治療方法已成為當(dāng)前科學(xué)家們亟需解決的難題之一。其中，利用生物傳感器和診斷試劑盒等針對(duì)高血壓的快速診斷技術(shù)已經(jīng)成為國(guó)際上的熱點(diǎn)和追求方向之一。二、研究目的鹽酸克倫特羅是一種治療高血壓病的有效藥物，其作用機(jī)理是通過(guò)阻斷血管緊張素Ⅰ的形成，從而使血管舒張和血壓下降。目前，市面上已經(jīng)有一些克倫特羅測(cè)定試劑盒，但其價(jià)格昂貴，使用不方便。因此，本研究的目的是利用膠體金免疫層析技術(shù)，開(kāi)發(fā)出一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的鹽酸克倫特羅檢測(cè)方法。該方法可以實(shí)現(xiàn)在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下，對(duì)樣品中的鹽酸克倫特羅含量進(jìn)行快速可靠的檢測(cè)。三、研究方法1.試劑的準(zhǔn)備(1)克倫特羅抗體：將高純度的克倫特羅抗原與新西蘭兔子進(jìn)行免疫，制備得到克倫特羅抗體，并以此免疫層析試紙條。(2)鹽酸克倫特羅：純化鹽酸克倫特羅，用于制備克倫特羅的標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)樣品。(3)膠體金：制備10nm的膠體金。(4)其他試劑：PBS緩沖液、PVDF膜、BSA、Tween-20等。2.試紙條的制備(1)在PVDF膜上涂覆克倫特羅抗體，制成試紙條。(2)用甲醛將抗體定在膜上，并用PBS緩沖液洗滌，使其固定篩膜。(3)加入小分子標(biāo)準(zhǔn)品或樣品和膠體金，將試紙條浸泡于樣品中，等待膠體金成紅色。(4)使用凝膠免疫層析法，將樣品中的克倫特羅與其抗體結(jié)合，形成膠體金紅色的復(fù)合物。(5)觀察試紙條上膠體金紅色的變化，根據(jù)其密度的變化判斷克倫特羅的含量。四、研究結(jié)果及分析本研究采用Li等人的方法[1]，制備了克倫特羅抗體，并制作了一種簡(jiǎn)便、快速的膠體金免疫層析試紙條。該試紙條可以在5分鐘內(nèi)完成一次檢測(cè)，并可以檢測(cè)到低至10ng/mL的鹽酸克倫特羅。經(jīng)過(guò)比較檢測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)果，表明該試紙條具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn)。同時(shí)，與市面上的克倫特羅檢測(cè)試劑盒比較，該試紙條價(jià)格低廉，且具有更高的靈敏度和穩(wěn)定性。五、結(jié)論本研究開(kāi)發(fā)的鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析試紙條可以在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下，實(shí)現(xiàn)對(duì)鹽酸克倫特羅的快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，具有成本低、應(yīng)用范圍廣泛等優(yōu)點(diǎn)。該試紙條的開(kāi)發(fā)為高血壓病的診斷和治療提供了一種新的方法，對(duì)實(shí)現(xiàn)高血壓的預(yù)防和控制具有重要的意義。參考文獻(xiàn)：[1]LiYL,WuQJ,ZhangW,etal.Preparationofmonoclonalantibodyagainstclonidinehydrochlorideandestablishment