非發(fā)酵菌群的分類鑒定

關(guān)于非發(fā)酵菌群的分類鑒定第一節(jié)非發(fā)酵菌概述非發(fā)酵菌（Nonfermenters）是指一大類不能以發(fā)酵方式（或不能以明顯發(fā)酵方式）分解葡萄糖的革蘭氏陰性無芽孢的需氧或兼性厭氧桿菌。它們在分類學(xué)上分別隸屬于不同的科、屬，但生理生化特性又很相似，故在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)中，常把它們當(dāng)作同一類菌群來對待。非發(fā)酵菌大多是條件致病菌，可引起各種感染，尤其是醫(yī)源性感染，近年來各國發(fā)病率逐年上升，已成為當(dāng)前醫(yī)院管理中的一個重要問題。第2頁,共71頁，2024年2月25日，星期天非發(fā)酵菌的種類很多，包括十幾個菌屬、幾十個種，有些還有生物型、亞型等。但與醫(yī)學(xué)關(guān)系密切的、具有臨床意義的有：假單胞菌屬、寡氧單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、黃桿菌屬、鮑特氏菌屬、金氏桿菌屬、不動桿菌屬、無色桿菌屬、莫拉氏菌屬、艾肯氏菌屬、土壤桿菌屬、軍團(tuán)菌屬。第3頁,共71頁，2024年2月25日，星期天但在臨床上用一般方法不能夠分離出來的細(xì)菌有：鮑特氏菌屬（百日咳鮑特氏菌）：初次分離對營養(yǎng)要求較高，在血瓊脂平板和巧克力瓊脂平板上均不能生長，必須在含有血液、甘油、馬鈴薯以及活性炭的包-金（Bordet-Gengou,B-G）二氏培養(yǎng)基上才能生長。故用一般的培養(yǎng)基不可能將其分離出來。第4頁,共71頁，2024年2月25日，星期天軍團(tuán)菌屬營養(yǎng)要求苛刻，普通培養(yǎng)基、血平板和巧克力平板均不生長；生長過程中需要多種微量元素如：鐵、鈣、鎂、錳、鋅、鉬等作為酶的協(xié)同因子；同時需要甲硫氨酸、半胱氨酸等特殊氨基酸才能生長。目前公認(rèn)的最適宜培養(yǎng)基是緩沖活性炭酵母浸出液，加上鐵、L-半胱氨酸和α-酮戊二酸組成的BCYEa（bufferedcharcoal–yeastextractagar）培養(yǎng)基。第5頁,共71頁，2024年2月25日，星期天因此在臨床上真正能分離出來且有臨床意義的非發(fā)酵菌群有：假單胞菌屬、寡氧單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、黃桿菌屬、鮑特氏菌屬（百日咳鮑特氏菌除外）、金氏桿菌屬、不動桿菌屬、無色桿菌屬、莫拉氏菌屬、艾肯氏菌屬、土壤桿菌屬。第6頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)非發(fā)酵菌群的初步識別

第7頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第8頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)、

非發(fā)酵菌群的屬間鑒別

第9頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第10頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第11頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（一）、氧化酶陰性菌群的

屬間鑒別

第12頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（二）、氧化酶陽性菌群的

屬間鑒別

第13頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第14頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)、非發(fā)酵菌群的屬內(nèi)鑒別

第15頁,共71頁，2024年2月25日，星期天一、假單胞菌屬和

寡氧單胞菌屬

假單胞菌屬屬假單胞菌科，該屬為嚴(yán)格的專性需氧的革蘭氏陰性桿菌，具有一端鞭毛，無莢膜、無芽孢。該菌屬在自然界中分布廣泛，營養(yǎng)要求不高，氧化酶試驗(yàn)均為陽性，是假單胞菌科的代表菌屬。第16頁,共71頁，2024年2月25日，星期天假單胞菌科由假單胞菌屬及其親緣關(guān)系密切的菌屬（以前大部分屬于假單胞菌屬）組成。用于假單胞菌科分類的方案有兩個：其一：根據(jù)細(xì)菌的表型特征分為七個主要的組，即：產(chǎn)熒光組、斯氏族、產(chǎn)堿組、食酸組、類鼻疽組、敏捷—德氏組、缺陷組。第17頁,共71頁，2024年2月25日，星期天其二：根據(jù)rRNA—DNA同源性將假單胞菌科分為5個rRNA同源群，即：rRNA同源群Ⅰ—包括銅綠假單胞菌等12個種；rRNA同源群Ⅱ—包括伯克霍爾德菌屬等7個種；rRNA同源群Ⅲ—包括食酸叢毛單胞菌等7個種；rRNA同源群Ⅳ—微小假單胞菌等8個種；rRNA同源群Ⅴ—寡氧單胞菌等64個種。此外，還有4個種屬于rRNA同源群未知的假單胞菌。第18頁,共71頁，2024年2月25日，星期天上述分類中，不管采用哪種分類，臨床上常見的只有兩個種，即假單胞菌屬的銅綠假單胞菌和寡氧單胞菌屬的嗜麥芽寡氧單胞菌。第19頁,共71頁，2024年2月25日，星期天1、假單胞菌屬

該菌屬的代表種為銅綠假單胞菌。該菌早在1872年由施羅頓（Schroeten）首先命名，因其在代謝過程中能產(chǎn)生水溶性蘭綠色色素，在感染部位能形成蘭綠色膿液，故稱綠膿桿菌。該菌除分布在水源、土壤、空氣中外，亦存在于正常人的皮膚、呼吸道、腸道中，是非發(fā)酵菌群中最常見的條件致病菌。第20頁,共71頁，2024年2月25日，星期天銅綠假單胞菌鑒別要點(diǎn)：

（1）、銅綠假單胞菌在普通瓊脂培養(yǎng)基上能產(chǎn)生水溶性綠色素，使整個培養(yǎng)基變?yōu)榫G色。（2）、在血平板上經(jīng)35—37℃，18—24h培養(yǎng)可表現(xiàn)為：菌落灰綠色、半透明、大而扁平、表面濕潤、邊緣不齊；有金屬光澤；有生姜樣芳香氣味；菌落周圍有寬大的蘭綠色透明溶血環(huán)。（3）、該菌為專性需氧菌，氧化酶和觸酶均陽性；O/F試驗(yàn)“O型”；無芽孢、無莢膜，菌體一端有單鞭毛，運(yùn)動活潑。第21頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第22頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第23頁,共71頁，2024年2月25日，星期天2、寡氧單胞菌屬

該菌屬原屬于假單胞菌屬，在1961年根據(jù)其鞭毛特征被命名為嗜麥芽假單胞菌；1983年根據(jù)核酸同源性和細(xì)胞脂肪酸組成等歸入黃單胞菌屬，命名為嗜麥芽黃單胞菌；但由于其無黃單胞菌素、無植物病原性，能在37℃生長等與其它黃單胞菌不同，故在1993年又被命名為嗜麥芽寡氧單胞菌。第24頁,共71頁，2024年2月25日，星期天該菌的生長特性、營養(yǎng)要求、及其它生物學(xué)性狀與銅綠假單胞菌極為相似，所不同的是氧化酶陰性，這是與假單胞菌屬相區(qū)別的重要特性；此外，該菌一端具有3根以上叢鞭毛，運(yùn)動活潑，可與氧化酶陰性的不動桿菌屬和副百日咳鮑特氏菌相鑒別。第25頁,共71頁，2024年2月25日，星期天3、鼻疽（類鼻疽）伯克霍爾德菌鼻疽伯克霍爾德菌（Burkholderiamallei）和類鼻疽伯克霍爾德菌（Burkholderiapseudomallei）是鼻疽與類鼻疽的病原菌，屬假單胞菌屬rRNA同源群的第二群；2000年被NCCLS/CLSI（NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards/ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）列為可能成為生物恐怖的細(xì)菌。第26頁,共71頁，2024年2月25日，星期天這兩種細(xì)菌均對馬、驢、騾、貓、狗等動物感染。人類感染是經(jīng)傷口或粘膜、呼吸道而進(jìn)入體內(nèi)。急性患者可有高熱、衰竭等全身癥狀；皮膚、皮下、鼻粘膜出現(xiàn)結(jié)節(jié)和潰瘍；肺鼻疽病有胸痛、咳嗽、咳血等癥狀。細(xì)菌進(jìn)入血流，可形成菌血癥及內(nèi)臟膿腫，最后常因膿毒血癥而死亡。慢性患者全身癥狀不定，可有皮膚、皮下潰瘍，其潛伏期可達(dá)數(shù)年。從患者的血液、尿液、痰液、膿液、創(chuàng)口分泌物中均可分離出上述兩菌。第27頁,共71頁，2024年2月25日，星期天二、產(chǎn)堿桿菌屬

主要特性：1、

產(chǎn)堿桿菌屬為一群革蘭氏陰性專性需氧菌，具有周身鞭毛，多數(shù)無莢膜。2、

營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好；在液體培養(yǎng)基上可形成菌膜；在含蛋白胨的肉湯中產(chǎn)堿，使培養(yǎng)基pH上升到8.6以上，故名產(chǎn)堿桿菌。3、

除木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種可氧化分解木糖外，不分解任何糖類；氧化酶、觸酶均陽性；在O/F培養(yǎng)基中產(chǎn)生堿性反應(yīng)；IMViC試驗(yàn)為：—、—、—、+。第28頁,共71頁，2024年2月25日，星期天分類及鑒定；產(chǎn)堿桿菌屬目前分為3個種、兩個亞種和一個型，即：糞產(chǎn)堿桿菌、皮喬特產(chǎn)堿桿菌、木糖氧化產(chǎn)堿桿菌。木糖氧化產(chǎn)堿桿菌去硝化（脫硝）亞種；木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種。糞產(chǎn)堿桿菌Ⅱ型、第29頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第30頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第31頁,共71頁，2024年2月25日，星期天三、黃桿菌屬

黃桿菌屬細(xì)菌為無芽孢、無鞭毛的革蘭氏陰性桿菌。其主要特性有兩個：1、

在其生長過程中產(chǎn)生黃色素；2、

以微弱發(fā)酵的方式利用葡萄糖，但因其產(chǎn)酸量少而慢，需培養(yǎng)一周以上才能觀察到，故常被作為非發(fā)酵菌來對待。第32頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第33頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第34頁,共71頁，2024年2月25日，星期天黃桿菌屬目前共分為8個種和4個未命名的生物群。它們分別是：腦膜炎敗血黃桿菌、芳香黃桿菌、短小黃桿菌、水田黃桿菌、嗜醇黃桿菌、嗜糖黃桿菌、嗜溫黃桿菌、藪內(nèi)黃桿菌及黃桿菌Ⅱb、Ⅱe、Ⅱh、Ⅱi群。其中腦膜炎敗血黃桿菌、芳香黃桿菌、短小黃桿菌和黃桿菌Ⅱb群可引起人類疾病。第35頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第36頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第37頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（四）、鮑特氏菌屬

鮑特氏菌屬包括7個種：百日咳鮑特氏菌、副百日咳鮑特氏菌、支氣管腐敗鮑特氏菌、鳥鮑特氏菌、欣氏鮑特氏菌、霍氏鮑特氏菌和創(chuàng)口鮑特氏菌。其中前三種可引起人類疾病，具有較大的臨床價值。第38頁,共71頁，2024年2月25日，星期天主要特性：1、該屬細(xì)菌為GN無芽孢球桿菌。百日咳鮑特氏菌的光滑型菌株有莢膜；副百日咳鮑特氏菌和支氣管腐敗鮑特氏菌無莢膜。百日咳鮑特氏菌和副百日咳鮑特氏菌無鞭毛、不運(yùn)動；支氣管腐敗鮑特氏菌具有周身鞭毛，在18—24℃有動力而在37℃不能運(yùn)動。第39頁,共71頁，2024年2月25日，星期天2、該菌屬為專性需氧菌，百日咳鮑特氏菌初次分離時營養(yǎng)要求較高，需要有谷氨酸、L—脯氨酸、半胱氨酸及菸酸等營養(yǎng)物質(zhì)，但不需要X和V因子。在生長過程中形成過多的脂肪酸、重金屬鹽和H2O2等物質(zhì)能抑制其生長，因此在培養(yǎng)基中需加入血液、活性炭和離子交換樹脂等物質(zhì)來吸附多余的有害物質(zhì)，故該菌只能在鮑—金二氏培養(yǎng)基上生長，在普通瓊脂、麥康凱瓊脂、巧克力色血瓊脂及兔血瓊脂上均不能生長。副百日咳鮑特氏菌和支氣管腐敗鮑特氏菌營養(yǎng)要求不高，在上述培養(yǎng)基上均能生長。3、該菌屬細(xì)菌不分解糖類。其它生化反應(yīng)見下表。第40頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第41頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第42頁,共71頁，2024年2月25日，星期天

（五）、金氏桿菌屬

金氏桿菌屬是在1976年由Henriksen和Bover二氏提議設(shè)立的一個新屬。該屬的第一個種是金氏金氏桿菌。同年由Snell和Lapage提議增加了兩個種，即脫氮（去硝化）金氏桿菌和產(chǎn)吲哚金氏桿菌。所有這三個種在含有5%馬血清的O/F培養(yǎng)基中，均以發(fā)酵形式利用葡萄糖，但因發(fā)酵能力微弱，故常被看作非發(fā)酵菌。第43頁,共71頁，2024年2月25日，星期天主要特性：1、

本屬細(xì)菌為GN球桿菌，多成雙排列，有時呈短鏈狀；無芽孢、無鞭毛、不運(yùn)動。2、

營養(yǎng)要求較高，在不含血液的培養(yǎng)基中（如O/F培養(yǎng)基）須加入馬血清才能生長；不需要X或V因子。3、

在含血清的液體培養(yǎng)基中弱發(fā)酵葡萄糖。4、

氧化酶陽性，觸酶陰性，靛基質(zhì)陽性，不利用枸櫞酸鹽。

第44頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第45頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第46頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（六）、不動桿菌屬

不動桿菌屬的主要特性為：1、

該屬細(xì)菌是一群革蘭氏陰性球桿菌，常成雙排列、酷似雙球菌，故常被誤認(rèn)為奈瑟氏菌屬；又由于該菌具有保留結(jié)晶紫的特性（革蘭氏可變性），又易被誤認(rèn)為革蘭氏陽性球菌。該菌無芽孢、無鞭毛，部分菌株有莢膜。2、

該菌為專性需氧菌；營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好。3、本菌氧化酶陰性；硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性；多數(shù)菌株分解尿素；所有生物型均水解土溫—80。第47頁,共71頁，2024年2月25日，星期天不動桿菌屬隸屬于奈瑟氏菌科。該屬是分類和命名變化最大的一類細(xì)菌。最初被稱為“米馬菌”；后又相繼稱為“醋酸鈣細(xì)球菌”、“奈瑟氏球菌”、“Herella菌”、“莫拉氏菌”等。曾列入“米馬菌族、無色桿菌屬”。第48頁,共71頁，2024年2月25日，星期天1970年，莫拉氏菌及其類似菌的國際分類委員會提議將該菌屬列入奈瑟氏菌科不動桿菌屬，并確定該菌只有一個種，即醋酸鈣不動桿菌。1978年，Gilard等將醋酸鈣不動桿菌分成四個生物型，即：硝陰生物型、溶血生物型、產(chǎn)堿生物型和洛菲氏生物型。這一分類被《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》第八版所采納。這四種生物型的生化反應(yīng)及區(qū)別如下；第49頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第50頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第51頁,共71頁，2024年2月25日，星期天1985年，《臨床微生物學(xué)手冊》（ManualofClinicalMicrobiology）第四版中，將該菌屬分為一個種，兩個亞種，即醋酸鈣不動桿菌，硝陰亞種和洛菲氏亞種。1986年，法國巴斯德研究所的Bouvet和Grimont等應(yīng)用DNA雜交技術(shù)對不動桿菌屬進(jìn)行研究，將該屬分為17個雜交群（基因種）。但只有6個種有菌名。6個種中，臨床標(biāo)本分離到的絕大多數(shù)為鮑曼不動桿菌，其它菌種引起的感染較少見。這6個種及其生化反應(yīng)區(qū)別如下：第52頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第53頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第54頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（七）、無色桿菌屬

無色桿菌屬在《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》第九版中未被收入，但卻已被人們普遍接受。該菌屬細(xì)菌分兩個種，即木糖氧化無色桿菌和無色桿菌Vd群，后者又分為生物1型和生物2型。第55頁,共71頁，2024年2月25日，星期天該菌的主要特性為：1、

該菌為革蘭氏陰性桿菌，具有周身鞭毛，能運(yùn)動。2、

該菌為專性需氧菌，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好。3、

該菌氧化酶（+），觸酶（+），能氧化分解木糖，但對葡萄糖的氧化能力很弱，需5—7天才能分解。第56頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第57頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第58頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（八）、莫拉氏菌屬

該菌屬因在1895年由Morax氏發(fā)現(xiàn)，故命名。莫拉氏菌屬隸屬于奈瑟氏菌科，由于DNA/rRNA雜交結(jié)果表明它和布蘭漢氏菌屬有很近的親緣關(guān)系，故1994年《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》把布蘭漢氏菌屬也納入莫拉氏菌屬，并把二者分稱為莫拉氏菌屬的莫拉氏菌亞屬和布蘭漢氏菌亞屬。兩者的區(qū)別是：莫拉氏菌屬為球桿菌；而布蘭漢氏菌屬為雙球菌。第59頁,共71頁，2024年2月25日，星期天莫拉氏菌屬的主要特性為：1、

本屬細(xì)菌為革蘭氏陰性球桿菌，具多型性：幼齡菌為細(xì)桿狀；老齡菌多呈球狀；染色時不易脫色，有保留結(jié)晶紫的特性（革蘭氏可變性），此為該菌的重要特性。2、

該菌屬為專性需氧菌，營養(yǎng)要求較高。初分離時培養(yǎng)基中需加入血液、血清、胸水、腹水等營養(yǎng)物質(zhì)并在較高的濕度下（80—90%）才適于生長。3、

氧化酶+，觸酶+，一般不分解糖類；不產(chǎn)生H2S，IMViC為—、—、—、—/+。第60頁,共71頁，2024年2月25日，星期天莫拉氏菌屬與臨床有關(guān)的共7個種，即：腔隙（缺陷）莫拉氏菌，非液化莫拉氏菌，犬莫拉氏菌，林肯莫拉氏菌，奧斯陸莫拉氏菌，亞特蘭大莫拉氏菌，苯丙酮酸莫拉氏菌。后者現(xiàn)又改為苯丙酮酸嗜冷桿菌。第61頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第62頁,共71頁，2024年2月25日，星期天第63頁,共71頁，2024年2月25日，星期天（九）、艾肯氏菌屬

艾肯氏菌屬只有一個種，即侵蝕艾肯氏菌。其主要生物學(xué)性狀為：1、

本菌為革蘭氏陰性球桿菌，無芽孢、無莢膜、無鞭毛，不運(yùn)動。2、

為需氧菌，在需氧環(huán)境中初次分離時嚴(yán)格需要血紅質(zhì)，故常用血瓊脂或巧克力瓊脂進(jìn)行培養(yǎng)。次代培養(yǎng)對血紅質(zhì)要求不一。3、

本菌的生化反應(yīng)不活潑，既無氧化亦無發(fā)酵各種糖的能力。觸酶、尿素酶、吲哚及硫化氫均陰性；僅氧化酶和硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性。第64頁