自身抗體的檢測及應用

關于自身抗體的檢測及應用一、自身免疫

【概念】

當機體免疫系統(tǒng)受某種因素作用使自身免疫耐受削弱或破壞時，免疫系統(tǒng)會對自身成份包括正?；蜃冃缘慕M織、器官、細胞、蛋白質或酶類等自身抗原產生免疫應答反應，出現(xiàn)自身抗體或致敏淋巴細胞的這種現(xiàn)象稱為自身免疫。第2頁,共53頁，2024年2月25日，星期天一、自身免疫自身免疫可以是正常生理性的，例如：針對衰老或死亡的自體細胞。自身免疫也可以是病理性的，引起自身免疫病。第3頁,共53頁，2024年2月25日，星期天二、自身免疫性疾病

【概念】

在內因與外因的共同作用下，機體的自身免疫應答失控，反應過度，直接或間接破壞自身組織，并引起相應器官病變，導致臨床癥狀，則為自身免疫性疾病。分為器官特異性和全身性。第4頁,共53頁，2024年2月25日，星期天二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特點：（1）多數(shù)自身免疫性疾病是自發(fā)或特發(fā)性的，感染，藥物等外因可能有一定的影響。（2）患者血清中存在有高水平的γ－球蛋白。（3）患者血清中有高效價的自身抗體或出現(xiàn)與自身抗原反應的致敏淋巴細胞。（4）病損部位有變性的免疫球蛋白沉積，呈現(xiàn)以大量淋巴細胞和漿細胞浸潤為主的慢性炎癥。第5頁,共53頁，2024年2月25日，星期天二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特點：（5）病程一般較長，發(fā)作與緩解交替出現(xiàn)，僅有少數(shù)為自限性。（6）女性多男性，老年多于青少年。（7）有遺傳傾向。（8）應用腎上腺皮質激素等免疫抑制劑有效。（9）常有其它自身免疫病同時存在。（10）可復制出相似的動物疾病模型。第6頁,共53頁，2024年2月25日，星期天三、自身抗體

【概念】

由各種原因造成的機體B細胞產生針對自身組織成分的抗體，稱為自身抗體。自身抗體是自身免疫性疾病的重要標志，每種自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗體譜。第7頁,共53頁，2024年2月25日，星期天RA自身抗體譜及臨床意義RF 60％RA中出現(xiàn)，量與RA活 動性及嚴重性呈正相關。 亦在其它CTD出現(xiàn)抗CCP 在50％RA中出現(xiàn)（抗環(huán)瓜氨酸肽抗體） 特異性較高AKA（抗角蛋白抗體） 在40％RA陽性APF（抗核周因子） 在52％RA陽性抗RA33 RA陽性率為35％抗Sa 在部分RA陽性

以上抗體陽性有助于早期RA及不典型RA的診斷和早期開展治療，改善預后第8頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身抗體與疾病的關系

某些自身抗體對某種疾病的診斷具有高度特異性，已經(jīng)成為該病的血清標記抗體或特異性抗體。某些自身抗體與疾病的活動性有相關性，少數(shù)自身抗體參與了免疫病病理性損傷。第9頁,共53頁，2024年2月25日，星期天特異性較強的自身抗體抗Sm 系統(tǒng)性紅斑狼瘡抗Scl-70 系統(tǒng)性硬化癥抗SSA/SSB 干燥綜合征抗CCP 類風濕關節(jié)炎第10頁,共53頁，2024年2月25日，星期天抗體滴度的高低可判斷疾病的活動性抗雙鏈DNA SLEaCL SLE、磷脂抗體綜合征RF 類風濕關節(jié)炎第11頁,共53頁，2024年2月25日，星期天預測疾病的預后及臨床亞型抗Jo-1 皮肌炎合并肺間質病變抗Scl-70 彌漫性系統(tǒng)性硬化抗rRNP 狼瘡腦病第12頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身抗體的意義

自身免疫性疾病的診斷；疾病活動性的判斷；療效的觀察及預后；指導臨床用藥等；進行不同疾病的鑒別診斷。第13頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身抗體常用檢測方法第14頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身抗體的檢測方法：（1）酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）：該法檢測自身抗體快速、敏感及特異性高，但對抗原的要求很高，必須使用高質量的純化抗原，由于一種抗原只能檢測一種抗體，多種抗體的檢測就必須多種單獨的抗原，因此該法在臨床免疫實驗室的應用受到一定限制。第15頁,共53頁，2024年2月25日，星期天（2）酶免疫斑點(條帶)實驗

【優(yōu)點】將經(jīng)親和層析純化的抗原包被在固定的位置，每一種抗原只對應一條條帶，不會產生非特異性反應條帶，結果靈敏度高、特異好，判斷實驗結果簡單，每個反應區(qū)均有質控帶，可以顯示操作是正確，陰性與陽性的結果明顯，容易判斷，條帶顯色與抗體滴度相關。第16頁,共53頁，2024年2月25日，星期天(3)間接免疫熒光法(IFT):檢測ANA的金標準，具有很高的敏感性和特異性。第17頁,共53頁，2024年2月25日，星期天間接免疫熒光法原理將稀釋的血清與生物載片（反應區(qū)內固定有包被基質的生物薄片）溫育，如果樣本是陽性的，特異性IgG、IgA和IgM抗體與相應的核抗原結合。在第二次溫育時，熒光素標記的抗人抗體與結合在生物基質上的抗體反應，形成熒光顯微鏡下所觀察到的特異性熒光模式。第18頁,共53頁，2024年2月25日，星期天抗核抗體(ANA)是以自身真核細胞成分作為靶抗原的一組自身抗體的總稱，泛指各種核成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。第19頁,共53頁，2024年2月25日，星期天抗核抗體(ANA)均質型與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡核膜型與抗ds-DNA有關，多見于SLE，特別是有腎炎者第20頁,共53頁，2024年2月25日，星期天抗核抗體(ANA)斑點型與抗ENA有關，應進一步查特異性抗體核仁型多見于系統(tǒng)性硬皮病第21頁,共53頁，2024年2月25日，星期天項目檢驗方法SLE四項

ANA間接免疫熒光抗DS－DNA抗體間接免疫熒光抗組蛋白抗體ELISA抗核小體抗體ELISAENA系列

抗RNP免疫印跡、ELISA抗SM免疫印跡、ELISA抗SSA免疫印跡、ELISA抗SSB免疫印跡、ELISA抗JO-1免疫印跡、ELISA抗SCL-70免疫印跡、ELISA抗核糖體P蛋白免疫印跡、ELISARA三項

AKA（抗角質蛋白抗體）間接免疫熒光抗RA33ELISA抗CCP（抗環(huán)瓜氨酸肽抗體）ELISAANCA四項

P-ANCA（熒光模型為核周模型）間接免疫熒光C-ANCA（熒光模型為細胞質模型）間接免疫熒光MPO-ANCA（髓過氧化酶抗體）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗體）ELISA常見的自身抗體及其檢測方法(1)第22頁,共53頁，2024年2月25日，星期天(2)自身免疫肝炎七項

檢驗方法ANA間接免疫熒光抗LMA抗（肝細胞膜抗體）間接免疫熒光ASMA（抗平滑肌抗體）間接免疫熒光抗LKM（抗肝腎微粒體抗體）間接免疫熒光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗體）間接免疫熒光AMA（線粒體抗體）間接免疫熒光抗LSP（抗肝臟特異性蛋白抗體）間接免疫熒光RF三項

RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂綜合征三項（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗體）ELISAPT-IgMELISA抗β2-糖蛋白1抗體ELISA常見的自身抗體及其檢測方法第23頁,共53頁，2024年2月25日，星期天ds-DNA

判斷疾病活動性---ELISA

診斷疾病-----IFT第24頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身抗體檢測結果正確解讀檢測方法局限性：假陽性，假陰性臨床意義局限性：非特異性，生理性，疾病前期臨床表現(xiàn)陽性，實驗室檢查陰性實驗室檢查陽性，臨床表現(xiàn)陰性第25頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身免疫病自身抗體非常復雜SLE患者中存在100多種自身抗體SeminArthritisRheum.2004Oct;34(2):501-37.第26頁,共53頁，2024年2月25日，星期天自身免疫病自身抗體非常復雜APS患者中存在30種自身抗體JAutoimmun,2008.30(1-2):p.74-83.第27頁,共53頁，2024年2月25日，星期天NEnglJMed2003;349:1526-33.疾病預警自身抗體在SLE發(fā)病前9.4年出現(xiàn)第28頁,共53頁，2024年2月25日，星期天疾病預警AMA在PBC發(fā)病前10年出現(xiàn)第29頁,共53頁，2024年2月25日，星期天臨床復雜性急性肝衰患者出現(xiàn)Ｍ2和PBC特異性抗體第30頁,共53頁，2024年2月25日，星期天臨床復雜性抗CCP抗體在丙肝中8.5℅第31頁,共53頁，2024年2月25日，星期天指標陰性是否意味著疾病的排除？指標陽性意味著什么？第32頁,共53頁，2024年2月25日，星期天特異性的局限各指標與對應疾病之間：如SLE抗Sm抗體特異性99%

敏感性僅為25%RARF陽性可出現(xiàn)在SLE,pSS,SSc,慢性肺結核，高球蛋白血癥等，5%正常人可出現(xiàn)低滴度的RF。第33頁,共53頁，2024年2月25日，星期天“自相矛盾”的結果

ANA(間接免疫熒光法)陽性，靶抗原陰性ANA(間接免疫熒光法)陰性，靶抗原陽性（膜條法），占10%，為客觀存在ANCA：熒光法陰性，但靶抗原陽性（5%）第34頁,共53頁，2024年2月25日，星期天特異性指標陽性，人無相應癥狀健康人---一過性陽性（感染、焦慮、疲勞等），2月后復查可能轉陰或者下降。貌似健康人---檢測—自身抗體（微觀）影像---組織表現(xiàn)---器官（最晚）患者---但不是自身免疫性疾病，如傳染病，觀察滴度變化，一般會下降自身免疫性疾病---但不是指標對應的疾病

第35頁,共53頁，2024年2月25日，星期天

自身抗體檢測結果的解釋疾病標記（志）性自身抗體疾病特異性自身抗體疾病相關性自身抗體疾病非特異性自身抗體生理性自身抗體疾病前期存在檢測方法及檢測程序局限性檢測質量:假陰性﹑假陽性解讀困難第36頁,共53頁，2024年2月25日，星期天四、常見自身抗體的檢測及應用

自身抗體種類很多，這里只是簡單介紹幾種常見的自身抗體的檢測：（1）類風濕因子（RF）（2）抗ENA抗體譜

第37頁,共53頁，2024年2月25日，星期天類風濕因子（RF）的檢測及應用RF是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體，可與人或動物的變性IgG結合，而不與正常IgG發(fā)生凝集，最多見于類風濕性關節(jié)炎患者，RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型為主要類型。第38頁,共53頁，2024年2月25日，星期天類風濕因子（RF）檢測方法：a.膠乳凝集試驗：只能定性或定量，靈敏度及特異性不變，只能檢測IgM型RF。b.速率散射比濁法：定量檢測，準確、快速，準確性和敏感性高于膠乳凝集試驗，也只能檢測IgM型RF。c.ELISA法：可檢出不同Ig類型的RF。第39頁,共53頁，2024年2月25日，星期天類風濕因子（RF）臨床應用RF在RA中的陽性率為70%~８０％，是診斷RA的重要標準之一。RF含量與病情的活動性和嚴重性成正比，持續(xù)高滴度的RF常提示RA病情活動，骨侵蝕發(fā)生率高，?？砂橛衅は陆Y節(jié)或血管炎等關節(jié)外表現(xiàn)，提示預后不良。第40頁,共53頁，2024年2月25日，星期天RF并非RA獨有的特異性抗體，對RA的診斷不具特異性

SLE30%SS70%~90%SSc20%~30%MCTD50%~60%5%以下的正常人RF陽性不等于一定就是RARF陰性也不等于一定就不是RA第41頁,共53頁，2024年2月25日，星期天抗ENA抗體譜

是以核內可提取核抗原為靶抗原的自身抗體的總稱，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗組蛋白抗體、抗核小體抗體、抗核糖體P-蛋白抗體、抗著絲點抗體,抗dsDNA。不同的自身免疫性疾病可以產生不同的抗ENA抗體，ENA抗體的檢測對自身免疫性疾病的診斷和鑒別具有重要意義。第42頁,共53頁，2024年2月25日，星期天抗ENA抗體譜檢測方法免疫印跡法（IBT）、ELISA法、雙擴散法對流免疫電流、金標法等。免疫印跡技術不需要純化抗原，靈敏度高、特異性強、操作簡單，是廣泛采用檢測抗ENA抗體的技術。第43頁,共53頁，2024年2月25日，星期天臨床意義nRNPSmSS-ASS-BScl-70Jo-1CENPBdsDNA核小體組蛋白核糖體P蛋白第44頁,共53頁，2024年2月25日，星期天nRNP高滴度的抗U1-nRNP抗體是混合性結締組織病（MCTD，夏普綜合征）的標志，陽性率為95-100％，抗體滴度與疾病活動性相關。在30-40％的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中也可檢出抗U1-nRNP抗體，但幾乎總伴有抗Sm抗體。第45頁,共53頁，2024年2月25日，星期天Sm抗Sm抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性標志，與抗dsDNA抗體一起，是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷指標，但陽性率僅為5-10％?？筍m抗體的檢測對早期,不典型的SLE或治療后的回顧性診斷具有很大幫助。第46頁,共53頁，2024年2月2