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2024/4/1第一節(jié)
工具酶的發(fā)現(xiàn)和
基因工程的誕生2024/3/31第一節(jié)
工具酶的發(fā)現(xiàn)和
基因工程的誕生2024/4/1基因工程又叫DNA重組技術(shù),是按人們?cè)竿M(jìn)行嚴(yán)格設(shè)計(jì),通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造更符合人們需要的新的生物類型與產(chǎn)品?;蚬こ谈拍?024/3/31基因工程又叫DNA重組技術(shù),是按人們?cè)竿?024/4/1基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過程結(jié)果實(shí)質(zhì)基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外基因DNA分子水平人類需要的基因產(chǎn)物剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)基因重組2024/3/31基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本2024/4/1基因工程的誕生時(shí)間:20世紀(jì)70年代理論基礎(chǔ):
DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)遺傳信息傳遞方式(中心法則)技術(shù)基礎(chǔ):
限制性核酸內(nèi)切酶
DNA連接酶質(zhì)粒載體2024/3/31基因工程的誕生時(shí)間:20世紀(jì)70年代2024/4/1
基因工程的基本內(nèi)容
基因操作基本步驟
基因操作的工具限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶運(yùn)載體2.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合4.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.提取目的基因2024/3/31基因工程的基本內(nèi)容基因操作基因操作限2024/4/1一基因操作的工具基因的大小以納米計(jì)算,要對(duì)它進(jìn)行剪切、拼接等操作,沒有非常精細(xì)的工具是不行的。進(jìn)行基因操作最少需要以下三種工具:1、基因的剪刀──限制性內(nèi)切酶(限制酶)一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列,并在特定的切割點(diǎn)上將DNA分子切斷。指一類酶,非一種酶。2024/3/31一基因操作的工具基因的大小以納米計(jì)算2024/4/11、限制性內(nèi)切酶(3).舉例:大腸桿菌的一種限制酶能識(shí)別GAATTC序列,并在G和A之間切開。(1)作用部位:磷酸二酯鍵(2)特點(diǎn):專一性,即識(shí)別特定核苷酸序列,切割特定切點(diǎn)。2024/3/311、限制性內(nèi)切酶(3).舉例:大腸桿菌的一2024/4/1(4)來源:主要從原核生物中分離
原因:限制酶是在生物體(主要是微生物)內(nèi)的一種酶,能將外來的DNA切斷,對(duì)自己DNA無害,保護(hù)細(xì)胞原有遺傳信息,由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的,故名限制性內(nèi)切酶。而真核生物一般有其他保護(hù)措施。
2024/3/31(4)來源:主要從原核生物中分離2024/4/1(5)作用結(jié)果:形成DNA片段末端①平末端:平切(相同部位)②黏性末端:錯(cuò)位切(不同部位)2024/3/31(5)作用結(jié)果:形成DNA片段末端①平末端2024/4/12024/3/312024/4/1
DNA被限制酶切斷后有兩個(gè)反向互補(bǔ)的“黏性末端”。被同一種限制酶切斷的幾個(gè)DNA具有相同的黏性末端,能夠通過互補(bǔ)進(jìn)行配對(duì)。2024/3/31DNA被限制酶切斷后有兩個(gè)反向互補(bǔ)的“2024/4/1什么叫黏性末端?
被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口,帶有幾個(gè)伸出的核苷酸,他們之間正好互補(bǔ)配對(duì),這樣的切口叫黏性末端。2024/3/31什么叫黏性末端?被限制酶切2024/4/1要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口?可產(chǎn)生幾個(gè)黏性末端?要切兩個(gè)切口,產(chǎn)生四個(gè)黏性末端。如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割,會(huì)怎樣呢?
會(huì)產(chǎn)生相同的黏性末端,然后讓兩者的黏性末端黏合起來,就可以合成重組的DNA分子了。2024/3/31要想獲得某個(gè)特定性狀的基因必須要用限制酶切2024/4/12、基因的針線──DNA連接酶(1)連接的部位:DNA雙鏈片段間的磷酸二酯鍵,不是氫鍵。2024/3/312、基因的針線──DNA連接酶(1)連接的2024/4/1(2)常用種類:①E.coliDNA連接酶:來源:大腸桿菌作用:連接黏性末端②T4DNA連接酶:來源:T4噬菌體作用:連接黏性末端、平末端2024/3/31(2)常用種類:①E.coliDNA連接酶2024/4/1(3)DNA連接酶與DNA聚合酶的比較DNA聚合酶DNA連接酶化學(xué)本質(zhì)作用部位模板蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)磷酸二酯鍵(單個(gè)脫氧核苷酸+片段)
磷酸二酯鍵(DNA雙鏈片段+DNA雙鏈片段)需要(DNA一條鏈)不需要2024/3/31(3)DNA連接酶與DNA聚合酶的比較DN2024/4/13、基因的運(yùn)輸工具——運(yùn)載體3.種類:質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒。1.作用:將外源基因送入受體細(xì)胞。2.條件:能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定地保存。具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn),使外源基因插入其中。具有某些標(biāo)記基因,以便進(jìn)行篩選。如抗菌素抗性
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