安捷倫1100中文教程

安捷倫1100中文教程作者:劉世良(站內(nèi)聯(lián)系TA)

發(fā)布:2006-05-05一、培訓(xùn)目的：

●基本了解1100LC硬件操作。

●掌握化學(xué)工作站的開機(jī)，關(guān)機(jī)，參數(shù)設(shè)定,學(xué)會(huì)數(shù)據(jù)采集,數(shù)據(jù)分析的基本操作。

二、培訓(xùn)準(zhǔn)備：

1、儀器設(shè)備：Agilent1100LC

●G1310A:(單元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。

●G1313A（自動(dòng)進(jìn)樣器）。

●G1316A（柱溫箱）。

●G1314A（VWD檢測器）。

●G1362A（示差檢測器）。

●G1315A/B(DAD檢測器)。

●G1321A(FLD檢測器)。

●色譜柱:ZorbaxeclipseXDBC8,150mm×4.6mmi.d。

2、溶劑準(zhǔn)備：

●色譜級(jí)純或優(yōu)級(jí)純乙腈（ACN）或甲醇。

●二次蒸餾水

基本操作步驟:

(一)、開機(jī)：

1、打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入WindowsNT（或Windows2000）畫面,并運(yùn)行BootpServer程序。

2、打開1100LC各模塊電源。

3、待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument1Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1100LC通訊，進(jìn)入的工作站畫面如下所示。

4、從“View”菜單中選擇“MethodandRuncontrol”畫面,單擊”View”菜單中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。

5、把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。

6、打開Purge閥。

7、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setuppump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。

8、設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。

9、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pumpcontrol選項(xiàng)，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無氣泡為止。

10、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊PumpControl選項(xiàng)，選中Off，單擊Ok關(guān)泵，關(guān)閉Purgevalve。

11、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setuppump選項(xiàng)，進(jìn)入Pump編輯畫面，設(shè)Flow：1.0ml/min。

12、單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如圖所示（以二元泵為例），輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積。單擊Ok。

(二)數(shù)據(jù)采集方法編輯：

1、開始編輯完整方法：

●從“Method”菜單中選擇“Editentiremethod”項(xiàng)，如上圖所示選中除“Dataanalysis”外的三項(xiàng)，單擊Ok，進(jìn)入下一畫面。

2、方法信息：

●在“MethodComments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。

●單擊Ok進(jìn)入下一畫面。

3、泵參數(shù)設(shè)定：（以二元泵為例）

●在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“SolventB”處輸入70.0,(A=100-B),也可Insert一行”Timetable”,編輯梯度。在“PressureLimitsMax”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。

●單擊Ok進(jìn)入下一畫面。

4、自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定:

●選擇合適的進(jìn)樣方式,如圖所示，進(jìn)樣體積1.0ul,洗瓶位置為6號(hào)?！癝tandardInjection”----只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功能?！癐njectionwithNeedleWash”----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在洗瓶中洗針?！癠seinjectorprogram”---可以點(diǎn)擊Edit鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。

●點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面。

5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定:

●在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more>>”鍵,如圖所示,選中”Sameasleft”---使柱溫箱的溫度左右一致。

●點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面。

6、VWD檢測器參數(shù)設(shè)定:

●在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm,在”Peakwidth(Responsetime)”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間,如>0.1min(2s)。

●在Timetable中可以“Insert”一行，輸入隨時(shí)間切換的波長，如1min，波長=300nm。點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面。

7、DAD檢測器參數(shù)設(shè)定:

●檢測波長:254nm,BW=30nm,參比波長=350nm,BW=100nm;

●檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬BW：一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無吸收或低吸收區(qū)流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。

常用的脫氣方法比較：

氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。

加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。

抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。

超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-15min，此法效果最差。

在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機(jī)利用膜滲透技術(shù)，在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

5、如何防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？

溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長會(huì)堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=4—7）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內(nèi)溶劑過濾器的堵塞。

A：請(qǐng)嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過濾。

B：請(qǐng)勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液

C：如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入0.0001---0.001M的疊氮化鈉.

D:在溶劑瓶內(nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。

E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。

堵塞后的處理法方法：

將過濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。

6、Agilent1100LC泵如何維護(hù)？

Agilent1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動(dòng)、流量準(zhǔn)確的流動(dòng)相，及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。

A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須脫氣、過濾。

B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選項(xiàng)。

C：關(guān)機(jī)前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。

D：及時(shí)更換PurgeValve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開PurgeValve時(shí)，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。

7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？

泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標(biāo)準(zhǔn)活塞密封圈，特別是長時(shí)間使用時(shí)，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-14202/pk）

***注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0—200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設(shè)為200bar。

8、使用梯度比例發(fā)時(shí)要注意那些事項(xiàng)？

當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，出現(xiàn)問題。強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。

9、在線真空脫氣機(jī)使用要注意那些事項(xiàng)？

一般來說，Agilent1100LC的真空脫氣機(jī)無需過多維護(hù)，只需注意幾個(gè)注意事項(xiàng)就可以了。

A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機(jī)腔體；更換不同類型的溶劑時(shí)，要先抽空，再抽滿。B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。

10、更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)?

在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，儀器的流動(dòng)相管路連接非常重要,一般Agilent1100LC在第一次安裝時(shí),均有受過專業(yè)培訓(xùn)的安裝工程師負(fù)責(zé)安裝,各種接頭會(huì)處理的非常完美?？蛻糁恍柙诟鼡Q色譜柱時(shí)注意接頭處理就可以了，一般柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或PEEK管線手?jǐn)Q街頭，當(dāng)完成第一次安張后，不銹鋼卡套已固定死，當(dāng)接不同的柱子時(shí)，要注意柱子接頭處的形狀和長度，否則會(huì)產(chǎn)生一個(gè)非常大的死體積。

下面是不同廠家柱子接頭的形狀和長度，請(qǐng)參考：

11、手動(dòng)進(jìn)樣閥需做那些維護(hù)，使用時(shí)要注意什么？

對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液后，或者進(jìn)濃度差異比較大的樣品時(shí)要用專用工具而不是用帶針頭的注射器沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。

注意事項(xiàng)