安捷倫1260高效液相操作規(guī)程

安捷倫液相1260高效液相色譜操作規(guī)程前期工作查找資料（最好是外文文獻）了解別人做該樣品時常用的流動相和固定相。如果還不清楚樣品是什么物質，最起碼也應該對其極性進行了解，為選擇合適的流動相和固定相打好基礎。流動相選擇注意事項：避免使用高粘度的溶劑作為流動相；所選用的流動相一定要與樣品相溶；各流動相之間可以很好的相溶；固定相選擇注意事項：正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（MethyleneChloride）等。反向色譜反向色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。準備工作用于液相色譜分析的樣品溶液使用前要經(jīng)過0.15μm過濾器過濾，必須達到均勻而無顆粒的狀態(tài)；流動相一定要選用色譜級別的（最好是默克、飛世爾、時聯(lián)等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4μm過濾器過濾，再用超聲波清洗儀脫氣處理20-30min；在連接柱子和色譜儀之前，閥件或管路一定要清洗干凈，（一般用異丙醇將管路清洗）儀器操作將所選擇的流動相加入相應的試劑瓶中：棕色瓶對應A泵，該瓶中只能加雙蒸水或娃哈哈純凈水；B、C、D泵根據(jù)需要添加。注：若流動相中有水、乙腈最好現(xiàn)用現(xiàn)處理，不宜放置太長時間。先打開計算機登陸windows操作系統(tǒng)，再將儀器的泵、色譜柱、檢測器打開，待計算機界面顯示連接好后，雙擊桌面“聯(lián)機”圖標，進入化學工作站，從“視圖”菜單中選擇“方法和運行控制”畫面。色譜柱設置（TCC檢測器參數(shù)設置）右擊TCC模塊中的空白區(qū)域，在“溫度”左側下面的方框內輸入所需的溫度，并選中它，右側選中“與左側相同”——使柱溫箱的溫度左右一致。VWD檢測器參數(shù)設定右鍵點擊VWD模塊視圖空白處，選擇“方法”進入VWD的參數(shù)設置界面波長設置VWD檢測波長峰寬設置為色譜圖中的預期的最窄峰。峰檢測器將忽略比峰寬設置窄很多或者寬很多的所有峰停止時間設置VWD停止分析時間。一般設置為“與泵一致”即可雜項當VWD與其他檢測器一起工作或者設定沖洗色譜柱的梯度方法時，關閉檢測器的燈，分析將停止。如果希望關閉檢測器的燈時也能進行分析，將“采集所需的等已打開”一欄不選定即可。時間表此處可以變化的參數(shù)包括自動平衡、改變波長、執(zhí)行掃描。進樣在設置“運行控制->樣品信息”后，將手動進樣閥扳至“l(fā)oad”狀態(tài)進樣(將樣品裝入到定量環(huán)內)。進樣后，將手動進樣器扳至“inject”狀態(tài)，工作站自動開始記錄采集數(shù)據(jù)。分析完成后，將手動進樣閥扳至“l(fā)oad”狀態(tài)，用定量環(huán)的5倍體積左右的甲醇清洗定量環(huán)，再在“inject”狀態(tài)下清洗排空管路。清洗進樣口，防止殘留樣品污染下次進樣。注：手不要拿注射器的針頭和有樣品的部位，不要有氣泡，吸樣時要慢、快速排出再慢吸，反復幾次，10μL注射器金屬針頭部分體積0.6μL，有氣泡也看不到，多吸1-2μL把注射器針尖朝上，氣泡上走到頂端，再推動針桿排除氣泡，進樣的速度要快，每次進樣要保持相同的速度。在線信號檢測“視圖”中打開在線信號，可以隨時了解樣品出峰情況。關機關閉檢測器的燈：G1314B/C/E/F(可變波長紫外檢測器)，關閉檢測器的燈后沖洗系統(tǒng)，可以延長檢測器燈的壽命。沖洗系統(tǒng)：沒有鹽緩沖溶液的流動相，(反相系統(tǒng))用85%~90%有機相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱或者適宜的流動相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。有鹽緩沖溶液的流動相，(反相系統(tǒng))用85%~90%水相+15%~10%有機相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱(反相系統(tǒng))，除去反相色譜柱與系統(tǒng)中的鹽溶液。然后用85%~90%有機相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。封存色譜柱：(反相系統(tǒng))用90%~95%有機相+10%~5%水相封存反相色譜柱，兩端封死。（如長時間存放可將柱子完全侵泡有機相內，以防用純有機相封存反相色譜柱，如果長期保存有機相會揮發(fā)）。關閉電腦：將泵流速逐步降至0ml/min，單擊“關閉”按鈕關閉所有模塊，退出化學工作站，關閉電腦。注意事項使用反向柱時，要注意正相溶液的比例最好不要超過5%，否則會對柱子產(chǎn)生影響。氘燈是易耗品，應最后開燈，不分析樣品時即關燈，洗柱子時應關燈。操作中常見問題的解決方法①寬峰：系統(tǒng)未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動相差不多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱校降低；溫度